Chen Li-xin

DSF-Cu通过影响线粒体功能和细胞骨架诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡

目的 探测双硫仑(disulfiram，DSF) 螯合氯化铜(DSF-Cu)通过影响线粒体功能和细胞骨架诱导人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡。 方法 采用流式细胞术检测细胞周期、凋亡率、活性氧(reactive oxygen species，ROS)的生成以及线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential，MMP)的改变。AFM探测细胞表面形貌和超微结构、细胞高度、宽度及粗糙度的变化。激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope，LSCM)观察细胞骨架F-actin的分布和重组。 结果 细胞周期检测显示DSF-Cu将CNE-2Z细胞周期阻滞于G2/M期。Annexin-V/PI检测细胞凋亡显示随药物浓度增加，与对照组相比，实验组早凋率和晚凋率、坏死率细胞均明显增加。进一步检测凋亡相关信号发现DSF-Cu可促进CNE-2Z细胞内活性氧水平的增加及诱导MMP下降。AFM成像表明，与对照组相比，随着药物浓度增大，细胞逐渐变小，胞质浓缩，高度增加，膜表面粗糙度降低，变得平整光滑；细胞伪足由对照组的丰富密集，逐渐变短、萎缩，甚至完全破坏。LSCM进一步观察发现DSF-Cu引起F-actin荧光强度减弱，结构重排，严重影响微丝的功能。 结论 DSF-Cu可诱导CNE-2Z细胞依赖线粒体的凋亡途径，利用AFM 在单细胞水平上分析DSF-Cu对细胞膜的毒性作用，为鼻咽癌的治疗提供新的思路。