Sánchez Franco

Direct action of opioid peptides and naloxone on gonadotropin secretion by cultured rat anterior pituitary cells

Most current evidence indicates that opiates act via the hypothalamus to influence pituitary function. There are no detailed studies concerning pituitary site of action. Direct action of opioids on gonadotropin secretion was studied using enzymatically dispersed rat pituitary cells maintained in a monolayer culture. A time course study demonstrated that pretreatment with beta h-endorphin (beta h-End) (10(-7) M) initiated an inhibitory effect on LH release at 24 h, and was more evident at 48 h. A dose dependent decrease in LH release by beta h-End in concentrations of 10(-9) M to 10(-7) M was shown, whereas FSH was unchanged. Equimolar concentrations (10(-7)M ) of methionine enkephaline (Met-Enk) and D-ala2-met-enkephalinamide (DALA) produced a significant decrease in LH. Naloxone (NAL) (10(-5)) enhanced the release of both LH and FSH, and also blocked the inhibitory effect of beta h-End on LH release. These results indicated that opioid peptides act directly on anterior pituitary cells, decreasing the release of LH, but not of FSH. NAL also had a direct effect increasing the release of LH and FSH, and blocking the inhibitory action of beta h-End.

Role of Locally Produced Growth Hormone-Releasing Factor in Somatostatin Regulation by Fetal Rat Brain Cells in Culture

To determine the possible physiological role of endogenous growth hormone-releasing factor (GRF) in the neuronal content and release of cerebral somatostatin (SS), we studied the effect of endogenous GRF blockade on the immunoreactive SS (IR-SS) content of cells and media in fetal rat cerebral cortical and hypothalamic cells in culture. Cells were cultured in minimum essential medium (MEM) with 10% fetal calf serum and 10% horse serum. After 7-10 days in vitro, media were replaced with MEM without sera containing anti-GRF immunoglobulins G (IgG) for 1, 5 or 24 h. Controls were incubated with equal amounts of IgG from normal rabbit serum (NRS). In another group of experiments, cells were incubated with GRF (10(-11) to 10(-7) M) for 1 or 24 h. Long-term exposure (24 h) to anti-GRF IgG resulted in decreased media and intracellular IR-SS content, in both cerebral cortical and hypothalamic cells. 24 h treatment with GRF caused a dose-dependent increase in the IR-SS content of cells and media, the stimulatory action being abolished by the addition of anti-GRF to plates containing 10(-7) M GRF. On the contrary, when cells were exposed to anti-GRF IgG for 1 h, IR-SS increased in the media as compared to the control group. Short-term incubation (1 h) with GRF (10(-9) to 10(-7) M) resulted in a dose-dependent inhibition of IR-SS content in the cells and media. This inhibitory action was partially prevented by the addition of anti-GRF to plates containing 10(-7) M GRF.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)

Potassium depolarization-induced cAMP stimulates somatostatin mRNA levels in cultured diencephalic neurons.

In the nervous system, signals transmitted across synapses are known to regulate gene expression in the postsynaptic cells. This process often involves membrane depolarization and subsequent elevation of intracellular Ca(2+). We have previously demonstrated in fetal cerebrocortical cells, that somatostatin (SS) mRNA levels can be induced by depolarizing agents such as high potassium concentrations and veratridine (VTD), and that these effects are calcium dependent. SS expression is regulated by cAMP, and in the cerebral cortex adenylate cyclase activity is regulated through fluctuations in intracellular Ca(2+) concentrations. The present experiments were undertaken to determine the mechanism by which calcium upregulates the levels of SS mRNA. Cerebrocortical cells from 17-day-old fetuses were exposed to the different agents for 24 h and the levels of SS mRNA were measured by Northern blot. Incubation of cells with the calcium channel antagonist nifedipine (Nf), the calcium chelating agent EGTA, calcium free KRB and the calcium calmodulin inhibitors trifluoroperazine (TFP) and the napthelene sulfonamide, W7, resulted in the inhibition of K(+)-induced SS mRNA levels. K(+)-evoked depolarization increased the intracellular concentration of cAMP and this effect was antagonized by verapamil (VPM). Forskolin (Fk) provoked a higher increment in cAMP concentration than potassium, although the induction of SS mRNA was more evident following K(+) depolarization indicating a lack of correlation between levels of cAMP and induction of SS mRNA. The role of K(+)-induced cAMP on the increment of SS mRNA that occurred upon membrane depolarization was further explored with the inhibitor of protein kinase A (PKA), Rp cAMP whose presence significantly reduced depolarization-induced SS mRNA levels. This study confirms that Ca(2+) influx is required for K(+)depolarization-induced stimulation of cAMP whereby the increment of SS mRNA is partly produced.

