María José Soto

ELISA test to detect Chlamydophila pneumoniae IgG.

A new ELISA test (Chlamydophila pneumoniae IgG, Vircell, Spain) to detect Chlamydophila pneuoniae IgG was evaluated. The micro‐immunofluorescence (MIF) test was used as reference method. Chlamydia trachomatis and Chlamydophila psittaci elementary bodies were also assayed. Two hundred and sixteen sera were included in the study: 66 from patients with peripheral arterial occlusive disease (Panel 1), 68 from adults with pneumonia (Panel 2), 44 from healthy adults (Panel 3) and 38 from patients with a sexuality transmitted disease by C. trachomatis (Panel 4). In Panel 1, 51 sera (77%) had antibody titres between 32 and 128; 4 out of 15 sera with IgG titres <32 were positive by ELISA test and 2 sera with 32 IgG titres were uncertain by ELISA; the remaining 60 sera were correctly classified, giving a 91% concordance between the techniques. In Panel 2, 55 sera (81%) had IgG titres between 32 and 512; 2 out of 13 sera with IgG titres <32 were positive by ELISA and 2 sera with 32 titres were uncertain by ELISA; the remaining 64 sera were correctly classified, giving a 97% concordance. In Panel 3, 22 sera (50%) had IgG titres between 32 and 64; only 1 out of 22 sera with IgG titres <32 was positive by ELISA, giving a 97% concordance between the techniques. In Panel 4, there were 24 (63%) negative, 10 (26%) uncertain and 4 (10%) positive results by ELISA, giving an 86% concordance. The C. pneumoniae ELISA test demonstrated 100% sensitivity and 85% specificity. The IgG ELISA test demonstrated a good concordance with the MIF test without the drawbacks associated with the latter assay. We conclude that the ELISA test could be an alternative to the MIF test.

Clinical utility of a competitive ELISA to detect antibodies against Treponema pallidum.

Screening for Treponema pallidum infection is carried out on a large human population. To reduce costs, fewer tests which still offer adequate sensitivity and specificity could be performed. We studied the reliability of a novel indirect ELISA method to test for this infection. Several panels of sera were used that corresponded to 40 primary infections (group 1), 13 recurrences (group 2), 348 latent infections (group 3), 5 samples with anticardiolipin antibodies (group 4), 15 samples from patients with Lyme borreliosis (group 5), and 400 samples from blood donors and healthy pregnant women (group 6). The ELISA showed a global sensitivity and specificity of 100 and 99.5%, respectively. Our evaluation shows that Enzygnost Syphilis is a sensitive, specific, and simple test to screen for this infection. J. Clin. Lab. Anal. 14:83–86, 2000.

Antibodies to Borrelia burgdorferi in European populations.

We compared the antibodies to B. burgdorferi in three different populations in order to evaluate the diagnostic reliability of Lyme borreliosis serologic analysis. The subjects included 25 patients with Lyme borreliosis (Group 1); 50 patients with diseases of unknown cause, B. burgdorferi ELISA‐positive in serum and without B. burgdorferi infection (Group 2); and 1,251 individuals without Lyme borreliosis (Group 3). All samples were tested for B. burgdorferi B31 and B. afzelii antigens using ELISA. The positive results of the ELISA B. burgdorferi B31 assay were confirmed with Western blot for the same strain. In Group 3, 162 (12.9%) patients were ELISA positive for B. burgdorferi B31, while only 6 (0.6%) patients had IgG ELISA antibodies to B afzelii. Bands in WB were detected in 104 (8.4%) of the Group 3 subjects. The bands found to be most reliable for the identification of strain B. burgdorferi B31 by IgG WB were those representing the 93, 39, 34, and 23‐kDa proteins. Our results show that serologic diagnosis of Lyme borreliosis is far from clearly established. To date, the only reliable criteria are clinical ones correlated with laboratory evidence. J. Clin. Lab. Anal. 14:20–26, 2000.

