В современных биомедицинских и биотехнологических исследованиях технология разрушения клеток является ключевым процессом высвобождения биомолекул внутри клеток. Это не только фундаментальный шаг в генной инженерии и экспрессии белков, но и важный метод разработки лекарств и понимания болезней. Среди них широкое внимание получил «метод бисера» благодаря своей эффективности и универсальности. В этой статье будут объяснены принцип, процесс работы и преимущества «метода шариков» в различных приложениях.
В методе шариков обычно используются стеклянные, керамические или стальные шарики диаметром 0,1–2 мм, которые смешиваются с образцами клеток в водном растворе для разрушения. Эффективность этого процесса делает его лучшим выбором для многих лабораторий.
Этот метод был впервые разработан Тимом Хопкинсом в 1970-х годах. Во время работы образец клеток постоянно перемешивают или встряхивают вместе с гранулами. Шарики ударяют по клеткам с разной силой, вызывая разрыв клеточной мембраны и высвобождая находящиеся внутри биомолекулы. По сравнению с другими методами разрушения клеток, метод шариков характеризуется относительно мягким применением силы и способностью поддерживать превосходные мембранные или субклеточные структуры.
Метод шариков не только подходит для различных клеточных материалов, включая ткани и споры животных и растений, но также может обрабатывать очень маленькие образцы без проблем перекрестного загрязнения.
Преимуществами бисерного метода являются его эффективность, экономичность и оперативность. Одно исследование показало, что этот метод обеспечивает степень разрушения клеток более 95%. С практической точки зрения метод шариков позволяет обрабатывать партии: обычно за один эксперимент можно одновременно обрабатывать до 24 запечатанных пластиковых флаконов или центрифужных пробирок. Кроме того, важными факторами, влияющими на результаты, являются конструктивные соображения, используемые для смешивания шариков, такие как частота колебаний, расстояние колебаний, направление колебаний и т. д.
Метод шариков не только широко используется для лизиса дрожжей, но также подходит для различных типов клеток, от ежедневных лабораторных исследований до промышленного применения. Во многих научных экспериментах метод шариков постепенно вытеснил другие методы разрушения, поскольку он может лучше защитить чувствительные биологические макромолекулы и избежать денатурации образца, вызванной теплопроводностью.
Метод шариков хорошо работает при обработке термочувствительных белков и позволяет контролировать колебания температуры образца на высоких скоростях, тем самым уменьшая повреждение структуры белка.
Помимо метода шариков, существует множество других методов разрушения клеток. Среди них метод замораживания-пульверизации подходит для образцов с твердой внешней матрицей, а метод разрушения клеток под высоким давлением широко используется для типов клеток, которые трудно разрушить. Хотя каждый из этих методов имеет свои особенности, метод с шариками часто считается лучшим выбором с точки зрения эффективности и постоянства результатов.
С быстрым развитием наук о жизни постоянно внедряются новые технологии уничтожения, такие как технология цикла давления. Тем не менее, метод шариков по-прежнему остается классической и эффективной технологией разрушения клеток и, как ожидается, в будущем будет иметь больший потенциал в области разработки лекарств, генетических исследований и других областях. Успешное внедрение этой технологии зависит не только от навыков оператора, но и тесно связано с совершенствованием инструмента.
Как можно улучшить «метод шариков» в будущих исследованиях, чтобы адаптировать его к меняющимся потребностям биотехнологии?