H. Lang

Bestimmung der Aktivität von Creatinkinase MB im Serum unter Verwendung inhibierender Antikörper

SummaryA new method for the determination of creatine kinase-MB activity in the serum is presented. The principle of this method is the direct measurement of the activity of creatine kinase M subunits by inhibiting antibodies. The total test procedure takes 15 min. In the sera of all the 83 patients tested, who have clinically proven myocard infarction, creatine kinase-MB activity can be measured between the 6th and 28th hour after infarction. At the time of maximum total creatine kinase activity the percentage of creatine kinase-MB activity is between 6 and 17%, the mean value being 8%. In cases of emergency this method can be used for the differential diagnosis of elevated total creatine kinase activities of unknown origin.ZusammenfassungEs wird über eine neue Methode zur quantitativen Bestimmung der Creatinkinase MB-Aktivität im Serum berichtet. Die Methode beruht auf einer direkten Messung der Aktivität der Creatin-kinase-Untereinheit B nach Hemmung der Aktivität der Creatinkinase-Untereinheit M durch inhibierende Antikörper und benötigt zur Durchführung 15 min. Bei allen 83 untersuchten Patienten mit klinisch gesichertem Myokardinfarkt konnten zwischen der 6. und 28. Stunde nach Infarkteintritt Creatinkinase MB-Aktivität gemessen werden. Der Creatinkinase MB-Anteil zum Zeitpunkt der höchsten Creatinkinase-Gesamtaktivität betrug 6–17%, im Mittel 8%. Diese Methode ermöglicht daher in der Notfalldiagnostik eine Differentialdiagnose unklarer Creatinkinase-Gesamtaktivitäts-Erhöhungen.A new method for the determination of creatine kinase-MB activity in the serum is presented. The principle of this method is the direct measurement of the activity of creatine kinase M subunits by inhibiting antibodies. The total test procedure takes 15 min. In the sera of all the 83 patients tested, who have clinically proven myocard infarction, creatine kinase-MB activity can be measured between the 6th and 28th hour after infarction. At the time of maximum total creatine kinase activity the percentage of creatine kinase-MB activity is between 6 and 17%, the mean value being 8%. In cases of emergency this method can be used for the differential diagnosis of elevated total creatine kinase activities of unknown origin.

Enzyme-Linked Immunoassay for Human Granulocyte Elastase in Complex with α1 -Proteinase Inhibitor

Granulocyte elastase in complex with its main inhibitor in plasma, i.e. alpha 1-proteinase inhibitor, was quantitatively determined by incubating the sample with solid-phase fixed antibodies against elastase first and reacting then with alkaline phosphatase-labelled antibodies against alpha 1-proteinase inhibitor. In normal plasma a level of 97.5 +/- 25.8 micrograms elastase/1 (mean +/- s.d., n = 43) was found, whereas moderately to markedly increased plasma concentrations were demonstrated in a variety of patients with inflammatory diseases like septicemia or rheumatoid arthritis.

[Determination of creatine phosphokinase-MB in the serum of patients with myocardial infarction by an immunological method (author's transl)].

SummaryThe immunological method of determining creatine phosphokinase-MB in the serum of patients with myocardial infarction described here is based on the differential measurements of CK-activities before and after a specific immuno-precipitation of the CK-MB-type. The minimum activity of the CK-MB-type which it is possible to determine with this method is 4% of the total activity. In patients with clinically confirmed myocardial infarctions 1–15% (mean 7.8%) of the total activity can be calculated as CK-activity of the MB-type on the first/second day(s) after the infarction. In patients with increased total CK-activity and without verified infarction the CK-MB content does not differ significantly from zero. The differences between the two groups are statistically significant. In patients with myocardial reinfarction the CK-MB-activity is higher than that after the first infarction. The immunological method to determine creatine-phosphokinase isoenzyme MB is of differential-diagnostic value in myocardial infarction.ZusammenfassungEs wird über den Nachweis von Creatinkinase-MB im Serum beim Myokardinfarkt mit einer immunologischen Methode berichtet. Die Methode beruht auf der differentiellen Bestimmung der Creatinkinase-Aktivitäten vor und nach spezifischer Immunpräcipitation von Creatinkinase-MB. Die Nachweisgrenze der Creatinkinase-MB-Aktivität mit dieser Methode liegt bei 4% der Creatinkinase-Gesamtaktivität. Bei Patienten mit klinisch gesichertem Myokardinfarkt kann am 1./2. Tag nach dem Infarkt 1–15% (Mittel 7,8%) der Creatinkinase-Gesamtaktivität als CK-MB-Aktivität nachgewiesen werden. Bei Patienten mit erhöhter CK-Gesamtaktivität ohne gesicherten Infarkt ist der CK-MB-Anteil nicht signifikant von Null unterschieden. Die Unterschiede der beiden Gruppen sind statistisch signifikant. Bei Patienten mit Reinfarkt findet sich ein höherer Anteil von CK-MB-Aktivität als nach Erstinfarkt. Die immunologische Nachweismethode für Creatinkinase-MB hat differentialdiagnostische Bedeutung beim Myokardinfarkt.

