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항원 검색 기술을 사용하여 단백질 시각화 기능을 복원하는 방법?
과학 기술의 지속적인 발전으로 단백질의 시각화 기술은 생물 의학 연구에서 없어서는 안될 방법 중 하나가되었습니다.특히, 면역 조직 화학 (IHC) 기술을 통해 연구자들은 특정 항체의 항원에 대한 결합을 통해 생물학적 조직에서 단백질을 인식하고 국소화 할 수 있습니다.이 기술은 암 조직과 같은 비정상적인 세포를 진단하는 데 큰 의미가 있습니다.그러나, 단백질의 시각화 과정은 종종 고정화 및 처리 동안 항원에 의해 가려진다.현재 항원 검색 기술의 도입이 특히 중요합니다.
항원 검색 기술의 필요성
항원 검색 기술은 시편을 고정하는 동안 발생하는 구조적 변화를 위해 설계되어 항원 부위의 마스킹으로 이어질 수 있습니다.일반적으로, 고정 된 시편은 포름 알데히드와 같은 고정 장치를 통해 가교 반응을 일으켜 항원 에피토프의 모호함을 유발할 것이다.항원 검색 기술을 사용함으로써, 우리는 이러한 숨겨진 항원을 복원하여 단백질의 시각화를 향상시킬 수 있습니다.
항원 검색을위한 가장 일반적인 방법은 고온 처리이며, 일반적으로 완충제에 담그는 부분은 가교 된 구조를 파괴하고 항원 부위에 대한 접근성을 복원 할 수 있습니다.
샘플 준비 과정
면역 조직 화학을 수행 할 때, 일련의 샘플 준비 단계가 필요하며, 이는 최종 염색 결과에 중요합니다.기본 절차에는 일반적으로 고정, 절편, 항원 검색 및 항체와의 배양 등이 포함됩니다.
고정 및 슬라이싱
고정은 조직 형태를 유지하는 데 중요한 단계이며, 10% 중성 완충 포름 알데히드는 일반적으로 고정 제로 사용됩니다.고정이 완료된 후, 샘플은 일반적으로 4-6 미크론의 두께로 슬라이스해야하므로 충분한 항원 제시를 보장 할 수 있습니다.동시에, 단면화를 수행하기 전에 파라핀을 제거해야합니다.
항원 검색을위한 특수 방법
항원 검색 기술은 일반적으로 고정 및 가교 구조를 파괴하기 위해 물리적 또는 화학적 방법에 의존합니다.고온을 치료하는 방법에는 여러 가지가 있으며 일반적인 기술에는 전자 레인지 가열, 수조 및 가압 증기가 포함됩니다.항원 검색은 또한 에탄올 또는 아세톤으로 고정 된 섹션의 신호 강도를 더욱 향상시킬 수 있습니다.
비특이적 항체 결합에 대한치료는 또한 중요하며, 정상 혈청 또는 전문 차단 완충액을 사용하여 배경 염색을 효과적으로 감소시킬 수있다.
염색 및 시각화
샘플 준비 프로세스가 완료된 후 다음 단계는 샘플 염색을 수행하는 것입니다.이 과정은 일반적으로 관심있는 항원을 구체적으로 표지하기 위해 소분자 리포터 또는 효소로 표지 된 항체의 사용을 요구한다.이 마커는 항원을 현미경으로 보이게 할 수 있습니다.상이한 검출 방법에 따라, 항체는 단일 클론 또는 폴리 클로 날 일 수 있으며, 전자는 일반적으로 특정 항원의 단일 에피토프를 표적으로하고, 후자는 다수의 에피토프를 인식 할 수있다.
감지 방법 선택
5 가지 주요 탐지 방법에는 직접 탐지 및 간접 탐지가 포함됩니다.직접 탐지는 비교적 단순하며 하나의 표지 된 항체로 수행 할 수 있습니다.그러나, 간접 검출 방법은 다수의 표지 된 2 차 항체가 일차 항체에 결합하도록 허용하기 때문에 더 민감하며,이 신호 증폭 효과는 검출의 정확도를 향상시킨다.
테스트 및 계산 분석
염색 후, 현미경으로 항원 성능을 관찰해야합니다.스캐닝 방법 (EDX)과 같은 염색 지표의 사용은 신호 강도의 반 구별 및 정량적 분석을 수행 할 수있어 단백질 발현 패턴의 비교를보다 명확하게 만듭니다.
단백질 발현의지도
연구자들은 면역 조직 화학을 사용하여 정상 및 병변 조직에서 단백질 발현을 매핑 할 수 있습니다.이 기술은 조직 마이크로 어레이 기술을 결합하고 다른 조직 유형에서 단백질 발현 패턴을 효과적으로 표시 할 수 있습니다.인간 단백질 맵 데이터베이스는 연구자들이 다른 조직에 단백질이 어떻게 분포되는지 이해하도록 돕는 훌륭한 플랫폼을 제공합니다.
임상 병리학에서 면역 조직 화학의 중요성으로 인해 암 진단에 도움이 될뿐만 아니라 후속 치료에 중요한 기초를 제공 할 수 있습니다.이러한 배경에 비해, 우리는 단백질의 기능과 기능에 대해 더 깊이 이해할 수 있도록 향후 어떤 새로운 기술을 이용할 수 있는지 생각할 수는 없습니까?
