在生物学界,显微镜的进步一直是揭示生命奥秘的重要工具。最近,光片萤光显微镜(LSFM)的出现改变了这一游戏规则,提供了更快的成像速度和出色的影像对比度,让研究人员能够在活细胞及完整器官中获得更清晰的视图。
光片萤光显微镜能以每秒数百至上千帧的速度捕捉3D影像,这在以往的技术中是难以想象的。
与传统的共焦显微镜相比,光片显微镜的侦测方式完全不同。在这种技术中,只有样品的一个薄层(通常是数百奈米到数微米厚)会被垂直照明,而这样的设计不仅能减少样品的光损伤,还能提高影像的对比度,让研究者能更敏锐地捕捉到样品内部的细微变化。
光片萤光显微镜的基本设置包括一个激光光束,通过圆柱透镜将光束扩展并聚焦,形成只在一个方向上的薄光片。这个薄光片照明了样品的特定部分,然后用标准显微镜物镜收集从样品中发出的萤光,并将其投影到影像感测器上。
由于使用了平面光的照明,光片萤光显微镜的成像速度可达传统点扫描方法的100到1000倍。
尽管光片显微镜的成像速度更快,但它也需要特别的样品架设方法。样品通常悬挂在显微镜下,或是安装在特定的支撑装置上。这些措施确保显微镜的照明和侦测光路能够正确对齐,以形成清晰的影像。
光片显微镜的成像模式通常涉及将样品移动穿过影像平面,而对于比影像感测器更大的样品,则需要进行横向推移。此外,研究者们还可以通过多视角的成像来进一步提高影像的解析度。
光片萤光显微镜的横向解析度与传统灭火萤光显微镜相当,依赖于检测物镜的能力和所使用光的波长。近年来的技术进展,如结构照明技术和超解析度显微技术,进一步增强了这一技术的能力,克服了传统显微镜的限制。
此外,结合适应光学技术的光片显微镜能在厚样品中取得更深层的影像,为这一技术的应用打开了新的大门。
光片萤光显微镜在发展生物学、神经科学以及药物开发等领域中发挥着至关重要的作用。这项技术不仅能够在几天内观察胚胎的发展过程,还能精确地追踪细胞的动态变化,这在许多传统显微镜下是无法做到的。
光片显微镜的出现使得我们能够以前所未有的方式探索和理解生命。
未来,随着技术的进一步进展,光片显微镜有潜力在更广泛的生物医学研究中占据重要地位,改变我们对生物世界的认知。这种强大的显微成像技术到底会如何影响我们对生命过程的理解呢?