Creatinkinase — Isoenzyme: Idiopathisches Auftreten von Creatinkinase-BB-Aktivitäten im Serum von Patienten

SummaryBy differentiation of creatine kinase isoenzyme activities in sera using immunological methods the published data about occurrence of creatine kinase BB activities in patients with different diseases or after surgical treatment, respectively, cannot be verified in general. With a frequency in the order of magnitude of 1:1000 in the serum of old patients (age 57 to 85 years with one exception), however, creatine kinase BB activities can be measured. The range of activities is 15 to 234 U/l, or 19 to 94% of total creatine kinase activities, respectively. At the present time there is no possibility to correlate this phenomenon to any specific disease. These cases are detected by abnormally high results of CK-MB activity measurements with the immunoinhibition test (range 60 to 202% of total creatine kinase activities) which lead to a repeated analysis using immunoprecipitation. The results of all CK-BB patients investigated till now are presented and discussed.ZusammenfassungBei der Differenzierung der Aktivitäten von Creatinkinase-Isoenzymen im Serum von Patienten mit immunologischen Methoden kann das in der Literatur beschriebene Vorkommen von Creatinkinase-BB-Aktivitäten bei verschiedenen Krankheiten bzw. Operationen im allgemeinen nicht bestätigt werden. Jedoch wird bei Patienten höheren Lebensalters (57–85 Jahre mit einer Ausnahme) mit einer Frequenz von größenordnungsmäßigl:1000 Creatinkinase-BB-Aktivität gefunden. Die Aktivitäten betragen 15–234 U/l bzw. 19–94% der Gesamt-Creatinkinase-Aktivitäten. Bisher kann kein Zusammenhang mit einer bestimmten Krankheit hergestellt werden. Diese Fälle werden dadurch erkannt, daß die Bestimmung von CK-MB-Aktivitäten mit dem Immun-Inhibitionstest abnorm hohe Werte ergibt (60–202% der Gesamt-Creatinkinase-Aktivität), die zu einer Nachprüfung mit dem Immun-Präcipitationstest führen. Die bisher untersuchten Fälle werden vorgestellt und diskutiert.

Creatine kinase* isoenzyme patterns in Duchenne muscular dystrophy

Serum creatine kinase isoenzymes were studied in 41 patients suffering from Duchenne type muscular dystrophy and 20 mothers of patients (carriers) by cellulose acetate electrophoresis. Both the MM and MB types were found in all cases of Duchenne type dystrophy patients, and in carriers with highly elevated total creatine kinase activity BB was not observed above the detection limits of the methods used. However, a so‐called atypical CK‐BB band has been demonstrated.

Activity of creatine kinase isoenzyme MB in serum and red cell acetylcholinesterase variants in patients with Duchenne muscular dystrophy.

ZusammenfassungDie Aktivitäten der Creatinkinase und des Creatinkinase Isoenzyms MB im Serum sowie Varianten der Erythrozyten-Acetylcholinesterase wurden bei Patienten mit Muskeldystrophie Typ Duchenne (DMD) und anderen Formen sowie bei den Verwandten und gesunden Kontrollpersonen bestimmt. Nur bei Fällen von DMD konnten Creatinkinase-Isoenzyme MB wie auch Varianten der Acetylcholinesterase der Erythrozyten nachgewiesen werden.SummaryActivity of creatine kinase isoenzyme MB in serum and variants of red cell acetylcholinesterase were determined in patients with Duchenne muscular dystrophy, in other forms of Dystrophy and in family members of Duchenne patients and healthy controls. Creatine kinase isoenzyme MB was observed only in all cases of DMD as well as variants of red cell acetylcholinesterase characterized by so-called inhibitor numbers. Carriers of Duchenne muscular dystrophy can be distinguished from Duchenne patients and healthy controls by estimation of Acetylcholinesterase variants.

