Language
Country/Area
No result found
Làm thế nào để sử dụng công nghệ tìm kiếm kháng nguyên để khôi phục khả năng trực quan hóa protein?
Với sự tiến bộ liên tục của khoa học và công nghệ, công nghệ trực quan hóa protein đã trở thành một trong những phương pháp không thể thiếu trong nghiên cứu y sinh.Cụ thể, công nghệ hóa mô miễn dịch (IHC) cho phép các nhà nghiên cứu nhận ra và định vị các protein trong các mô sinh học thông qua sự liên kết của các kháng thể cụ thể với các kháng nguyên.Công nghệ này có ý nghĩa lớn để chẩn đoán các tế bào bất thường, chẳng hạn như mô ung thư.Tuy nhiên, quá trình hình dung của protein thường bị che khuất bởi các kháng nguyên trong quá trình cố định và xử lý.Tại thời điểm này, việc giới thiệu công nghệ tìm kiếm kháng nguyên là đặc biệt quan trọng.
Sự cần thiết của công nghệ tìm kiếm kháng nguyên
Kỹ thuật tìm kiếm kháng nguyên được thiết kế cho các thay đổi cấu trúc xảy ra trong quá trình cố định mẫu vật, có thể dẫn đến mặt nạ của các vị trí kháng nguyên.Thông thường, các mẫu cố định sẽ tạo ra các phản ứng liên kết ngang thông qua các bộ cố định như formaldehyd, gây ra sự tối nghĩa của các epitopes kháng nguyên.Bằng cách sử dụng công nghệ tìm kiếm kháng nguyên, chúng ta có thể khôi phục các kháng nguyên ẩn này, do đó cải thiện hình dung của protein.
Phương pháp phổ biến nhất để thu hồi kháng nguyên là xử lý nhiệt độ cao, thường là các phần ngâm trong bộ đệm, có thể phá hủy cấu trúc liên kết ngang và khôi phục khả năng tiếp cận với vị trí kháng nguyên.
Quá trình chuẩn bị mẫu
Khi thực hiện hóa mô miễn dịch, một loạt các bước chuẩn bị mẫu được yêu cầu, điều này rất quan trọng đối với kết quả nhuộm cuối cùng.Quá trình cơ bản thường bao gồm cố định, cắt, thu hồi kháng nguyên và ủ với kháng thể, v.v.
Cố định và cắt lát
Khắc phục là một bước quan trọng trong việc duy trì hình thái mô và 10% formaldehyd được đệm trung tính thường được sử dụng làm chất cố định.Sau khi hoàn thành việc cố định, mẫu cần được cắt, thường với độ dày 4-6 micron, có thể đảm bảo trình bày kháng nguyên đủ.Đồng thời, parafin phải được loại bỏ trước khi thực hiện phân chia.
Các phương pháp đặc biệt để tìm kiếm kháng nguyên
Kỹ thuật tìm kiếm kháng nguyên thường dựa vào các phương pháp vật lý hoặc hóa học để phá hủy các cấu trúc cố định và liên kết chéo.Có nhiều cách để điều trị nhiệt độ cao, và các kỹ thuật phổ biến bao gồm sưởi ấm lò vi sóng, tắm nước và hơi nước có áp suất.Tìm kiếm kháng nguyên cũng có thể cải thiện thêm cường độ tín hiệu cho các phần cố định bằng ethanol hoặc acetone.
Điều trị chống lại liên kết kháng thể không đặc hiệu cũng rất quan trọng, và nhuộm nền có thể được giảm hiệu quả bằng cách sử dụng dung dịch đệm chặn chuyên nghiệp hoặc huyết thanh bình thường.
Nhuộm và Trực quan hóa
Sau khi hoàn thành quá trình chuẩn bị mẫu, bước tiếp theo là thực hiện nhuộm mẫu.Quá trình này thường yêu cầu sử dụng các kháng thể được dán nhãn với các phóng viên hoặc enzyme phân tử nhỏ để dán nhãn cụ thể kháng nguyên quan tâm.Những dấu hiệu này có thể làm cho kháng nguyên có thể nhìn thấy dưới kính hiển vi.Tùy thuộc vào các phương pháp phát hiện khác nhau, kháng thể có thể là đơn dòng hoặc đa khoa, loại trước thường nhắm mục tiêu một epitope duy nhất của một kháng nguyên cụ thể và loại sau có thể nhận ra nhiều epitopes.
Chọn phương pháp phát hiện
Năm phương pháp phát hiện chính bao gồm phát hiện trực tiếp và phát hiện gián tiếp.Phát hiện trực tiếp tương đối đơn giản và có thể được thực hiện chỉ với một kháng thể được dán nhãn.Tuy nhiên, phương pháp phát hiện gián tiếp nhạy hơn vì nó cho phép nhiều kháng thể thứ cấp được dán nhãn liên kết với các kháng thể chính và hiệu ứng khuếch đại tín hiệu này giúp cải thiện độ chính xác của phát hiện.
Phân tích kiểm tra và tính toán
Sau khi nhuộm, cần phải quan sát hiệu suất của kháng nguyên dưới kính hiển vi.Việc sử dụng các chỉ số nhuộm như phương pháp quét (EDX) có thể thực hiện phân tích bán định lượng và định lượng về cường độ tín hiệu, làm cho việc so sánh các mẫu biểu hiện protein rõ ràng hơn.
Bản đồ biểu hiện protein
Các nhà nghiên cứu có thể sử dụng hóa mô miễn dịch để lập bản đồ biểu hiện protein trong các mô bình thường và tổn thương.Công nghệ này kết hợp công nghệ microarray mô và có thể hiển thị hiệu quả các mẫu biểu hiện protein trong các loại mô khác nhau.Cơ sở dữ liệu bản đồ protein của con người cung cấp một nền tảng tuyệt vời để giúp các nhà nghiên cứu hiểu cách phân phối protein trong các mô khác nhau.
Do tầm quan trọng của hóa mô miễn dịch trong lâm sàng, nó không chỉ có thể giúp chẩn đoán ung thư, mà còn cung cấp một cơ sở quan trọng để điều trị tiếp theo.Trong bối cảnh đó, chúng ta có thể giúp đỡ nhưng nghĩ về những công nghệ mới sẽ có sẵn trong tương lai sẽ cho phép chúng ta hiểu sâu hơn về các chức năng và chức năng của protein?
