CD19 CAR-T细胞培养过程中PD-1蛋白、mRNA水平及细胞杀伤活性变化

Abstract

目的 探讨CD19 CAR-T细胞培养过程中其PD-1蛋白、mRNA水平及细胞杀伤活性变化。 方法 收集6例外周血PD-1高表达恶性淋巴瘤患者、6例健康志愿者的外周血T细胞，作为CAR-T培养的T细胞来源。流式细胞术检测PD-1蛋白表达、PCR法检测PD-1 mRNA水平，CCK-8法检测细胞增殖，LDH法检测细胞杀伤活性。 结果 ①PD-1高表达患者T细胞来源CD19 CAR-T细胞，与志愿者T细胞来源者相比，转染率无差异（P>0.05）；②PD-1高表达T细胞来源CAR-T细胞与PD-1抑制剂联合与否，以及健康志愿者CAR-T之间，细胞增殖差异无统计学意义（P>0.05）；③PD-1高表达T细胞与CAR-T细胞对淋巴瘤细胞株杀伤活性，低于二者联合PD-1抑制剂及志愿者CAR-T细胞（P<0.001），而PD-1高表达T细胞来源CAR-T细胞联合PD-1抑制剂与健康志愿者CAR-T细胞间差异无统计学意义（P>0.05）；④各组细胞培养过程中PD-1表达均下降，差异无统计学意义（P>0.05），但各组细胞培养过程中，PD-1 mRNA的变化差异无统计学意义（P>0.05）；⑤PD-1高表达T细胞来源CAR-T收获后，与PD-1抑制剂共培养与否，其PD-1表达差异无统计学意义（P>0.05），但CAR-T与淋巴瘤细胞株接触后，其PD-1表达随培养时间延长而增高，加入PD-1抑制剂可拮抗该作用；各组间PD-1 mRNA的变化差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 PD-1高表达T细胞来源CAR-T细胞与肿瘤细胞接触后，其PD-1表达随培养时间延长而增高；而包括PD-1抑制剂在内，不能改变其PD-1 mRNA的表达。