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De la fixation des tissus à la coloration : connaissez-vous le mystérieux processus de l'immunohistochimie ?
L'immunohistochimie est une technique d'immunocoloration dont le cœur est la reconnaissance sélective d'antigènes (protéines) dans les cellules et les tissus grâce à des anticorps. Cette technique a évolué à l'origine de la technique d'immunofluorescence développée par Albert Hewitt Coons et d'autres en 1941. Au fil du temps, l’immunohistochimie est devenue très courante dans le diagnostic du cancer et la recherche fondamentale, aidant les scientifiques à explorer la distribution des biomarqueurs et des protéines différentiellement exprimées dans différents tissus biologiques.
Préparation des échantillons
L'immunohistochimie peut être appliquée à des tissus fixés et inclus dans de la paraffine, ou elle peut être réalisée sur des tissus congelés. Avant le prélèvement, une série d’étapes différentes sont nécessaires en fonction de la manière dont le tissu est préservé. Les étapes générales comprennent : une fixation appropriée, la récupération de l’antigène, l’incubation avec des anticorps primaires et une incubation ultérieure avec des anticorps secondaires.
Préparation et fixation des tissus
Les tissus fixes sont essentiels au maintien de la structure des tissus et de la forme des cellules. La formule du fixateur, le rapport fixation/tissu et le temps de fixation affecteront considérablement les résultats finaux. Habituellement, du formol tamponné neutre à 10 % est utilisé comme fixateur et le temps de fixation est généralement de 24 heures à température ambiante.
Tranche
La section des échantillons de tissus a été réalisée à l'aide d'un microtome. Pour les tissus inclus en paraffine, une épaisseur de 4 microns est la norme courante, tandis que l'épaisseur de cryosection est généralement de 4 à 6 microns. L’épaisseur des coupes est critique, car différentes épaisseurs peuvent affecter la visibilité de l’antigène. Une extrême prudence doit donc être prise lors de la réalisation d’immunohistochimie.
Récupération d'antigène
Dans les coupes de tissus fixées, la récupération de l'antigène rend les sites antigéniques visibles aux anticorps. Des ponts méthane ou des liaisons croisées de groupes amino peuvent se former pendant la fixation, empêchant la liaison des anticorps. La récupération de l'antigénicité cachée par chauffage et trempage dans un tampon est la méthode la plus courante de récupération d'antigène.
Échantillons tagués
Le marquage des échantillons peut être réalisé à l'aide d'anticorps marqués avec des composés fluorescents, des métaux ou des enzymes pour distinguer efficacement les antigènes cibles.
Méthode de détection
La méthode directe est une méthode de coloration en une seule étape, tandis que la méthode indirecte implique un anticorps primaire non marqué qui se lie d'abord à l'antigène cible, suivi de l'ajout d'un anticorps secondaire qui se lie à l'anticorps primaire. En raison de l’effet d’amplification du signal de la méthode indirecte, sa sensibilité est plus élevée et elle est largement utilisée dans la détection de plusieurs antigènes.
Détection des molécules rapporteuses
Les molécules rapporteuses détectées varient en fonction de la méthode de détection, les plus courantes étant la détection des chromogènes et de la fluorescence. En immunohistochimie chromogène, les anticorps se lient généralement aux enzymes et produisent une couleur visible en présence d'un substrat chromogène. Lors de la détection par immunofluorescence, les anticorps sont marqués avec un fluorophore.
Application en pratique clinique
Les techniques d'immunohistochimie jouent un rôle important dans la pathologie chirurgicale diagnostique, en particulier dans l'immunophénotypage des tumeurs (par exemple, l'identification des marqueurs du cancer du sein). Ses applications incluent les neurosciences et le diagnostic des tumeurs, aidant les chercheurs à explorer le comportement des protéines dans des tissus spécifiques.
Faire face aux défis
Dans les techniques d'immunohistochimie, plusieurs étapes peuvent entraîner différents problèmes, tels qu'une coloration de fond excessive ou un marquage antigénique insuffisant.
Pour résoudre ces problèmes, les chercheurs doivent optimiser la qualité et la technologie des anticorps.
Conclusion
L'immunohistochimie n'est pas seulement une technique de détection efficace, elle permet également de découvrir et de comprendre la répartition des protéines dans les tissus biologiques. À mesure que la technologie progresse, son champ d’application dans les domaines cliniques et de recherche continuera de s’étendre. Êtes-vous prêt à explorer les nouveaux horizons que cette technologie pourrait ouvrir ?
