IDENTIFICACIÓN DE cDNAs DE Agave tequilana Weber Var. azul SIMILARES A FUROSTANOL GLICÓSIDO 26-O-β-GLUCOSIDASAS

Abstract

La furostanol glicósido 26-O-β-glucosidasa (F26G) participa en el último paso de la biosíntesis de saponinas esteroidales, lo que escinde la glucosa unida al hidroxilo del C26 del furostanol glucósido para permitir la formación del espirostano. A pesar de la existencia de numerosos estudios que muestran la diversidad estructural y actividad biológica de las saponinas de plantas, así como su reconocido potencial biotecnológico y farmacológico, pocas enzimas participantes en la ruta de biosíntesis de las saponinas esteroidales han sido estudiadas y sólo una enzima nativa tipo F26G ha sido purificada y caracterizada funcionalmente. En este estudio, mediante búsqueda por BLASTX en una base de datos de Agave tequilana Weber var. azul (Agave DB), se identificaron 46 ESTs (Expressed Sequence Tags) de DNA complementario (cDNAs) similares a la F26G de Asparagus officinalis, la mayoría provienen de cDNAs clonados a partir de tejidos florales (anteras y ovarios) o raíz; ambos órganos son productores de saponinas. Entre ellos, se identificaron seis ESTs cuyo alineamiento indica que representan a tres cDNAs diferentes entre sí. Estos ESTs se registraron en la base de datos dbEST de NCBI (National Center for Biotechnology Information), el cual fue el primer registro de secuencias nativas de cDNAs potencialmente codificantes similares a F26G en Agave. El tamaño de los cDNAs clonados y su alineamiento hacia el lado 5’ de las F26G conocidas sugieren que son cDNAs completos. Se diseñaron iniciadores diferenciales específicos para cada tipo de cDNA y se analizó por RT-PCR su expresión en tejidos vegetativos de A. tequilana. Se establecieron protocolos de PCR cuantitativo (qPCR) para estudios posteriores de regulación de su expresión génica. La información aquí reportada servirá como base para estudiar la función, regulación y actividad enzimática de las enzimas clonadas de Agave similares a F26G.