H. Hachicha

Relevant genetic polymorphisms and kidney expression of Toll-like receptor (TLR)-5 and TLR-9 in lupus nephritis: Toll-like receptor in lupus nephritis

Toll‐like receptor (TLR) genetic polymorphisms may modify their expression causing inflammatory disorders and influencing both susceptibility and severity of lupus erythematosus. We aim to determine whether TLR‐5 and TLR‐9 gene polymorphisms are implicated in the susceptibility to systemic lupus erythematosus (SLE) and lupus nephritis (LN) and to evaluate their expressions and distributions in renal LN patients biopsies. The frequencies of two SNP in the TLR‐9 gene and one in the TLR‐5 gene was examined in 106 SLE patients (among them 37 LN patients) and in 200 matched controls by polymerase chain reaction–restriction fragment‐length polymorphisms (PCR–RFLP) analysis. TLR‐9 and TLR‐5 expressions were assessed by reverse transcription (RT)–PCR and immunohistochemistry carried on LN renal biopsies compared to healthy renal tissue. A significant genotypic and allelic association was revealed between TLR‐9‐rs352140 and both SLE and LN (Pu2009<u20090·05). The TLR‐9 transcript level was significantly higher in LN biopsies compared to control (Pu2009<u20090·05). This increase was observed histochemically in the tubulointerstitial compartment. TLR‐9 was detectable in LN glomeruli patients but not in normal control glomeruli. No allelic nor genotype association was found with TLR‐5‐rs5744168 in SLE. but the T allele and the TT genotype were raised significantly in the LN group (Pu2009<u20090·05). A significant increase in TLR‐5 gene expression in LN biopsies, which contrasted with normal kidneys (Pu2009<u20090·05), was confirmed by an intense and diffuse staining for TLR‐5 only in LN tubules (Pu2009<u20090·05). Our data show that TLR‐5 and TLR‐9 are susceptible genes to LN and that their expression is dysregulated in LN patients kidneys, supporting a role of these mediators in the pathogenesis of LN.

The intrathecal polyspecific antiviral immune response (MRZ reaction): A potential cerebrospinal fluid marker for multiple sclerosis diagnosis

We tested the performance of MRZ-reaction, an intrathecal humoral immune response against-Measles (M), Rubella (R) and Varicella Zoster (Z) viruses, in multiple sclerosis (MS) diagnosis. The MRZ-reaction was significantly more positive in MS than in non-MS group with a specificity of 91.9%. In MS group, the RZ-profile was the most prevalent and the R-specific antibody-index was correlated to the number of oligoclonal bands (OCB) in CSF. Interestingly, the MRZ-reaction was detected in 53% of OCB-negative-MS patients. The MRZ-reaction seems to be a relevant CSF diagnostic marker of MS disease. The likely relation between its positivity and the vaccination status deserves to be investigated.

Relevant genetic polymorphisms and kidney expression of Toll‐like receptor (TLR)‐5 and TLR‐9 in lupus nephritis

Toll‐like receptor (TLR) genetic polymorphisms may modify their expression causing inflammatory disorders and influencing both susceptibility and severity of lupus erythematosus. We aim to determine whether TLR‐5 and TLR‐9 gene polymorphisms are implicated in the susceptibility to systemic lupus erythematosus (SLE) and lupus nephritis (LN) and to evaluate their expressions and distributions in renal LN patients biopsies. The frequencies of two SNP in the TLR‐9 gene and one in the TLR‐5 gene was examined in 106 SLE patients (among them 37 LN patients) and in 200 matched controls by polymerase chain reaction–restriction fragment‐length polymorphisms (PCR–RFLP) analysis. TLR‐9 and TLR‐5 expressions were assessed by reverse transcription (RT)–PCR and immunohistochemistry carried on LN renal biopsies compared to healthy renal tissue. A significant genotypic and allelic association was revealed between TLR‐9‐rs352140 and both SLE and LN (Pu2009<u20090·05). The TLR‐9 transcript level was significantly higher in LN biopsies compared to control (Pu2009<u20090·05). This increase was observed histochemically in the tubulointerstitial compartment. TLR‐9 was detectable in LN glomeruli patients but not in normal control glomeruli. No allelic nor genotype association was found with TLR‐5‐rs5744168 in SLE. but the T allele and the TT genotype were raised significantly in the LN group (Pu2009<u20090·05). A significant increase in TLR‐5 gene expression in LN biopsies, which contrasted with normal kidneys (Pu2009<u20090·05), was confirmed by an intense and diffuse staining for TLR‐5 only in LN tubules (Pu2009<u20090·05). Our data show that TLR‐5 and TLR‐9 are susceptible genes to LN and that their expression is dysregulated in LN patients kidneys, supporting a role of these mediators in the pathogenesis of LN.

