紙層析(Paper chromatography)是一種用於分隔彩色化學物質或其他物質的分析方法。雖然這項技術目前主要用作教學工具,但在實驗室中,已被薄層層析等其他層析方法所取代。這種分析方法有三個組成部分:流動相、靜止相和支撐介質。流動相是一種在靜止相上通過毛細作用上升的溶液,而流動相通常是由非極性有機溶劑組成,而靜止相則是極性的無機溶劑水。此處,紙張作為靜止相的支撐,水分子被固定在紙的纖維網絡中的空隙中。
薄層層析和紙層析的主要區別在於,薄層層析的靜止相是吸附層(通常是硅膠或鋁氧化物),而紙層析則使用吸附性較差的紙張。
在紙層析的一種變體中,即雙向層析中,使用兩種溶劑並在此之間將紙張旋轉90度,這對於分離具有相似極性的複雜混合物(例如氨基酸)非常有用。
Rƒ值(Retention factor)是用來定義溶質所移動距離與溶劑所移動距離之間的比率。這個數值在層析中用來量化樣品在靜止相中的滯留程度,與流動相之間的區別。一般而言,Rƒ值以小數的形式表達。如果某溶液的Rƒ值為零,這意味著溶質仍然留在靜止相中,不會移動。當Rƒ值為1時,則表示溶質對靜止相沒有親和力,與溶劑前沿一起移動。
例如,假設某一化合物移動了9.9公分,而溶劑前沿移動了12.7公分,則Rƒ值可以表示為 Rƒ = 9.9/12.7 = 0.779
或 0.78。不同溶劑之間的Rƒ值會有所不同,這取決於實驗中的溫度和所用的溶劑。
紙層析可以用來測試化合物的純度和識別物質,因為這種技術相對快速且僅需少量材料。這種分離過程是基於分配原則進行的。物質會在靜止相與流動相之間分配,靜止相是保留在紙張纖維中的水,而流動相則是從靜止相上流過的開發溶液。
當一個彩色的化學樣品被放置在濾紙上時,顏色會隨著溶劑的運動而分離,根據分子和溶劑的極性進行溶解。
如果樣品中含有多種顏色,這意味著該樣品必然包含多種不同的分子。由於每種分子的化學結構不同,每種分子具有不同極性的可能性也很高,因此它們在溶劑中的溶解度會有所不同。這種不均勻的可溶性導致不同顏色的分子在紙上的不同位置分開,溶解度越高,固體分子上升的高度也就越高。
在這種方法中,溶劑會沿著紙張向下流動。流動相置於不斷滴加的液體中,樣本的點保持在紙頂部,溶劑則從上方流下。
在這種方法中,溶劑會從底部向上移動,樣本和溶劑都向上移動。這種方法對於分離有機和無機物質十分有效。
這種技術是上述兩種方法的混合版。在某個關鍵點,向上升的紙張部分可以折迴以轉變為向下淋洗的模式。
在圓形層析中,中間位置放置樣本的圓形濾紙,並將濾紙放置於含有溶劑的培養皿中。一旦溶劑開始升起,分子會在紙上形成同心圓。
雙向層析使用方形或矩形的紙張,樣品被應用於其中一個角落,然後進行90度的轉動以進行第二次的開發。
1943年,馬丁與辛基(Martin and Synge)發現了紙層析技術,這第一次提供了對植物組分的調查手段、分離與識別的工具。此後,1945年後該領域迅速發展,促進了多數在此技術下的研究工作。
這項技術的興起改變了科學界對於化學分離和分析方法的理解,並推動了許多相關研究的進展。
在今天這個分子和化學不斷被深入探索的時代,我們是否已經充分理解Rƒ值對其他分析技術的應用潛力?