Han Liqiang

猴源 cathepsin 基因shRNA文库及其稳定敲减细胞系的构建

目前关于组织蛋白酶（cathepsin）在猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）生活周期中发挥功能的研究较少。为了探究宿主细胞中cathepsin在PRRSV吸附、入侵、脱壳、生物合成、组装以及释放过程中的作用，选取源于MA-104的非洲绿猴胚胎肾上皮细胞Marc145细胞系（对PRRSV易感）；利用RNAi原理，构建了以pLKO.1为载体的cathepsin基因shRNA文库；并用puromycin筛选出稳定敲减cathepsin的细胞株。结果显示：本试验构建的cathepsin-shRNA文库包含45个克隆，涉及15种cathepsin基因，筛选出的稳定细胞株中相应cathepsin基因mRNA的表达量均有显著下降。这些细胞株的构建为进一步研究cathepsin在PRRSV生活周期中发挥的重要功能奠定了基础。