Investigation of the effect of Aflatoxin B1 and Aflatoxin G1 on DNA Hybridization by Using Electrochemical DNA Biosensor

Abstract

Biyomolekuler analizlerde yeni teknolojilerin gelismesi, elektrokimyasal sensor alanindaki calismalarin da katilmasiyla guncel bir konu olmustur. Bu calismada Aflatoksin B1 in (AFB1) ve Aflatoksin G1 in (AFG1) DNA hibridizasyonu uzerindeki etkisi, kalem grafit elektrot (PGE) kullanilarak elektrokimyasal yontemlerle analiz edildi. Bu amacla; guanin oksidasyon akimlarindaki degisiklikler, diferansiyel puls voltametrisi (DPV) ile birbirlerini eslenigi olan DNA baz sekanslari arasinda hibridizasyon olusmadan once ve sonra izlendi. Calismanin ilk asamasinda, yakalama probu islak adsorpsiyonla PGE yuzeyine immobilize edilirken prob derisimi ve adsorpsiyon suresi optimize edildi ve sonra, hedef prop ile hibritlesmeye tabi tutulurken hedef proba ait konsantrasyon ve hibridizasyon suresi optimize edildi. Ikinci asamada, hibridizasyon deneyleri, birinci asamada kullanilan yakalama probu yerine inosin modifiye edilmis yakalama probu kullanilarak tekrarlandi. Ancak, ilk asamadan farkli bir sekilde inosin modifiye edilmis prob, hibridizasyona tabi tutulmadan once 10 dakika sure ile 2 µg / mL ve 4 µg / mL AFB1 ile etkilestirildi ve ayni protokol, ayni kosullarda AFG1 icin de tekrarlandi. Hibridizasyondan sonra guanin oksidasyon akimindaki azalma, aflatoksinlerin DNA sekanslarinin hibridizasyonuna etkisinin bir sonucu olup, AFB1 ve AFGl in DNA uzerine genotoksik etkisinin bir gostergesidir. Guanin oksidasyon sinyalindeki azalmalar 2 µg/mL ve 4 µg/mL AFG1 icin % 18 ve % 26; 2 µg/mL ve 4 µg/mL AFB1 icin % 50 ve % 61 olarak bulundu. Sonuc olarak AFB1 in DNA uzerindeki genotoksik etkisi AFG1 e gore cok daha fazla olarak tespit edildi.