Intérêt du test QuantiFERON® dans le bilan pré-thérapeutique pour biothérapie

Introduction La recherche d’une tuberculose latente (TBL) avant la mise en route d’un traitement anti-TNF est cruciale. L’intradermoreaction (IDR) a la tuberculine et/ou le test de liberation de l’interferon γ in vitro (QuantiFERON®) font partie du bilan pre-therapeutique pour biotherapie. Dans ce cadre, notre objectif etait d’evaluer les resultats et les performances du test (QuantiFERON®) pratique dans notre laboratoire. Materiels et methodes Cinquante patients (2/3xa0des femmes, moyenne d’âgexa0: 46xa0±xa015xa0ans) consultant dans les services de rhumatologie, gastrologie et pediatrie entre novembre 2014xa0et mars 2017xa0ont beneficie d’un test QuantiFERON (QuantiFERON-TB GOLD® In Tube) avant la mise en route d’une biotherapie. Resultats Vingt-trois patients etaient atteints de polyarthrite rhumatoide (PR), 16xa0de spondylarthrite ankylosante (SPA) et 11xa0d’une maladie inflammatoire chronique de l’intestin (MICI). Le test QuantiFERON® etait positif chez 6xa0patients (12xa0%), negatif chez 34 (67xa0%), et indetermine chez 10xa0autres (21xa0%). L’IDR, faite uniquement pour 10xa0patients etaitxa0>xa05xa0mm chez 5. Seulement 9xa0patients avaient les resultats de l’IDR disponibles et ceux du test QuantiFERON® interpretablesxa0: les deux tests etaient concordants dans six cas. Les 3xa0cas de discordance correspondaient a un test QuantiFERON® negatif et une l’IDRxa0>xa05xa0mm. Parmi les 10xa0cas ayant un resultat QuantiFERON indetermine, 1xa0seul a beneficie d’une IDR qui s’est revelee negative. Conclusion L’IDR, connue par son manque de sensibilite et de specificite dans la detection de TBL, devrait etre remplacee par le test QuantiFERON® pour le bilan pre-therapeutique par anti-TNF. La discordance entre les 2xa0tests peut etre expliquee par les difficultes d’interpretation et les eventuelles interferences de l’IDR avec le vaccin BCG et la prise d’immunosuppresseurs. Les resultats indetermines du test QuantiFERON® peuvent etre lies au statut immunitaire du patient, mais aussi a certains problemes techniques pre-analytiques.

HLA Class III: A susceptibility region to systemic lupus erythematosus in Tunisian population

Background and objectives Short tandem repeats (STR) are usually used as informative polymorphic markers for genetic mapping and for disease susceptibility analysis. The involvement of these microsatellite markers localized in the MHC region was reported in many auto-immune diseases. In this study we analyzed for the first time eight polymorphisms of microsatellite loci at the HLA region: D6S291, D6S273, TNFa, b and c, MICA, D6S265 and D6S276, in Tunisian systemic lupus erythematosus (SLE) patients. Materials and methods We performed a case control study in which the microsatellite loci were amplified using specific primers labeled with NED, VIC, PET or 6-FAM and analyzed using GeneScan software 3.7. For the statistical analysis, we used SPSS software and we performed a sub-haplotype scoring test using the haplo.stats software developed in the R language. Results We found that two mean associated regions existed; the most statistically significant encompassed the 3 TNF markers (p = 0.0003, OR = 19.34); the latter covered the DR region. In fact, when scoring haplotypes in 3 marker- sliding windows, the p value increased as we moved away from the TNF region and decreased again when we approached the DRB1 locus. We also established for the first time the negative association between alleles of D6S291 and SLE. The majority of clinical and serological correlations were noted with TNF alleles. Conclusion Our results confirm the association between TNF and DRB1 polymorphisms and SLE. The association between alleles of D6S291 and SLE needs however to be verified by the analysis of other markers beyond this region.

Pemphigus herpetiformis in South Tunisia: a clinical expression of pemphigus foliaceus?

