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La chimie magique de la méthode Bradford : comment détecter le secret d'une protéine avec une goutte de colorant ?
Depuis son développement en 1976 par Marion M. Bradford, le test protéique de Bradford est devenu un outil indispensable dans la recherche biochimique. Cette méthode spectroscopique rapide et précise permet de mesurer la concentration de protéines en solution et est connue pour sa dépendance à la composition en acides aminés. La méthode Bradford est non seulement simple et facile à réaliser, mais également très sensible, ce qui la rend de plus en plus utilisée dans les laboratoires.
La méthode Bradford est basée sur la mesure du changement de couleur des colorants phtalocyanines et est mesurée quantitativement en observant l'interaction entre différentes protéines et les colorants.
Principe
Le test de Bradford est une méthode de mesure colorimétrique des protéines basée sur le changement d'absorbance du colorant bleu de phtalocyanine G-250. Le colorant existe sous trois formes : anionique (bleu), neutre (vert) et cationique (rouge). Dans des conditions acides, le colorant rouge devient bleu et se lie à la protéine mesurée. S’il n’y a pas de protéine à lier, la solution restera brune.
Le colorant se lie aux groupes carboxyle et amino des protéines via les forces de van der Waals et les interactions chargées. Au cours de ce processus, le colorant rouge phtalocyanine transfère des électrons libres aux chaînes latérales ionisables de la protéine, détruisant son état natif et exposant une poche hydrophile, ce qui permet au colorant d'améliorer encore sa liaison grâce aux forces de van der Waals et aux interactions ioniques. protéines.
AvantagesLorsque le colorant se lie à la protéine, l'absorbance passe de 465 nm à 595 nm, ce qui fait de la lecture de l'absorbance à 595 nm un indicateur de concentration.
La méthode Bradford peut éviter les interférences de nombreuses autres méthodes de détection de protéines et présente une tolérance élevée aux substances telles que le sulfate de sodium (SDS), ce qui rend cette méthode applicable dans une variété d'environnements. De nombreux échantillons ne peuvent pas être mesurés de manière fiable dans la plage d'absorption de 280 nm, et la méthode de Bradford ne nécessite que l'ajout de colorant puis la mesure à 595 nm.
Cela rend son utilisation aussi simple que de mélanger l'échantillon avec du colorant bleu de phtalocyanine dans un tube à essai, puis de lire l'absorbance à une longueur d'onde de 595 nm. La méthode permet de mesurer de 1 à 20 μg de protéines et est très sensible. Le processus de test ne prend généralement pas plus de 30 minutes et peut être effectué à température ambiante.
La simplicité et la flexibilité du test Bradford en font un choix rapide et fiable pour la détection de protéines dans votre laboratoire.
Inconvénients
Bien que la méthode Bradford présente plusieurs avantages, elle présente une plage linéaire relativement étroite et nécessite une dilution avant l’analyse, ce qui peut entraîner un empilement d’erreurs. De plus, lorsque l’échantillon contient certaines conditions de base ou des concentrations élevées de détergents, cela peut interférer avec les résultats du test. De plus, cette méthode peut ne pas être suffisamment précise pour détecter certains types de protéines, comme le collagène.Cela signifie que lors de la réalisation du test de Bradford, les scientifiques doivent prêter attention à la composition et aux effets possibles des réactifs utilisés pour garantir l'exactitude des résultats.
Orientation du développement futur
À mesure que la recherche scientifique progresse, le test protéique de Bradford continue d'évoluer. Une modification notable est l'introduction d'une petite quantité de SDS, qui multiplie par quatre la réponse de détection du collagène. Dans le même temps, cela réduit également l’absorption d’autres protéines non collagènes, ce qui rend les résultats du test plus précis.
Processus de fonctionnement
La procédure opératoire standard de la méthode Bradford est très simple. Par exemple, en utilisant la gammaglobuline plasmatique bovine brute comme étalon protéique, les paramètres sont de 200 à 1 500 μg/mL. Dans l'application de test, il vous suffit de diluer la solution standard de différentes concentrations, d'ajouter du colorant bleu de phtalocyanine, de laisser reposer 5 minutes, de lire l'absorbance à 595 nm, de tracer une courbe standard et de calculer la concentration de protéine inconnue.
La préparation et l’utilisation de la courbe standard rendent la méthode Bradford efficace et précise dans le calcul de la concentration en protéines.
Le test protéique de Bradford a émergé dans le domaine de la recherche scientifique en raison de ses caractéristiques uniques et pratiques. À mesure que la demande en matière d’analyses environnementales et d’échantillons augmente à l’avenir, l’applicabilité et l’importance de cette méthode seront encore renforcées. Dans ce monde scientifique en évolution rapide, pouvons-nous encore trouver des méthodes plus simples et plus efficaces pour révéler les mystères de la vie ?