Descripción de inmunógenos de Chlamydia pneumoniae reconocidos por el suero de sujetos con enfermedad arterial periférica

Fundamento y objetivo: Se estudian, en sujetos con enfermedad arterial periferica, los tipos de anticuerpos frente a Chlamydia pneumoniae y su relacion con la presencia de la bacteria. Pacientes y metodo: Se ha realizado un estudio en 68 casos y 50 controles en los que se investigaron en suero las inmunoglobulinas (Ig) G y A frente a C. pneumoniae mediante Western-blot (comercial y no comercial), enzimoinmunoanalisis y microinmunofluorescencia (MIF), asi como el ADN de la bacteria en biopsia de tejido vascular mediante reaccion en cadena de la polimerasa. Resultados: Mediante Western-blot comercial se encontro, en los casos, una presencia significativa de IgG anti-39 kDa y anti-54 kDa, que se relacionaron con los resultados obtenidos mediante MIF y con la presencia de ADN de C. pneumoniae; asi como de IgA antilipopolisacarido, anti-92 kDa y anti-Hsp60 kDa, que se relacionaron con la presencia de ADN. Mediante Western-blot no comercial destaco la presencia significativa, en los casos, de las bandas de 128,8 y 9,2 kDa para la IgG, que se asocio con la existencia de ADN; tambien se detectaron en los casos bandas de IgG de 70,8, 58,9, 47,9, 47,5, 18,4, 12,1, 10,6, 8,1 y 7,6 kDa; asimismo se detecto ADN cuando se observaron las bandas de 54,6 y 1,1 kDa de IgG, y las bandas de 79,4, 50,1 y 18,4 kDa de IgA. Conclusiones: En los sujetos con enfermedad arterial periferica se encontro una respuesta serologica, mediante Western-blot, mas importante frente a determinadas proteinas de la bacteria. Esto podria reflejar una fase inicial con presencia de ADN e IgG especifica. Posteriormente, aun en ausencia de la bacteria, podria existir una enfermedad inmunomediada con presencia de IgA e IgG.

Utilidad del dímero-D en la enfermedad tromboembólica venosa

Venous thromboembolism (VTE) is associated with substantial morbidity and mortality. The clinical signs and symptoms are unspecific, widely varying from asymptomatic to sudden death. The diagnostic algorithm of VTE is an evolving field, in which D-dimers (DD) determination has been used as one of the preferred screening tests. Clinical management studies are clarifying the role of DD in the diagnostic paradigm of VTE. Published reports support the use of plasma DD determination in patients with a low clinical probability of VTE. Patients with moderate or high clinical probability of VTE show a higher probability of false negative plasma DD values. This fact forces the clinician to use more complex diagnostic test in order to either confirm or exclude VTE. A variety of different qualitative and semi-quantifiable assays are available for plasma DD determination. There is a wide variation in performance and there are discrepancies in the comparability of the different assays. Therefore, in order to both appropriately incorporate plasma DD determination in the diagnostic strategies of VTE and to reduce unnecessary investigations, clinicians should ensure that they are familiar with the diagnostic performance of the assay used in their own institution allowing a safer and cost-effective procedure.

Relación entre la enfermedad arterial periférica oclusiva y la infección por Chlamydophila pneumoniae

