في عالم الحياة المجهري ، يعد الحمض النووي جوهر المعلومات الوراثية لكل كائن حي ، وبناء مخططه مدى الحياة.تختلف آلية وخصائص الإنزيم المسؤول عن توصيل شظايا الحمض النووي هذه وفقًا لنوع الكائن الحي.مع تقدم العلوم ، يستمر هذا المجال في الكشف عن تنوع أربطة الحمض النووي في الكائنات الحية المختلفة ودورها المهم في الحياة.
ligase الحمض النووي هو إنزيم يعزز تفاعلات ربط شظايا الحمض النووي في الكائنات الحية.وتسمى هذه العملية رد فعل الربط ، وفي كل من الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي ، فإنها تشكل أساسا رابطة الفسفوديستر.
يتم تقسيم أنواع أربطة الحمض النووي بشكل رئيسي إلى فئتين: تعتمد على ATP و NAD+-المعتمد.يعد ATP العضوي غير المتجانس مسؤولاً بشكل أساسي عن توفير الطاقة في حقيقيات النوى (بما في ذلك البشر) ، في حين أن البكتيريا مثل E. coli تعتمد بشكل أساسي على NAD+.تتيح هذه الميزة للعلماء تحديد مصدر Ligases واستكشاف خصوصيتهم في أنواع مختلفة من الخلايا.
وفقًا للدراسات المبكرة في مختبر I. Robert Lehman ، تم شرح آلية رد فعل Ligase بالتفصيل.عند وجود شظتين من الحمض النووي ، يربط Ligase مجموعة 3'-hydroxyl (-OH) بمجموعة 5'-phosphate (-PO4) عن طريق تحفيز تكوين روابط الفوسفوديستر.رد فعل الربط هذا ضروري في النسخ المتماثل البيولوجي ، النسخ وإعادة تركيب الجينات.
أثناء الربط ، يجب أن تكون نهاية جزء واحد من الحمض النووي قريبة من جزء آخر من أجل تنفيذ رد فعل الربط.ومع ذلك ، فإن ذلك بالتحديد بسبب هذا الشرط قد يتم تقليل كفاءة العملية بشكل كبير في بعض الحالات.
تتأثر كفاءة تفاعل ربط الحمض النووي في المختبر بمجموعة متنوعة من العوامل ، بما في ذلك تركيز الإنزيمات والمتفاعلات ودرجة حرارة التفاعل ووقت الحضانة.في العديد من التجارب ، يعد التحكم في هذه المتغيرات أمرًا ضروريًا لتحسين كفاءة الاتصال.
على سبيل المثال ، Mg (2+) هو ميسر أثناء الحفز ، وسيحسن تركيزه العالي كفاءة الاتصال.سيؤدي التركيز المنخفض للغاية إلى اتخاذ رد فعل الربط النهائي إلى خطوة الحد من السرعة ، مما يؤدي إلى انخفاض كفاءة العملية بأكملها.بالإضافة إلى ذلك ، سيؤثر تركيز الحمض النووي أيضًا على أولوية تفاعلات مختلفة ، مما يؤثر على المنتج النهائي المنتجة.
يمكن تقسيم تفاعل الاتصال إلى اتصال نهاية لاصق واتصال نهاية مسطحة.تولد معظم إنزيمات التقييد نهايات لاصقة من أربعة تقطعت بهم السبل التي يمكن أن تقترن مع بعضها البعض لتشكيل اتصالات.عند إجراء اتصالات مسطحة ، نظرًا لعدم وجود نقاط نهاية بارزة ، تكون كفاءة هذه العملية أقل بكثير وتتطلب تحقيق تصادم عشوائي.
على الرغم من أن الاتصال المسطح لا يتطلب اقترانًا محددًا ، إلا أنه غير فعال نسبيًا.لذلك ، عند إجراء هذا التفاعل ، يكون من الضروري في كثير من الأحيان زيادة تركيز ligase للتعويض عن انخفاض الكفاءة.
في E. coli ، وجد الباحثون أن ligase الحمض النووي الخاص به يعتمد بشكل أساسي على NAD+، في حين أن البشر والكائنات الحية حقيقية النواة الأخرى لديهم مجموعة متنوعة من ligases الحمض النووي المعتمدة على ATP ، من بينها الجينات مثل LIG1 و LIG3 و LIG4. دور في العمليات البيولوجية المختلفة.الاختلافات الوظيفية والهيكلية لهذه الأربطة تجعل تطبيقها بشكل مختلف في الكائنات الحية.
تم استخدام البحث على ligase الحمض النووي على نطاق واسع في مجالات الهندسة الوراثية والتكنولوجيا الحيوية ، بما في ذلك استنساخ الجينات ، وإصلاح الحمض النووي ، إلخ.يستكشف العلماء أيضًا طرقًا جديدة للربط ، مثل الاستنساخ المبسط باستخدام Topoisomerases ، وحتى استكشاف طرق مجموعات الجينات ، مثل نظام استنساخ Gateway.هذه التطورات لا تحسن فقط كفاءة البحث ، ولكن أيضًا توفر المزيد من الاحتمالات لتطبيقات مثل العلاج الجيني.
من الفيروسات إلى البشر ، أظهرت ليجات الحمض النووي في الكائنات الحية المختلفة التنوع والاختلافات الرائعة ، وما هي أهمية هذه الاختلافات في البحث والتطبيق البيولوجي؟