Pemphigus herpetiformis (PH) is a rare subtype of pemphigus combining clinical features of dermatitis herpetiformis and the immunopathologic characteristics of pemphigus. We aimed to analyze the epidemiological, clinical, and immunological presentation and management of the disease in a cohort of south Tunisian patients with a long‐term follow‐up.

Positivité des anticorps anti-cytoplasme des polynucléaires neutrophiles chez l’enfant : prévalence et étiologies

In adults, anti-neutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA) are considered as serological markers of several diseases, especially vasculitis and glomerulonephritis. Since ANCA are rarely positive in children, few data about the clinical relevance of these auto-antibodies in pediatric population have been reported. Therefore, our study aims to describe the spectrum of disorders associated with positive ANCA in Tunisian children. This study had been carried out over a period of 12 years and a half. All patients under the age of 15 for whom ANCA screening was performed in our laboratory were included. Clinical data were collected retrospectively. Indirect immunofluorescence (IFI) technique for ANCA detection was performed using PNN smears fixed with ethanol, formalin and, if necessary, methanol. Positive results were tested using immunodot to characterize the antigenic targets (myeloperoxydase (MPO) and proteinase 3 (PR3)). Our results showed that 410/5,990 (6.8%) laboratory requests for ANCA screening were for children. Forty (9.7%) requests were positive (24 children). Clinical data were available for 19 patients only. Sex-ratio (F/M) was 1.25. The mean age was 9 years and a half (3-15 years). The most frequent IIF patterns were x-ANCA (n=12) and p-ANCA (n=7). In our patients, the most frequent conditions associated to ANCA were treatment with benzylthiouracil for hypothyroidism (n=6), inflammatory bowel disease (n=4) and hemolytic anemia (n=4). In conclusion, the positivity of ANCA in children seems to be a rare event. Associated conditions include clinical disorders specific to the pediatric population. Treatment with benzylthiouracil is an etiology to be taken into consideration.

Caractéristiques cliniques et profil étiologique des cryoglobulinémies : à propos de 36 cas

Introduction Une cryoglobulinemie est definie par la presence persistante dans le sang de proteines anormales appelees cryoglobulines qui precipitent au froid et se solubilisent a nouveau lors du rechauffement. Elle peut rester une anomalie biologique isolee ou etre responsable d’une vascularite des vaisseaux de petit calibre avec atteinte de la peau, des articulations, du systeme nerveux peripherique et du rein. Le but de notre travail etait de decrire le profil etiologique des cryoglobulinemies chez des patients suivis dans un service de medecine interne. Patients et methodes Notre etude est retrospective incluant les patients hospitalises dans le service de medecine interne du centre hospitalo-universitaire de Sfax, Tunisie entre 2014xa0et 2016, chez lesquels une cryoglobulinemie a ete detectee par le laboratoire d’immunologie du meme CHU. Nous decrivons les caracteristiques epidemiologiques, cliniques, et le profil etiologique de ces cryoglobulinemies. Resultats Notre etude a collige 36xa0patients, 30xa0femmes et 6xa0hommes (sex-ratioxa0: 0,2), d’âge moyen de 45xa0±xa013xa0ans. Trente-quatre patients avaient aux moins des signes cliniques ou biologiques dont 21xa0cas etaient en rapport avec une pathologie sous-jacente. Les atteintes cutanees et articulaires etaient les plus revelatrices de la cryoglobulinemie, dans respectivement 30xa0% et 38,9xa0% des cas. Les principales manifestations cliniques etaient representees parxa0: des arthralgies (33xa0%), des arthrites (32xa0%), un syndrome sec (27xa0%), un phenomene de Raynaud (8xa0%), une nephropathie glomerulaire (11xa0%), un purpura vasculaire (5xa0%) et une neuropathie peripherique (3xa0%). Un syndrome inflammatoire etait note dans 32xa0% des cas et une hypocomplementemie dans 14,7xa0% des cas. Le facteur rhumatoide etait positif dans 14,7xa0% des cas. Le typage immunochimique mettait en evidence une cryoglobulinemie de type III dans 17xa0cas, de type II dans 8xa0cas et de type I monoclonale dans 11xa0cas. Les cryoglobulinemies etaient dans la majorite des cas secondaires a une maladie systemiquexa0: un syndrome de Sjogren primitif dans 10xa0cas (28xa0%), un lupus erythemateux systemique (1xa0cas)xa0; une sclerodermie (2xa0cas)xa0; une polyarthrite rhumatoide (4xa0cas) et une sarcoidose (1xa0cas). La cryoglobulinemie etait associee a une maladie de Kikuchi chez une patiente, une infection a HSV chez un patient et a une hepatite virale B dans un cas. Elle etait essentielle dans 15xa0cas (41xa0%). Le traitement etait base sur le traitement de la pathologie sous-jacente pour les cryoglobulinemies secondaires. Conclusion L’orientation etiologique d’une cryoglobulinemie est determinee par son type immunochimique et les etiologies sont dominees par l’infection par le VHC, suivies par les hemopathies lymphoides B et les affections auto-immunes. Notre serie est caracterisee par la frequence des connectivites en particulier du syndrome de Sjogren (28xa0%) ce qui est probablement explique par un biais de selection des patients.