Biosynthesis of growth hormone-releasing factor by fetal rat cerebrocortical and hypothalamic cells

The biosynthesis of growth hormone-releasing factor (GRF) by cerebrocortical tissue is controversial. Although several reports have indicated its presence in certain rat cortical areas and in cultured rat hypothalamic cells, no data exist demonstrating its biosynthesis in these areas. In this study, we have investigated the capacity of fetal rat cerebrocortical and hypothalamic cells in culture for synthesizing GRF. Fetal cerebrocortical and hypothalamic cells were exposed to [3H]Arg for 48 h. Medium and cell extracts were processed and [3H]Arg-IR-rGRF was isolated by affinity chromatography and characterized by HPLC. Intracellular [3H]Arg-IR-rGRF from both hypothalamic and cerebrocortical cells exhibited four major peaks, one of them coeluting with synthetic rGRF. In cerebrocortical cultures, newly synthesized and released [3H]Arg-IR-rGRF showed a similar pattern to the cell content. However, in media from hypothalamic cells, higher hydrophobicity molecular forms were absent. The data demonstrated that fetal cerebrocortical and hypothalamic cells in primary culture synthesize GRF with similar posttranslational processing, but with different molecular patterns of secretion.

Growth Hormone-Releasing Factor Regulation by Somatostatin, Growth Hormone and Insulin-Like Growth Factor I in Fetal Rat Hypothalamic-Brain Stem Cell Cocultures

Information about growth hormone-releasing factor (GRF) regulation by somatostatin, GH and IGF-I is scarce and controversial. This could be due to the in vivo interactions among these signals and the lack of models for individualizing the action of one of them from the others upon GRF regulation. The aim of the present work was to study GRF regulation by these signals, using primary fetal rat hypothalamic-brain stem cell cocultures. Coculturing of these two cytotypes increases hypothalamic immunoreactive rat GRF (IR-rGRF) content in cells by 45% and in media by 36%. The effect of SS on GRF in cocultures was examined by using a multiple approach: (1) depleting endogenous SS by adding 1 mM cysteamine (CSH); (2) blocking endogenous SS by incubation with SS antiserum, and (3) incubating with synthetic SS14 at different concentrations and exposure periods. 1 mM CSH depleted IR-SS content (pg/plate, mean +/- SE) in cells (CSH-treated: 68 +/- 8 vs. control: 322 +/- 10, p < 0.01) and media (CSH-treated: 211 +/- 15 vs. control: 880 +/- 70; p < 0.01). In the CSH-induced SS-depleted cultures, a slight reduction in the IR-rGRF content in cells was observed (CSH-treated: 93.5 +/- 4.5 vs. control: 111 +/- 6; p < 0.05), with no effect on media content. When SS antiserum was added to plates, there was a slight reduction in the IR-rGRF content in cells and media, but it was not significantly different from the controls. However, SS14 (10(-10)-10(-8) M) could not modify IR-rGRF content in media and cells. The GH effect on IR-rGRF was studied in the absence of CSH and in CSH-induced SS-depleted cultures. GH (5 microM, 24 h) decreased (52%) the IR-rGRF content in media (GH-treated: 28.7 +/- 4.6 vs. control: 60.2 +/- 7; p < 0.01) without causing changes in cell content. In SS-depleted cultures, the inhibitory action of GH on media IR-rGRF was greater (62% decrease) (GH-treated: not detected, control 56 +/- 10; p < 0.01) and also affected IR-rGRF cell content (GH-treated: 64.3 +/- 7.3 vs. control: 160 +/- 9.6; p < 0.01). In the same experiments, GH increased IR-SS content in cells (GH-treated: 31.8 +/- 4.6 vs. control 20.9 +/- 0.5; p < 0.01) and in media (GH-treated: 413 +/- 7 vs. control: 286 +/- 9; p < 0.01). 1 mM CSH again depleted IR-SS content and abolished the GH stimulatory effect.(ABSTRACT TRUNCATED AT 400 WORDS)