Fundamento y objetivo: Estudiar la relacion entre la enfermedad arterial periferica oclusiva y la infeccion por Chlamydophila pneumoniae a traves del estudio de muestras clinicas de 95 enfermos (casos) y 100 controles. Pacientes y metodo: Se investigaron mediante enzimoinmunoanalisis las inmunoglobulinas (Ig) G y A frente al lipopolisacarido (LPS) y antigenos especificos de C. pneumoniae presentes en cuerpos elementales (CE) purificados; mediante microinmunofluorescencia la IgG anti-CE; mediante reaccion en cadena de la polimerasa semianidada, el ADN de C. pneumoniae en biopsias arteriales y leucocitos de sangre periferica; mediante enzimoinmunoanalisis el LPS, y la recuperacion de la bacteria en celulas Hep-2 desde biopsias arteriales. Resultados: Los valores obtenidos para la IgG anti-LPS en los grupos de casos y controles fueron del 21 y el 14%, respectivamente, sin diferencias significativas; tampoco la hubo para la IgA (el 22 y el 21%, respectivamente). Si se encontraron diferencias para la IgG anti-CE entre los casos (el 74 y el 72%, para el enzimoinmunoanalisis y la microinmunofluorescencia, respectivamente) y los controles (el 31 y el 34%). No hubo diferencias para la IgA anti-CE. El ADN de la bacteria se detecto en el 67% de las placas de ateroma (casos) y en el 12% de las arterias pudendas (controles) (p = 0,0001). No se detectaron ADN y LPS de C. pneumoniae en los leucocitos y biopsias arteriales, respectivamente. No se pudo recuperar la bacteria mediante cultivo en el grupo de casos. Conclusiones: Nuestros resultados asocian de manera significativa la enfermedad arterial periferica oclusiva con la infeccion por C. pneumoniae a traves de la presencia de la IgG anti-CE en suero y el ADN de la bacteria en biopsia arterial.

Control de calidad interno del inmunodiagnóstico microbiano para conseguir la calidad global

laboratorio, aunque no semejante, dado que los errores pueden pasar desapercibidos con mayor facilidad. Entonces, ?por que hacerlo?: a) porque se trabaja con sistemas biologicos acoplados (multiples epitopos, variabilidad biologica de los anticuerpos en la enfermedad, significado clinico, etc.) que hay que tener estandarizados y vigilados para detectar los desajustes; b) por la complejidad y sensibilidad de la seroquimia de los inmunoensayos; y c) por los problemas derivados de la automatizacion en el laboratorio. Controlando la calidad de la serologia se contribuye al control de calidad del diagnostico clinico, que tiene que solicitar la prueba mas adecuada basandose en el diagnostico mas probable y sobre una muestra recogida en el momento y la cantidad adecuada5,6. La calidad del trabajo puede juzgarse utilizando diferentes conceptos como la fiabilidad, que informa si el resultado de una prueba es correcto, la reproducibilidad, basada en la obtencion de resultados concordantes al efectuar varias veces el mismo ensayo; la rapidez, que ayuda al clinico a instaurar el tratamiento y la pauta adecuada en el menor tiempo posible; y la relacion costebeneficio, validando una prueba determinada en la medida en que los beneficios que reporta al paciente y la comunidad sean razonables. Se han establecido una serie de propiedades que debe cumplir el control de calidad. Asi, debe aplicarse de manera integral, desde la recogida de la muestra hasta la llegada del resultado al clinico; los pasos cruciales del proceso se controlaran de forma especial, lo que se determina aplicando un metodo racional; se aplicara de un modo regular o reiterado; y los errores y defectos que se pueden presentar durante su aplicacion se detectaran y corregiran de manera frecuente. El control de calidad presenta ventajas en su aplicacion, ya que permite asegurar, entre otras, que las pruebas costosas se utilicen del modo mas racional; determina si las pruebas nuevas son validas o no; mejora el funcionamiento general del laboratorio y contribuye a hacer comparables los resultados obtenidos en diferentes momentos o lugares7. Se han establecido dos grandes grupos en la realizacion del control de calidad, pudiendo ser estos internos y externos8. Los controles externos evaluan la precision, rapidez, tipo e interpretacion de los resultados obtenidos en una muestra enviada a nuestro laboratorio. Se efectuan de forma voluntaria u obligatoria, estos ultimos como apoyo oficial que aporte mejoras en las tecnicas. Las realizan organismos oficiales o sociedades cientificas que llevan a cabo inspecciones ocasionales proporcionando una muestra anonima y semejante a todos los laboratorios que participen en el control. Correspondencia: Dr. J. Gutierrez. C/ Camino Bajo de Huetor, 84 1o A. 18008 Ganada. Correo electronico: josegf@goliat. ugr.es joseg.f@wanadoo.es