Caractéristiques cliniques et immunologiques des patients avec des anticorps anti-Jo1 positifs

Introduction Les anticorps anti-Jo1xa0sont les plus frequents et les plus importants des anticorps anti-synthetases. Ils sont specifiques du syndrome des anti-synthetases (SAS). Cependant ils peuvent etre retrouves chez des patients ne remplissant pas tous les criteres du SAS ou presentant d’autres maladies systemiques ou non sans rapport avec le SAS. Nos objectifs etaient de rapporter les caracteristiques epidemiologiques et cliniques de 22xa0patients avec anticorps anti-Jo1xa0positifs. Patients et methodes Etude retrospective menee dans les services de Medecine interne et d’immunologie (Sfax-Tunisie) entre 2010xa0et 2016. Le depistage des AAN etait realise par immunofluorescence indirecte (IFI) sur cellules Hep2. Chaque serum positif etait teste par immunodot. Resultats Parmi 6995xa0patients hospitalises dans le service de medecine interne durant la periode d’etude, 22xa0patients ayant des anticorps anti-Jo1xa0positifs ont ete colliges soit une prevalence de 0,31xa0% et une incidence de 3xa0cas par an. Dix-huit de nos patients etaient de sexe feminin (82xa0% des cas), et 4xa0patients etaient de sexe masculin (18xa0% des cas), avec un sex-ratio (H/F) de 0,22. L’âge moyen des patients etait de 46xa0ans (extremes de 23xa0et 86xa0ans). Les principales manifestations cliniques etaient les signes rhumatologiquesxa0=xa014xa0cas (63xa0%), les signes generauxxa0=xa011xa0cas (50xa0%), les manifestations musculairesxa0=xa08xa0cas (36xa0%), les signes pleuro-pulmonairesxa0=xa08xa0cas (36xa0%), les signes cutanesxa0=xa09xa0cas (45xa0%), un phenomene de Raynaudxa0=xa02xa0cas (9xa0%) et des mains de mecaniciensxa0=xa02xa0cas (9xa0%). Six de nos patients presentaient un tableau de myopathie inflammatoire, dont 4xa0remplissaient les criteres du SAS. Neuf de nos patients avaient une maladie systemique et/ou auto-immune specifique ou non d’organexa0: un syndrome de Sjogren primitif (2xa0cas), une thyroidite d’Hashimoto (2xa0cas), une Cirrhose biliaire primitive (2xa0cas), un LES (1xa0cas), une Sclerodermie systemique (1xa0cas) et une maladie de Horton (1xa0cas). Un syndrome de Sjogren secondaire etait retrouve chez 2xa0malades associe a une Sclerodermie systemique (1xa0cas) et a une thyroidite d’Hashimoto (1xa0cas). Sept de nos patients presentaient des pathologies diverses et non auto-immunesxa0: un syndrome sec salivaire et oculaire (3xa0cas), un carcinome pulmonaire peu differencie (1xa0cas), une panuveite bilaterale recidivante d’origine tuberculeuse (1xa0cas), une thrombose veineuse profonde (1xa0cas) et une fievre prolongee (1xa0cas). Une steatose hepatique etait retrouvee chez 3xa0patients (soit 42,8xa0%). Tous les patients avaient des anti-Jo1xa0positifs associes avec l’ anti- Ro52 (11xa0cas), l’anti-SSA (7cas), l’anti-SSB (17xa0cas), l’anti-Sm (2xa0cas), l’anti-AND (1xa0cas), l’anti-centromere (3xa0cas) et l’anti Scl-70 (3xa0cas). Conclusion Notre etude montre la rare prevalence des anticorps anti-Jo1xa0dans notre population, suggere l’interet de rechercher ces anticorps devant un contexte evocateur et de facon systematique en cas de myosite ou d’atteinte pulmonaire interstitielle ou de fluorescence cytoplasmique des AAN, et enfin elle confirme la place de l’immunodot comme examen de reference pour la recherche des anticorps anti-Jo1. Les limites de notre etude resident donc principalement dans son caractere retrospectif et dans le nombre de patients non inclus en raison de dossiers incomplets ou non retrouves.