Consideraciones acerca del consenso europeo para el tratamiento del cáncer diferenciado del tiroides

Varios países europeos, entre ellos España1, habían desarrollado guías, directrices o consensos basados en su larga experiencia en el tratamiento del cáncer diferenciado del tiroides. Había numerosas diferencias entre estos países que recogían parcialmente los avances más recientes que facilitan tanto el control como el seguimiento de la enfermedad. Por ello y siguiendo el espíritu de integración cultural y científico de la Unión Europea y bajo las directrices de la European Thyroid Association, así como de la European Thyroid Association-Cancer Research Network, se inició el proceso de elaboración de un consenso europeo. Estas sociedades solicitaron la colaboración de 2 expertos en cáncer de tiroides por cada sociedad científica de los diferentes países de la Unión Europea y, de esta forma, con los 25 países que contestaron afirmativamente, se reunió un grupo de 50 especialistas que, bajo la dirección de 2 coordinadores, crearon el grupo que desarrolló el consenso. El punto de partida para todos fue la Guía británica de manejo del cáncer de tiroides en adultos; se inició la discusión en una reunión que tuvo lugar en Atenas, el 24 de mayo de 2005. A partir de ahí se estableció un contacto ininterrumpido entre los coordinadores y los miembros del grupo por correo electrónico que, finalmente, terminó en el documento presentado3. El consenso empieza con la evaluación del nódulo solitario del tiroides y se hace énfasis en que la ecografía realizada por un experto es la técnica de imagen más precisa para su evaluación, ya que permite observar la presencia de otros nódulos, adenopatías sospechosas y otros datos sugestivos de malignidad. La combinación de todos estos hallazgos tiene un valor predictor relativamente bajo para la benignidad o malignidad del nódulo. Asimismo, se recomienda que a todos los nódulos de más de 10 mm de diámetro, no hiperfuncionantes, se les deba practicar citología tras punción aspirada con aguja fina (PAAF), ya que constituye el método de referencia para su valoración, a pesar de que presenta algunas limitaciones. Se valora la función tiroidea mediante concentraciones de tirotropina (TSH) basal y tiroxina (T4) libre y se aconseja la determinación de anticuerpos anti-tiroideos. Se establece que se indicará cirugía para todos los nódulos con citología maligna, sospechosa o diagnóstica de neoplasia folicular. El tratamiento estándar del cáncer diferenciado del tiroides es la tiroidectomía total, o casi total, que facilita la ablación y tratamiento posterior con I, así como su seguimiento. Se discute para los tumores entre 10 y 20 mm de diámetro la necesidad de completar o no la tiroidectomía. La microdisección de los compartimentos linfáticos cervicales debe ser realizada en todos los casos con sospecha preoperatoria de adenopatías, demostrada por ecografía o bien si se prueba intraoperatoriamente la presencia de metástasis, ya que se ha evidenciado que tiene un impacto favorable sobre la supervivencia en los cánceres de riesgo elevado o sobre la recurrencia y remisión en los de riesgo bajo. También se indica que el procedimiento debe ser invidualizado de acuerdo con la extensión, y que los niños y adolescentes deben seguir el mismo protocolo quirúrgico. El estadiaje de los pacientes se basa en la evaluación anatomopatológica, así como en el rastreo corporal total posterior con I, con lo que se estadifica el riesgo individual de cada paciente y el tipo de seguimiento. De las numerosas escalas pronósticas se ha escogido la última edición del TNM4 y, de acuerdo con ésta, se establecen 3 categorías: a) los de riesgo muy bajo T1 (≤ 1 cm) N0M0, b) los de riesgo bajo T1 (> 1 cm) N0M0 o T2N0M0, o multifocal T1N0M0, y c) los de riesgo elevado todos los T3 y T4, todos los TN1 o todos los M1. Editorial

Acromegalia asociada a prolapso mitral y tricuspídeo. Descripción de un caso

Se presenta un paciente de 65 anos de edad, con una acromegalia de larga evolucion y prolapso sistolico severo de las valvulas mitral y tricuspide. Esta asociacion, no descrita hasta la fecha, podria ser debida a los efectos de la hormona del crecimiento sobre el tejido conectivo valvular.A 65 year-old male with severe systolic mitral and tricuspid valve prolapse, associated with long-standing acromegaly is reported. The non published association could be caused by the effect of growth hormone on the valve connective tissue.

