Liu Zhihong

魁蚶( Scapharca broughtonii )热休克蛋白90(HSP90)基因的克隆及转录表达分析

热休克蛋白90（HSP90）作为一种研究的常规免疫基因，在许多物种都有过报道。本研究从构建的魁蚶转录组文库中筛选得到的HSP90基因部分序列为基础，通过RACE技术获得其cDNA全长序列（命名为SbHSP90），以期明确魁蚶HSP90基因的结构特征、组织分布及其对病原菌刺激的免疫变化规律。序列和结构分析表明，该cDNA全长2707bp，编码一个由728个氨基酸组成的多肽，该多肽含有HSP90家族共有的5个签名序列，C端高度保守的MEEVD短肽序列和ATPase结构域；预测蛋白的分子量（Mw）为83.72kDa，理论等电点（pI）为4.85；预测该蛋白无信号肽，具有4个糖基化位点。同源性及系统分析表明，SbHSP90基因与软体动物的HSP90相似性达到83%以上，其中与长牡蛎（Crassostrea gigas）和海湾扇贝（Argopecten irradians）相似度最高达86%，与甲壳动物HSP90的相似度都在81%左右，与脊椎动物HSP90-α和HSP90-β的同源性都很接近。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）结果表明：SbHSP90 mRNA在魁蚶血细胞、斧足、鳃、外套膜、闭壳肌和肝胰腺和中均有表达，斧足中的表达量相对较高，而在肝胰腺中的表达量则相对较低；注射鳗弧菌后，相对于对照组，SbHSP90基因在所检测的每个组织中mRNA水平上的表达量都显著上调（P < 0.01），而且具有显著的时间依赖性和瞬时表达趋势。

魁蚶( Scapharca broughtonii )不同地理群体的遗传多样性及种群结构

采用PCR技术扩增了中国山东胶南、长岛、蓬莱、荣成和韩国统营5个地理群体魁蚶(Scapharca broughtonii)样本的COⅠ、12S rRNA、18S rRNA和28S rRNA基因部分序列，分析了魁蚶5个地理群体的遗传多样性和系统进化关系。经测序拼接、剪接后，分别获得67条776 bp的COⅠ序列、72条443 bp的12S rRNA序列、75条909 bp的18S rRNA序列和75条894 bp的28S rRNA序列。序列分析结果显示，5个群体75个个体的COⅠ序列中共检测到466个多态位点，32种单倍型，单倍型多样性指数为0.925，核苷酸多样性指数为0.086；12S rRNA序列中共检测到292个多态位点，43种单倍型，单倍型多样性指数是0.928，而核苷酸多样性为0.0856；在18S rRNA序列中，5个群体都表现出丰富的遗传多样性，共有74种单倍型，909个多态位点，单倍型多样性指数为1.0，核苷酸多样性指数为0.717，其中胶南群体变异位点最多、多样性最丰富；通过对28S rRNA部分序列的分析发现，75个个体共检测到27个多态位点，18种单倍型，单倍型多样性指数为0.778，核苷酸多样性指数为0.289，蓬莱群体多样性最丰富。遗传距离分析结果表明，韩国群体与其他4个群体的遗传距离较大；基于COⅠ序列的系统进化树显示有多个聚群。