M. Carmen San José

Conservación del germoplasma de especies leñosas con técnicas de cultivo in vitro y alamacenamiento en frío

El mantenimiento in vitro de tejidos vegetales constituye un procedimiento esencial para la conservacion y el intercambio de recursos geneticos. El cultivo in vitro se define como un proceso en el que las celulas, tejidos, o organos vegetales son cultivadas en condiciones asepticas en un ambiente controlado. Esta metodologia ofrece la posibilidad de almacenar un gran numero de muestras en un espacio reducido, ademas de permitir la conservacion de aquellas especies con semillas de poca viabilidad, cultivos de propagacion clonal en masa, cultivos altamente heterocigoticos o cultivos que requieren ser propagados vegetativamente para conservar su integridad genetica. Los cultivos establecidos in vitro se pueden conservar a corto plazo (desde 1 semana a dos meses) y a medio plazo manipulando las condiciones de crecimiento. La conservacion a largo plazo de cultivos in vitro se puede lograr usando condiciones de almacenamiento en nitrogeno liquido o crioconservacion. El objetivo de este trabajo ha sido describir las principales metodologias para conservacion in vitro a corto y medio plazo de germoplasma de una serie de especies lenosas lo que ha permitido al Departamento de Fisiologia Vegetal del Instituto de Investigaciones Agrobiologicas de Galicia (CSIC) el establecimiento de un banco de germoplasma de especies lenosas.

Micropropagación del aliso común para la conservación de su germoplasma

Se ha establecido un sistema de propagacion in vitro a partir de material adulto del aliso comun (Alnus glutinosa). Para la iniciacion de los cultivos se recogieron ramas de la copa o renuevos basales de arboles de entre 20-30 anos, que se forzaron a desarrollar brotes en condiciones controladas. Estos brotes sirvieron para la iniciacion de los cultivos utilizando el medio WPM con 2 mg/l de benciladenina y 0.5 mg/l de acido indol acetico. La etapa de multiplicacion se dividio en 3 ciclos de 3 semanas cada uno, transfiriendo los brotes a medio fresco al final de cada uno de los ciclos, utilizandose el mismo medio que en la etapa de establecimiento (WPM) y como reguladores de crecimiento se anadieron al medio: acido indol acetico 0.5 mg/l durante los 3 ciclos, benciladenina 0.2 mg/l (durante el primer ciclo y 0.1 mg/l durante los dos siguientes), y zeatina 0.5 mg/l en el tercer ciclo. Brotes (1.5-2 cm) procedentes de la etapa de multiplicacion se enraizaron in vitro, consiguiendo porcentajes de rizogenesis de hasta un 75% tanto en los controles como en los tratamientos con acido indol butirico 0.1 mg/l, aunque la presencia de auxina incremento la velocidad de formacion de las raices adventicias.

Efecto de los carbohidratos sobre la micropropagación de Alnus glutinosa (L.) Gaertn

En este trabajo se describe el efecto de los carbohidratos sobre el desarrollo de los brotes y la formacion de raices adventicias en dos clones de origen adulto de Alnus glutinosa (L.) Gaertn. previamente establecidos in vitro. Para la multiplicacion se utilizo el medio WPM suplementado con 0,5 mg/l de acido indol acetico, 0,2-0,1 mg/l de benciladenina y 0,5 mg/l de zeatina, como fuente hidrocarbonada se utilizaron glucosa (111 o 166 mM) o sacarosa (58 o 87 mM). El tipo de azucar anadido al medio de cultivo tuvo una notable influencia sobre el desarrollo de los brotes, obteniendo los mejores resultados cuando se utilizo glucosa 111 mM. Con la concentracion mas elevada de glucosa (166 mM) los brotes presentaban signos de hiperhidricidad. Los mejores porcentajes de enraizamiento se obtuvieron al combinar el efecto de la glucosa y el tratamiento con acido indol butirico 0,1 mg/l durante los 7 primeros dias. Las plantas obtenidas in vitro se transfirieron al suelo con porcentajes de supervivencia superiores al 90%.