Marlene I. Vargas

Polymorphism of the bm86 gene in South American strains of the cattle tick Boophilus microplus.

Thirty Boophilus microplus strains from various geographic regions of Brazil, Argentina, Uruguay, Venezuela and Colombia were analyzed for the bm86 and bm95 gene. A fragment of cDNA of 794 base pairs of the parasite larvae, included between nucleotides 278–1071s, was amplified and cloned on the pGEM-T vector. Two random clones were sequenced for each population and the nucleotides 278–1071 and predicted amino acid sequences compared with the bm86 and bm95 genes. Variations from 1.76 to 3.65% were detected in the nucleotides sequence when compared with the homologous sequence of the bm86 gene and a 3.4–6.08% in the homologous amino acid sequence of the Bm86 protein. When the sequences obtained were compared with the bm95 gene, variations from 0.50 to 3.15% were detected. Variations from 1.14 to 4.56% were detected for the Bm95 protein homologous sequences in the deduced amino acid sequence. Only five of the 30 strains analyzed presented two different types of alleles expressed and the two alleles of the Alegre population and allele 1 of the Betim population were the most divergent of all those analyzed.

Ocorrência de anticorpos anti-Neospora spp. em jumentos (Equus asinus) no estado de Sucre - Colômbia

The neosporosis has great importance in cattle, and its pathogenesis in this host has been generally clarified, however, in horses, neosporosis is poorly known, and in Colombia anti-Neospora spp antibodies have not been reported. Therefore, the main objective in the present study was to evaluate the occurrence of this parasite in donkeys (Equus asinus) from farms that presented a risk of disease in these animals, as well as no health plan for them. Were used 56 animals randomly chosen inside selected farms in the state of Sucre (Colombia). A recombinant peptide originated from Neospora caninum (NcGRA1) was used for the diagnosis with Dot-ELISA and serum was diluted 1:200. This study is the first to report the presence of anti-Neospora spp. in donkeys (Equus asinus) in the state of Sucre, and in Colombia. The occurrence was in 19.7% of the animals sampled (11/56).

Efeito do estresse moderado crônico sobre parâmetros de avaliação óssea em ratos adultos machos e fêmeas

A osteoporose e uma doenca multifatorial, de alta prevalencia e que tem um grande impacto na qualidade de vida, principalmente porque os efeitos sobre a estrutura do osso aumentam o risco de fraturas, que podem ser muito debilitantes. Com base na observacao de que pacientes com depressao tem menor densidade mineral ossea que individuos saudaveis​​, muitos estudos tem indicado que o estresse pode ser um fator agravante para a perda ossea. Este estudo avalia o efeito de um protocolo de estresse moderado cronico (EMC) em parâmetros de avaliacao ossea em ratos machos e femeas. Cinco animais de cada sexo, com cinco meses de idade, foram submetidos a um cronograma de aplicacao de estressores durante 28 dias. Os estressores incluidos foram: frio, calor, contencao, inclinacao da gaiola, isolamento, iluminacao durante a noite e privacao de agua e racao. Cinco animais de cada sexo foram mantidos com um minimo de intervencao como grupo controle. Os animais foram pesador no inicio e no final do periodo, e apos eutanasia tiveram seus ossos coletados. Femur, tibia e vertebra lombar foram analisados por densitometria ossea. Testes biomecânicos foram realizados na cabeca e na diafise do femur. Volume trabecular osseo foi obtido a partir de analise histomorfometricas da cabeca do femur e do corpo vertebral, bem como medidas da secao transversal diafise femoral. Nem todos os parâmetros avaliados sofreram efeito do protocolo de EMC. No entanto, a densidade mineral ossea da tibia e da vertebra L4 e a razao osso cortical/medula da secao transversal da diafise femoral foram menores nas femeas submetidas ao protocolo. Entre os ratos machos, as diferencas foram significativas no volume trabecular osseo da cabeca femoral e na carga maxima obtida no teste biomecânico. Assim, confirma-se que o protocolo de EMC pode afetar o equilibrio da homeostase ossea em ratos, o que pode contribuir para o estabelecimento de osteopenia ou osteoporose.

Importância das vacinas sintéticas contra o carrapato Rhipicephalus microplus

Rhipicephalus microplus, do ponto de vista economico, e o parasita mais importante dos rebanhos bovinos nas Americas Central e Sul e na Australia, pois acarreta severos prejuizos diretos e indiretos na producao animal. O controle deste parasita repousa principalmente na utilizacao de drogas carrapaticidas que sao responsaveis pela selecao de populacoes resistentes, alem de causar a contaminacao com residuos na carne, leite e derivados e no meio ambiente. Isso gera uma necessidade de se desenvolver metodos alternativos, seguros e eficientes de controle, os quais possam atuar de modo integrado. Os avancos das tecnicas de biologia molecular impulsionaram varias linhas de pesquisa na area de parasitologia veterinaria, principalmente no desenvolvimento de vacinas. Vacinas derivadas da glicoproteina intestinal do R. microplus, a Bm86, possuem um amplo potencial como metodo nao quimico no controle dos carrapatos. O peptideo sintetico SBm7462®, uma vacina sintetica derivada da Bm86, a qual tem demonstrado sua eficacia na inducao da resposta imune dos animais com ela imunizados.

