<ص>
مع التقدم المستمر للعلوم والتكنولوجيا، أصبح تخليق البروتين الخالي من الخلايا (CFPS) تدريجيًا تقنية لا غنى عنها في مجالات البحوث البيولوجية والصيدلانية. تتيح هذه التقنية للباحثين استخدام الآلية البيولوجية داخل الخلية لتركيب البروتين المطلوب دون الاعتماد على الخلايا الحية.
ص>
المقدمة
<ص>
يعمل تخليق البروتين الخالي من الخلايا باستخدام مستخلصات الخلايا، والجمع بين مصادر الطاقة، والأحماض الأمينية، والعوامل المساعدة مثل المغنيسيوم، والحمض النووي الذي يحتوي على الجين المراد التعبير عنه. عن طريق تحلل الخلايا وإزالة الشوائب مثل جدران الخلايا، يحتوي مستخلص الخلية الذي تم الحصول عليه على العديد من الآلات البيولوجية اللازمة لتخليق البروتين. توفر الأنظمة الخالية من الخلايا مرونة أكبر في التحكم في البيئة الاصطناعية مقارنة بالتوليف التقليدي داخل الخلايا، مما يجعل تخليق البروتين الخالي من الخلايا أكثر فائدة لتطبيقات معينة.
ص>
إن بيئة تخليق البروتين الخالي من الخلايا ليست مقيدة بجدار الخلية أو التوازن الخلوي. ص>
المزايا والتطبيقات
<ص>
يتمتع تخليق البروتين الخالي من الخلايا بالعديد من المزايا الواضحة مقارنةً بالتخليق التقليدي في الجسم الحي، وأبرزها سرعته. يستغرق التحضير للتفاعلات مع CFPS عمومًا من يوم إلى يومين فقط، بينما قد يستغرق التعبير البروتيني في الخلايا الحية من أسبوع إلى أسبوعين. وبالإضافة إلى ذلك، فإن الطبيعة المفتوحة لـ CFPS تسمح للباحثين بالتحكم المباشر في البيئة الكيميائية، مما يسهل مراقبة أخذ العينات والتفاعل.
ص>
<ص>
بالإضافة إلى ذلك، CFPS قادر أيضًا على تصنيع البروتينات السامة بكفاءة، مما قد يشكل عائقًا عند استخدام الخلايا الحية. لذلك تعتبر الأنظمة الخالية من الخلايا مثالية للعديد من التطبيقات مثل:
ص>
- يؤدي دمج الأحماض الأمينية غير الطبيعية في هياكل البروتين إلى توسيع نطاق تطبيقات الشفرة الوراثية. لي>
- أظهر CFPS أيضًا إمكاناته في تصنيع الآلات النانوية ونماذج دوائر الحمض النووي. لي>
- تطوير جزيئات تشبه الفيروسات لاستخدامها في اللقاحات والعلاجات الدوائية وما إلى ذلك. لي>
العوامل المقيدة
<ص>
على الرغم من أن CFPS لديه العديد من المزايا، لا تزال هناك بعض التحديات. خاصة فيما يتعلق بتدهور الحمض النووي، فإن النيوكلياز الذاتية في مستخلصات الخلايا تكون مدمرة بشكل خاص لقوالب التعبير الخطي (LETs). وجد الباحثون أنه على الرغم من أن الحمض النووي الدائري (مثل البلازميدات) لا يتأثر بالنواة الطرفية، إلا أن LETs معرضة للهجوم من قبل هذه الإنزيمات بسبب خصائصها الهيكلية. لذلك، تركز العديد من الدراسات حاليًا على تحسين إنتاجية LETs لتحقيق نتائج أداء مماثلة لتلك الخاصة بالبلازميدات.
ص>
استخدم الباحثون بروتين لامدا جام البكتيري لحماية LET، وبالتالي زيادة إنتاجية CFPS بشكل ملحوظ. ص>
أنواع الأنظمة الخالية من الخلايا
<ص>
المستخلصات الخالية من الخلايا المستخدمة حاليًا مشتقة بشكل أساسي من الإشريكية القولونية (E. coli)، وخلايا الدم الحمراء للأرانب، وجنين القمح، وخلايا الحشرات، والخميرة، وما إلى ذلك، وجميعها متاحة تجاريًا. يعد مستخلص E. coli هو الخيار الأكثر شيوعًا نظرًا لتكلفته المنخفضة وإنتاجيته الفعالة. ومع ذلك، إذا تم إجراء تعديلات لاحقة متعددة على البروتين، فيجب تحديد نظام حقيقيات النواة المقابل للحصول على أداء أفضل.
ص>
عند اختيار مقتطف، يجب أخذ الاعتبارات بناءً على نوع التعديل اللاحق المطلوب والإنتاجية والتكلفة. ص>
خلفية تاريخية
<ص>
يعود تاريخ تخليق البروتين الخالي من الخلايا إلى أكثر من 60 عامًا. منذ التجارب الأولى التي أجراها مارشال نيرنبرج وهاينريش ج. ماثاي في المعاهد الوطنية للصحة في عام 1961، استخدموا نظامًا خاليًا من الخلايا لترجمة سلسلة من الحمض النووي الريبوزي متعدد اليوراسيل. تسلسلات وتم تصنيعها بنجاح فقط الببتيدات المحتوية على فينيل ألانين مما أدى إلى إنشاء العلاقة بين المشفر والحمض الأميني وشجع على مواصلة تطوير البيولوجيا الجزيئية.
ص>
<ص>
إن تطوير تكنولوجيا تخليق البروتين الخالي من الخلايا وآفاق تطبيقها المتنوعة يجعل العلماء يفكرون فيما إذا كان بإمكان العلوم والتكنولوجيا المستقبلية اختراق الحدود الحالية وتحقيق المزيد من النتائج المذهلة مع استمرار العلماء في استكشاف أسرار الحياة.
ص>