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Comment utiliser la technologie de recherche d'antigène pour restaurer les capacités de visualisation des protéines?
Avec l'avancement continu de la science et de la technologie, la technologie de visualisation des protéines est devenue l'une des méthodes indispensables de la recherche biomédicale.En particulier, la technologie d'immunohistochimie (IHC) permet aux chercheurs de reconnaître et de localiser les protéines dans les tissus biologiques par la liaison d'anticorps spécifiques aux antigènes.Cette technologie est d'une grande importance pour diagnostiquer des cellules anormales, telles que les tissus cancéreux.Cependant, le processus de visualisation des protéines est souvent obscurci par les antigènes pendant l'immobilisation et le traitement.À l'heure actuelle, l'introduction de la technologie de recherche d'antigène est particulièrement importante.
La nécessité de la technologie de recherche d'antigène
Les techniques de recherche d'antigènesont conçues pour les changements structurels qui se produisent pendant la fixation des échantillons, ce qui peut conduire au masquage des sites d'antigène.Habituellement, les échantillons fixes produiront des réactions de réticulation à travers des fixatifs tels que le formaldéhyde, provoquant l'obscurité des épitopes de l'antigène.En utilisant la technologie de recherche d'antigène, nous pouvons restaurer ces antigènes cachés, améliorant ainsi la visualisation des protéines.
La méthode la plus courante pour la récupération de l'antigène est un traitement à haute température, généralement des sections de trempage dans le tampon, qui peuvent détruire la structure réticulée et restaurer l'accessibilité au site de l'antigène.
Processus de préparation des échantillons
Lors de l'exécution d'immunohistochimie, une série d'étapes de préparation des échantillons est nécessaire, qui sont cruciales pour le résultat final de la coloration.Les procédures de base comprennent généralement la fixation, la sectionnement, la récupération de l'antigène et l'incubation avec des anticorps, etc.
Fixation et tranchage
La fixation est une étape clé dans le maintien de la morphologie des tissus, et le formaldéhyde tamponné neutre à 10% est généralement utilisé comme fixateur.Une fois la fixation terminée, l'échantillon doit être tranché, généralement avec une épaisseur de 4 à 6 microns, ce qui peut assurer une présentation suffisante d'antigène.Dans le même temps, la paraffine doit être supprimée avant d'effectuer une section.
Méthodes spéciales pour la recherche d'antigène
Les techniques de recherche d'antigène reposent généralement sur des méthodes physiques ou chimiques pour détruire les structures fixes et réticulées.Il existe de nombreuses façons de traiter les températures élevées, et les techniques courantes incluent le chauffage micro-ondes, les bains d'eau et la vapeur sous pression.La recherche d'antigène peut également améliorer encore la résistance du signal pour les sections fixées avec de l'éthanol ou de l'acétone.
Le traitementcontre la liaison non spécifique des anticorps est également crucial et la coloration de fond peut être réduite efficacement en utilisant un tampon de blocage sérique ou professionnel normal.
teinture et visualisation
Une fois le processus de préparation des échantillons terminée, l'étape suivante consiste à effectuer une coloration des échantillons.Ce processus nécessite généralement l'utilisation d'anticorps marqués avec des journalistes ou des enzymes de petites molécules pour étiqueter spécifiquement l'antigène d'intérêt.Ces marqueurs peuvent rendre l'antigène visible au microscope.Selon différentes méthodes de détection, l'anticorps peut être monoclonal ou polyclonal, le premier ciblant généralement un seul épitope d'un antigène spécifique, et le second peut reconnaître plusieurs épitopes.
Sélection de la méthode de détection
Les cinq principales méthodes de détection comprennent la détection directe et la détection indirecte.La détection directe est relativement simple et peut être effectuée avec un seul anticorps marqué.Cependant, la méthode de détection indirecte est plus sensible car elle permet à plusieurs anticorps secondaires marqués de se lier aux anticorps primaires, et cet effet d'amplification du signal améliore la précision de la détection.
Test et analyse de calcul
Après la coloration, il est nécessaire d'observer les performances de l'antigène au microscope.L'utilisation d'indicateurs de coloration telles que la méthode de balayage (EDX) peut effectuer une analyse semi-équitative et quantitative de l'intensité du signal, ce qui rend la comparaison des modèles d'expression des protéines plus évidente.
Carte de l'expression des protéines
Les chercheurs peuvent utiliser l'immunohistochimie pour cartographier l'expression des protéines dans les tissus normaux et lésions.Cette technologie combine la technologie de microréseaux tissulaires et peut afficher efficacement les modèles d'expression des protéines dans différents types de tissus.La base de données Human Protein MAP fournit une excellente plate-forme pour aider les chercheurs à comprendre comment les protéines sont distribuées dans différents tissus.
En raison de l'importance de l'immunohistochimie en clinicopathologie, elle peut non seulement aider à diagnostiquer le cancer, mais également fournir une base importante pour le traitement ultérieur.Dans ce contexte, nous ne pouvons pas nous empêcher de réfléchir à quelles nouvelles technologies seront disponibles à l'avenir qui nous permettra d'avoir une compréhension plus approfondie des fonctions et des fonctions des protéines?
