<р>
Благодаря постоянному развитию науки и техники бесклеточный синтез белка (БСБ) постепенно стал незаменимой технологией в биологических исследованиях и фармацевтике. Эта технология позволяет исследователям использовать биологические механизмы внутри клеток для синтеза желаемых белков без участия живых клеток.
р>
Введение
<р>
Бесклеточный синтез белка осуществляется с использованием клеточного экстракта в сочетании с источником энергии, аминокислотами, кофакторами, такими как магний, и ДНК, содержащей ген, который необходимо экспрессировать. В результате лизиса клеток и удаления примесей, таких как клеточные стенки, полученный клеточный экстракт содержит различные биологические механизмы, необходимые для синтеза белка. По сравнению с традиционным внутриклеточным синтезом бесклеточные системы позволяют более гибко контролировать среду синтеза, что делает бесклеточный синтез белка более выгодным для определенных применений.
р>
Среда для внеклеточного синтеза белка не ограничивается клеточной стенкой или клеточным гомеостазом. р>
Преимущества и применение
<р>
По сравнению с традиционным синтезом in vivo, бесклеточный синтез белка имеет много очевидных преимуществ, наиболее заметным из которых является его скорость. Подготовка реакции CFPS обычно занимает всего 1–2 дня, тогда как экспрессия белка в живых клетках может занять 1–2 недели. Кроме того, открытая природа CFPS также позволяет исследователям напрямую манипулировать химической средой, облегчая отбор проб и мониторинг реакций.
р>
<р>
Кроме того, CFPS может эффективно синтезировать токсичные белки, что создает препятствие при использовании живых клеток. Поэтому бесклеточные системы идеально подходят для многих применений, таких как:
р>
<ул>
Включение неприродных аминокислот в белковые структуры расширяет сферу применения генетического кода.
CFPS также продемонстрировал свой потенциал в синтетических наномашинах и моделях цепей нуклеиновых кислот.
Разработать вирусоподобные частицы для использования в вакцинах, лекарственных средствах и т. д.
Ограничивающие факторы
<р>
Несмотря на то, что система CFPS имеет множество преимуществ, некоторые проблемы все еще существуют. В частности, эндогенные нуклеазы в клеточных экстрактах особенно разрушительны для матриц линейной экспрессии (LET), особенно с точки зрения деградации ДНК. Исследователи обнаружили, что в то время как кольцевая ДНК (например, плазмиды) не подвержена воздействию терминальных нуклеаз, LET подвержена атакам со стороны этих ферментов из-за своих структурных характеристик. Поэтому в настоящее время многие исследования направлены на повышение производительности LET для достижения результатов, сопоставимых с показателями плазмид.
р>
Исследователи использовали белок бактериального фага λ gam для защиты LET, тем самым значительно улучшив выход CFPS. р>
Типы бесклеточных систем
<р>
В настоящее время используются в основном бесклеточные экстракты из Escherichia coli (E. coli), эритроцитов кролика, зародышей пшеницы, клеток насекомых и дрожжей, все из которых имеются в продаже. Экстракт E. coli является наиболее популярным выбором из-за его низкой стоимости и эффективного выхода. Однако если в белках выполняются множественные постмодификации, необходимо выбрать соответствующую эукариотическую систему для получения лучшей производительности.
р>
При выборе экстракта необходимо учитывать желаемый тип постмодификации, выход и стоимость. р>
Историческая справка
<р>
История бесклеточного синтеза белка насчитывает более 60 лет. В 1961 году Маршалл Ниренберг и Генрих Дж. Маттеи провели первый эксперимент в Национальном институте здравоохранения. Они использовали бесклеточную систему для трансляции последовательности полиурациловой РНК и успешно синтезировал только полипептиды, содержащие фенилаланин, тем самым установив связь между кодонами и аминокислотами и способствуя дальнейшему развитию молекулярной биологии.
р>
<р>
В целом, развитие технологии бесклеточного синтеза белка и разнообразные перспективы ее применения заставили ученых задуматься о том, смогут ли будущие наука и технологии еще больше прорваться через существующие границы и достичь более удивительных результатов, продолжая при этом исследовать тайны жизни.
р>