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Você sabia por que a mudança de cor de uma proteína revela sua concentração?
As proteínas desempenham papéis vitais em uma variedade de processos biológicos, portanto medir sua concentração é fundamental para muitas pesquisas e experimentos biomédicos. No entanto, os métodos de medição tradicionais muitas vezes requerem equipamentos específicos ou etapas complicadas, fazendo com que muitos pesquisadores enfrentem desafios ao realizar análises de proteínas. Para resolver esses problemas, em 1976, Marion M. Bradford inventou uma técnica simples e rápida para medir a concentração de proteínas, chamada ensaio de proteína de Bradford.
O ensaio de proteína de Bradford utiliza a mudança de cor para determinar a concentração de proteína, um processo que depende principalmente de um corante chamado Coomassie Brilliant Blue G-250.
De acordo com o método Bradford, quando uma solução proteica é combinada com o corante Coomassie Gray Blue G-250, a cor do corante muda de sua cor vermelha original para azul. A chave para esta mudança é que o corante se ligará de forma não covalente a certos aminoácidos da proteína num ambiente ácido, alterando assim a sua absorvância. Especificamente, o corante tem um pico de absorção de 465 nanômetros e, quando se liga à proteína, o pico de absorção muda para 595 nanômetros.
Essa mudança na absorção pode ser usada para estimar a concentração de proteína na amostra.
Este método não só tem as vantagens de alta sensibilidade e operação simples, mas também não é facilmente afetado por outros produtos químicos (como sódio, potássio ou certos açúcares, etc.). Isto é muito importante em muitas amostras que contêm impurezas. Porém, quando a concentração de SDS na amostra é muito alta, pode interferir na precisão do método, fazendo com que o índice de proteína não seja orientado corretamente. Ao enfrentar esse desafio, os pesquisadores ajustam constantemente as condições de medição e exploram métodos de análise alternativos para manter a precisão experimental.
Uma das principais vantagens do ensaio de proteína de Bradford é que ele pode ser concluído em apenas meia hora, economizando tempo e reduzindo custos experimentais. O procedimento padrão é extremamente simples. Basta misturar o reagente de Bradford com a amostra e, após uma breve espera, a medição do fotômetro pode ser realizada diretamente. Além disso, este método é aplicável a quase todos os tipos de proteínas, especialmente quando é necessário quantificar vestígios de proteínas. É extremamente sensível e pode medir com precisão amostras abaixo de 20 μg.
A sensibilidade e a simplicidade do ensaio de proteínas de Bradford permitem que os pesquisadores o utilizem de forma flexível para analisar uma variedade de proteínas.
À medida que a investigação científica avança, o ensaio da proteína de Bradford também enfrenta alguns desafios. Por exemplo, o intervalo do ensaio é relativamente curto, normalmente medindo entre 0 μg/mL e 2.000 μg/mL, o que força os pesquisadores a diluir ao analisar amostras, o que pode levar a erros de medição. Além disso, os resultados da medição do método de Bradford podem ser tendenciosos para determinadas proteínas, especialmente em amostras com maior teor de colágeno, o que torna o aprimoramento do método um foco de desenvolvimento futuro.
Outra melhoria digna de nota é que a adição de uma pequena quantidade de dodecil sulfato de sódio (SDS) durante o ensaio melhorará significativamente a precisão da detecção de proteínas essenciais, como o colágeno. Esta melhoria não só melhora a sensibilidade de detecção de proteínas semelhantes ao colágeno, mas também reduz a absorção de proteínas não colágenas.
À medida que a pesquisa continua nesta área, o ensaio de proteína de Bradford está se tornando mais amplamente utilizado. Não só são amplamente utilizados na biologia e na biomedicina, como também avançam ainda mais na compreensão das proteínas e das suas funções. Essa tecnologia pode não apenas acelerar o processo de pesquisa de proteínas, mas também fornecer dados básicos importantes para o desenvolvimento de novas resistências a medicamentos. Que pistas as mudanças de cor das proteínas podem nos fornecer que antes eram inesperadas?