Lupus érythémateux systémique : profil sérologique des auto-anticorps autres qu’anti-nucléaires et spectre des maladies auto-immunes associées

Introduction Le lupus erythemateux systemique (LES) est une maladie auto-immune non specifique d’organe caracterisee sur le plan clinique par un grand polymorphisme et sur le plan biologique par la production d’un large eventail d’auto-anticorps (AAc), essentiellement les Ac anti-nucleaires. Des cas d’association du LES avec d’autres maladies auto-immunes (MAI) specifiques ou non d’organe ont ete rapportes. L’objectif de notre travail consiste a analyser le profil serologique de 18xa0AAc autres que les antinucleaire et a chercher d’eventuelles associations de MAI chez un groupe de lupiques Tunisiens. Patients et methodes Notre etude a concerne 50xa0patients ayant un diagnostic certain de LES (48xa0femmes et 2xa0hommesxa0; moyenne d’âgexa0: 37xa0ans). Pour chaque patient, nous avons recherche un panel d’AAc (nxa0=xa018)xa0: Les Ac anti-endomysium (IgA), les Ac «xa0anti-tissuxa0» (IgG) (anti -LKM1, anti-M2, anti-ML, anti-LC1, anti-SLA et anti-CP), les ANCA (IgG), anti-ilot de Langerhans, anti-ovariens et anti-surrenaliens ont ete recherches par immunofluorescence indirecte. Les anticorps anti-Transglutaminase tissulaire (IgA), Les anti-cardiolipine (IgG), les anti-beta2-glycoproteine1 (IgG), les anti-CCP, anti-TPO et anti-Tg ont ete detectes par ELISA indirecte. Le FR a ete recherche par technique immuno-nephelemetrique automatisee. Resultats Au moment de l’etude, les antithyroidiens ont ete detectes chez 7xa0patientes (14xa0%)xa0: anti- TPO dans 3xa0cas et anti-Tg dans 5xa0cas. Parmi ces patientes, six presentaient une hypothyroidie et une autre une hyperthyroidie. La serologie cœliaque s’est revelee positive chez un seul patient avec des anti-EM et des anti-transglutamine (2xa0%). Des Ac «xa0anti-tissuxa0» ont ete detectes chez 4xa0patients (8xa0%)xa0: Il s’agissait des anti-M2xa0chez 2xa0malades (4xa0%) et des anti-CP chez 2xa0autres (4xa0%), le diagnoctic de CBP a ete retenu chez une seule malade. Les ANCA ont ete retrouves chez 3xa0patients (6xa0%)xa0: p-ANCA dans 2xa0cas (4xa0%) et x-ANCA dans un cas (2xa0%). Les anti-phospholipides ont ete trouves chez 15xa0patients (30xa0%)xa0: tous avaient des anti-beta2-glycoproteine1 (IgG) (30xa0%) et 5xa0parmi eux avaient en plus des anti-cardiolipine (IgG) (10xa0%), 2xa0patients etaient deja suivis pour un SAPL associe au lupus. Neuf lupiques (18xa0%) de notre etude ont presente un marqueur serologique de PR dans leurs serumsxa0: le FR dans 6xa0cas (12xa0%) et l’anti-CCP dans un 3xa0cas (6xa0%). Les anti-ovariens, anti-surrenaliens et les marqueurs du diabete etaient absents chez tous nos patients. Conclusion Notre etude confirme la grande complexite clinique et biologique du desordre immunologique au cours de la maladie lupique. En particulier, la dysfonction thyroidienne semble etre frequente dans notre serie tunisienne. Ces resultats incitent a un suivi regulier des patients diagnostiques lupiques et a completer le bilan immunologique a la moindre suspicion clinico-biologique. La signification a long terme d’une positivite isolee des AAc autres qu’anti-nucleaires dans le serum de patients lupiques doit faire l’objet d’autres etudes.