Isoenzyme der Kreatin-Kinase: Verteilungsmuster in der Skeletmuskulatur und im Serum bei Erkrankungen sowie Schädigungen der Muskulatur

SummaryIn skeletal muscle isoenzymes of CK were determined by immunprecipitation and chromatography. The activity of CK-MB was between 17 and 47 U/g muscle, corresponding to a quota between 2,1 and 4,2% of the total activity.In sera of patients with muscular dystrophy, polymyositis, hypothyroidism, after arterial embolism, epilepsy, hyperventilation, operations and polytrauma with and without injury to the thorax isoenzymes were measured by immune precipitation- and immune inhibition-test. The percentage of CK-MB in all sera was less than 6% of the total CK-activity (range: 0 to 6%). Only patients in the first day after neurosurgical operations showed a quota till to 6.5% CK-MB. In serum of patients after polytrauma without injury to the thorax the percentage of CK-MB ranged from 0–5.7% while after polytrauma with injury to the thorax and a reasonable suspicion of a damage to the myocardium this quota was between 5.1 and 23.6% of the total activity. CK-BB activity was not detectable in any cases. Therefore a disease or damage of the skeletal muscle is more probable, if the percentage of CK-MB in less than 6%, because in sera of patients with myocardial infarction in the first 48 h after beginning of the symptoms this quota of CK-MB in the most cases in more than 6%.ZusammenfassungIn operativ gewonnenem Skeletmuskel wurden mit Hilfe der Immun-Präzipitation und der Chromatographie die Isoenzyme der Kreatin-Kinase untersucht. Dabei fanden sich Aktivitäten der CK-MB zwischen 17 und 47 U/g Frischgewicht, entsprechend einem Anteil von 2,1–4,2% der Gesamtaktivität.Bei Patienten mit Muskeldystrophie, Polymyositis, Hypothyreose, nach arteriellen Embolien, epileptischen Anfällen, Hyperventilationstetanie, Operationen und nach Polytrauma mit und ohne Thoraxverletzungen wurden im Verlaufe die Isoenzyme der CK im Serum mit Hilfe der Immun-Präzipitations- und Immun-Inhibitions-Methode bestimmt.In diesen Krankheitsgruppen ließen sich im Serum bei einem Großteil der Patienten CK-MB-Aktivitäten nachweisen. Der Anteil des CK-MB-Isoenzyms lag in allen Fällen unter 6% der Gesamtaktivität (Bereich: 0–6%). Lediglich bei Patienten am ersten Tag nach neurochirurgischen Operationen konnten CK-MB-Anteile bis zu 6,5% der Gesamtaktivität beobachtet werden. Bei polytraumatisierten Patienten ohne zusätzliche Thorax-Verletzungen betrug der Anteil der CK-MB 0–5,7%, bei polytraumatisierten Patienten nach Thorax-Verletzungen sowie dem dringenden Verdacht auf eine Myokardbeteiligung lagen diese Zahlen zwischen 5,1 und 23,6% der Gesamtaktivität. CK-BB-Aktivitäten konnten in keinem Serum nachgewiesen werden.Aufgrund dieser Ergebnisse ist 24–48 h nach Krankheitsbeginn bei einem prozentualen Anteil der CK-MB-Aktivität unter 6% der Gesamtaktivität eine Erkrankung oder Schädigung der Skeletmuskulatur wahrscheinlicher als ein akuter Myokardinfarkt, bei dem der CK-MB-Anteil im Serum über 6% liegt.

Isolation and properties of bromelin protease

Bromelin (EC. 3.4.4.24) is a mixture of several enzymes obtained from the stems of Ananas CU~OSUS [l]. Several authors, using different methods, succeeded in separating this mixture into various components [2-S]. Besides proteases bromclin contains acid phosphatase and ribonuclease [6]. This report is concerned with the enzymatic properties of bromelin main peak protease (denoted “bromelin protease” in this paper).

Immunologischer Schnelltest zur Bestimmung der Kreatinkinase MB-Aktivität im Serum

A rapid and sensitive method for the quantitative determination of creatine kinase (ATP: creatine phosphotransferase, EC 2.7.3.2, short term CK) isoenzyme MB activity is presented. This method utilises inhibiting anti-CK-MM, which is produced by immunisation of goats with reactivated human CK-MM isoenzyme. The resulting antiserum completely inhibits the activity of CK-M subunits without affecting the activity of CK-B subunits. Complete inhibition of CK-M activity is achieved within a few minutes and persists over a prolonged time. Table I shows, that in accord with the specificity of the antibodies for M subunits, within experimental error the activity of CK-MM is inhibited to 100 ~o, the activity of CK-MB to 50 ~o, and the activity of CK-BB to 0 ~. The effect can be reproduced in a CK activity range from less than 100 to 1000 U/l, Data from experiments with purified human CK isoenzymes are presented, which show the activity inhibiting action of anti-CK-MM in dependence from reaction time, from different CK substrates, and from different CK activators. These inhibiting anti-CK-MM sera can be utilised in a quantitative test for measurement of CK-MB Table 1. Inhibition of creatine kinase isoenzyme activity by inhibiting anti-CK-MM. Inactivated human sera with addition of purified CK isoenzymes. Mean values + 1 s from 5 fold measurements