Sistema GH-IGFI y envejecimiento cerebral

Hace más de 30 años se puso de manifiesto que los ancianos experimentan una pérdida de los picos de secreción nocturna de la hormona de crecimiento (GH) y un declinar paralelo en los niveles del factor de crecimiento similar a la insulina (IGF-I). Estos hallazgos que se confirmaron también en roedores, constituyen una de las más sólidas y mejor caracterizadas alteraciones endocrinas relacionadas con el envejecimiento en mujeres y varones. La regulación fisiológica de la GH está principalmente determinada por las acciones opuestas de 2 neuropéptidos, el factor liberador de GH (GHRH) y el inhibidor somatostatina (SS). El GHRH estimula la secreción y expresión génica de GH mientras que la SS inhibe su secreción. La ghrelina, el ligando endógeno del receptor de los secretagogos de GH (GHS-R), es el neurorregulador de GH descrito más recientemente. La ghrelina sintetizada en el hipotálamo regula la secreción de GH aumentando la liberación GHRH, amplificando su acción a nivel de las células somatotropas, reduciendo la liberación de SS y antagonizando la señalización de sus receptores. La acción directa de la ghrelina sobre las células somatotropas está siendo controvertida. La disminución de la tasa de secreción de GH con la edad resulta en disminución de los niveles circulantes de IGF-I. El declinar de la secreción de GH se debe a una menor amplitud de los pulsos de GH no habiéndose descrito alteraciones en la frecuencia. La GH tiene un amplio rango de acciones por lo que la disminución de su tasa de secreción tiene significado clı́nico y puede ser responsable de algunas alteraciones que acompañan al envejeci-

Microcarcinoma diferenciado de tiroides y carcinoma diferenciado de bajo riesgo: objeciones al tratamiento ablativo con radioyodo

Entre los puntos controvertidos del tratamiento del carcinoma diferenciado de tiroides (CDT) esta la indicacion de tratamiento ablativo con radioyodo en microcarcinoma y en carcinoma diferenciado de bajo riesgo. La controversia debe fundamentarse en definiciones precisas de microcarcinoma papilar, microcarcinoma folicular y carcinoma diferenciado de bajo riesgo que quedan aqui definidos. Aunque un 2,8% de los microcarcinomas, segun criterio de tamano, pueda manifestarse con metastasis a distancia iniciales, el mayor numero se produce en condiciones predictivas de bajo riesgo: monofocal y unilateral, sin extension extratiroidea, invasion ni metastasis, encapsulado. Cuando el tumor tenga esas propiedades y no haya historia de radioterapia ionizante previa en cuello, se recomienda la hemitiroidectomia. En el resto de los tumores, se recomienda la tiroidectomia intencionalmente total, que determina menor frecuencia de recurrencia y metastasis que la lobectomia, aunque no menor mortalidad. Con tiroidectomia total y factores predictivos de bajo riesgo, no se recomendaria el tratamiento ablativo con yodo-131 y su seguimiento se realizaria con ecografia de cuello y tiroglobulina (Tg) circulante con autoanticuerpos anti-Tg negativos. El tratamiento ablativo se justificaria solo para establecer control mas preciso evolutivo referido a persistencia o recurrencia de enfermedad. El tratamiento con radioyodo del microcarcinoma y del CDT de bajo riesgo no tiene evidencia cientifica de que disminuya la mortalidad especifica por el tumor, ni la recurrencia locorregional. Puede aumentar el riesgo de segundos tumores primarios, particularmente de leucemias y producir algunos efectos secundarios leves en gonadas, retraso de planificacion de fertilidad, leve disfuncion transitoria de glandulas salivares y lagrimales y leves trastornos hematologicos transitorios. El tratamiento posquirurgico con radioyodo de microcarcinoma y CDT de bajo riesgo debe ser selectivo para pacientes con factores predictivos de alto riesgo.