Resposta de linfonodos em bovinos inoculados a campo com a vacina recombinante rSBm7462 anti Rhipicephalus (Boophilus) microplus)

Exclusive chemicals dependence for the control of Rhipicephalus (Boophilus) microplus has become one of the largest scientific and economical concerns in recent years, and as a result, research to vaccine development are being undertaken. The objective of this study was evaluating the lymph nodes response of cattle immunized at field with the rSBm7462 anti-R. (B.) microplus peptide. Fourteen crossbred cattle (Bos taurus x Bos indicus), aged 4-10 months, were used. The animals were maintained on two farms in the north of Minas Gerais state and received three immunizations with the peptide rSBm7462 applied subcutaneously at 30-day intervals. Pre-scapular lymph nodes were collected surgically 15 days after each immunization and fixed in formalin for 18 hours, then, they were embedded in Paraplast subsequently and the samples were stained with Hematoxylin-Eosin (HE) technique for cellular events observation. On the other hand, in order to antigens identifying in immunized animals lymph nodes, the immunohistochemistry (IHC) with peroxidase-anti peroxidase (PAP) method was performed. Lymph node response of cattle inoculated was evaluated by analysis of germinal centers (GC) formation, medullary cords hyperplasia (MC) and antigen rSBm7462 presence in PAP+ cells. This study shows that the recombinant peptide rSBm7462 induces a T-dependent adaptive immune response characterized on secondary lymphoid tissues by structure formation for affinity and immunological memory.

Babesia bovis: expression of adhesion molecules in bovine umbilical endothelial cells stimulated with plasma from infected cattle

ABSTRACT.- Vargas M.I., Patarroyo J.H., Hernandez M., Peconick A.P., Patarroyo A.M., Ta-fur G.A., Araujo L.S. & Valente F. 2014. Babesia bovis : expression of adhesion molecules in bovine umbilical endothelial cells stimulated with plasma from infected cattle. Pesquisa Veterinaria Brasileira 34(10):937-941. Laboratorio de Biologia e Controle de He-matozoarios e Vetores, Departamento de Veterinaria, Instituto de Biotecnologia Aplicada a Agropecuaria, Universidade Federal de Vicosa, Campus Universitario, Vicosa, MG 36570-900, Brazil. E- mail: jpatarro@ufv.brTen male, 12-month-old Jersey with intact spleens, serologically and parasitologically free from Babesia were housed individually in an arthropod-free isolation system from bir -th and throughout entire experiment. The animals were randomly divided into two groups. Five animals (group A) were intravenously inoculated with 6.6 X10 7 red blood cells para-sitized with pathogenic sample of Babesia bovis (passage 7 BboUFV-1), for the subsequent “ex vivo” determination of the expression of adhesion molecules. Five non-inoculated ani-mals (group B) were used as the negative control. The expression of the adhesion mole-cules ICAM-1, VCAM, PECAM-1 E-selectin and thrombospondin (TSP) was measured in bovine umbilical vein endothelial cells (BUVECs). The endothelial cells stimulated with a pool of plasma from animals infected with the BboUFV-1 7

Desenvolvimento e padronização do Dot-ELISA usando peptídeos recombinantes para o diagnóstico sorológico de Neospora caninum

A neosporose e reconhecida como uma das maiores causas de aborto e perdas neonatais em bovinos de leite e corte em todo o mundo. Nos ultimos anos esta doenca tem atraido o interesse de pesquisadores com foco na epidemiologia e metodos eficazes de diagnostico desta doenca. No presente estudo objetivou-se desenvolver e padronizar um teste Dot-ELISA para o diagnostico sorologico de Neospora caninum com um peptideo recombinate como antigeno, visando o desenvolvimento de um kit para diagnostico a campo. O peptideo recombinante (rNcGRA1) foi desenhado com base na metodologia de genetica reversa de epitopos antigenicos originados de uma proteina de grânulos densos de N. caninum, e sintetizado pela GenScript (USA). Produzido mediante o processo fermentativo em leveduras Pichia pastoris KM71. Para a padronizacao do Dot-ELISA, membranas de nitrocelulose de 0.22µm foram sensibilizadas com 1µL do antigeno e posteriormente os soros foram diluidos em solucao de lavagem e incubados durante 1 hora. A revelacao foi feita mediante a adicao de Proteina G marcada com peroxidase por 30 minutos, seguido da solucao reveladora a base de 3,3’-Diaminobenzidine (DAB). Logo apos a padronizacao foram testados 44 soros bovinos diagnosticados por imunofluorescencia indireta (RIFI), obtendo-se uma concordância nos resultados do teste de 95,5% e uma sensibilidade e especificidade de 100% e 92% respectivamente. Quanto ao Kit para diagnostico a campo na Plataforma Tecnologica RapidFlow-Through Miriad®, o peptideo rNcGRA1 apresentou marcacoes visiveis ao reagir com os soros positivos, e nao apresentou marcacoes usando os soros negativos. Este estudo e o primeiro a utilizar peptideos recombinantes e mostrar-se eficiente para o diagnostico sorologico de bovinos naturalmente infetados por N. caninum.