Miao Liang

Studies on the growth characteristics and heterosis of genealogies of Pseudosciaena crocea.

In this study,the growth characteristics of four Pseudosciaena crocea groups including the selfing of DD(Daiquyang♀×Daiquyang♂),the selfing of GG(Guanjingyang♀×Guanjingyang ♂),their direct cross DG(Daiquyang ♀×Guanjingyang ♂),and back-cross GD(Guanjingyang ♀ × Daiquyang ♂) were determined.Results after 526 days of grow-out showed that the final mean weights were higher for the GG(330.514 g) and the GD(336.694 g) than those of the DD(278.975 g) and the DG(243.297 g).The 1-year-old DD grew in a lower rate,but after the winter,the growth rate of DD accelerated significantly:the growth rate in length was higher than the other three groups while the weight gain was not significantly different from the GG and the GD.That is,the growth potential of the DD at later stage was high.The order of the fullness on 526th day was DDDGGDGG.A superior cross GD was constructed,which displayed significant heterosis for growth and body shape.It was concluded that the GD had excellent economic and breeding potential.The growth curves(DD:W=0.020 6L2.942 7,R2=0.994 9;GG:W=0.013 9L3.099 4,R2=0.978 5;DG:W=0.022 9L2.913 6,R2=0.990 5;GD:W=0.017 7L3.007 9,R2=0.994 9) fitted according to weight and body length had the high degree.The weight could be estimated by their body length,and this growth curves model could be applied in the production.

大黄鱼冷诱导结合蛋白(CIRP)基因cDNA克隆及低温胁迫对其时空表达的影响

为研究冷诱导结合蛋白(CIRP)在大黄鱼低温适应过程中的作用，采用同源克隆技术获得了大黄鱼 CIRP 基因，并通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)技术检测了低温胁迫下大黄鱼各组织中 CIRP 基因的表达变化。结果显示，大黄鱼 CIRP 基因cDNA序列全长1211 bp，推测编码一个由182个氨基酸组成、分子量为19 ku的蛋白。序列比对显示硬骨鱼类 CIRP 基因序列较为保守，特别是N端的RNA识别基序(RRM)高度保守。系统进化树分析显示大黄鱼 CIRP 与银鳕相似性最高(81.5%)，所有硬骨鱼类聚为一个大支。慢性低温胁迫中(12 °C缓降至6 °C)，皮肤和肌肉中 CIRP 基因的表达量呈随温度降低而升高的趋势，6 °C时表达量分别为12 °C时的11.56倍和9.03倍；鳃、脑和心脏中 CIRP 基因表达量均呈先显著上升后显著下降的趋势，其峰值均出现在8 °C时，表达量分别为12 °C时的5.07、7.69和2.83倍；肠、肾脏、肝脏和脾脏中的表达量随温度降低而下降，6 °C时的表达量最低，与12 °C时相比降幅分别为80.0%、65.6%、91.2%、55.6%。急性低温胁迫(由12 °C骤降至8 °C并胁迫4 h)条件下，鳃、皮肤、脑、肝脏、心脏中 CIRP 基因表达量均呈先升高后降低的变化，反映了机体对低温胁迫的应激、适应过程；肌肉和肠中的表达量则始终显著低于胁迫前。慢性和急性低温胁迫中各组织 CIRP 表达量变化的差异提示，大黄鱼机体在低温胁迫响应和适应中有着多种调节机制。研究表明， CIRP 基因参与了大黄鱼应对低温胁迫的过程。

香鱼 ( Plecoglossus altivelis ) 铁蛋白的分子鉴定、表达及功能研究

铁蛋白（Ferritin，Fer）是一类广泛存在于生物体内、并与铁代谢密切相关的铁储存蛋白。本研究通过香鱼（ Plecoglossus altivelis ）单核/巨噬细胞转录组测序获得铁蛋白亚基基因（PaFer）cDNA全序列，结果显示，PaFer由943个核苷酸组成，开放阅读框为531bp，编码176个氨基酸，预测相对分子质量为20.4kDa，等电点为5.46。氨基酸序列多重比对结果显示，PaFer具有保守的铁蛋白样双铁结构域，与虹鳟（ Oncorhynchus mykiss ）和大西洋鲑（ Salmo salar ）Fer M亚基（Fer-M）同源性最高，均为92%；系统进化树分析表明，PaFer与胡瓜鱼、大西洋鲑和虹鳟的Fer-M聚为一个小簇，与虹鳟Fer-M进化相关性最高。实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）结果表明，PaFer mRNA主要在香鱼脾脏中表达量最高，肾脏、鳃、脑和心脏中次之；鳗弧菌（ Vibrio anguillarum ）感染后，香鱼肝脏、脾脏和肾脏等组织中PaFer mRNA表达显著上调。原核表达了PaFer重组蛋白（rPaFer），rPaFer以包涵体形式表达，镍柱亲和层析纯化重组蛋白，尿素梯度透析法复性rPaFer。铁螯合实验结果显示，当rPaFer浓度为4μg/mL时，螯合铁的能力最大，为43.96%。抑菌实验结果表明，rPaFer对鳗弧菌、溶藻弧菌（ Vibrio alginolyticus ）和创伤弧菌（ Vibrio vulnificus ）的最小抑菌浓度分别为1.5625、25.0和100.0μg/mL。综上，PaFer与香鱼抗病原感染的免疫反应紧密相关，可能通过调控铁代谢参与鱼类抵抗微生物的宿主自身免疫过程。本研究为进一步研究鱼类Fer的功能及在病原菌感染免疫中的分子机制奠定基础。

大黄鱼( Larimichthys crocea )新品种“东海1号”体长相关的DArT标记筛选

大黄鱼（ Larimichthys crocea ）是我国重要的海产经济鱼类。因多年未加选育的累代养殖，养殖大黄鱼生长缓慢，性早熟、免疫力低下，亟需对养殖大黄鱼进行遗传改良。多样性芯片技术（Diversity arrays technology，DArT）具有高通量和低成本的显著特点，不需要明确物种的基因组DNA序列信息，因而广泛应用于动植物遗传图谱制作和遗传多样性分析。本研究旨在采用DArT技术鉴定与“东海1号”大黄鱼体长相关分子标记。首先随机测得“东海1号”大黄鱼199个个体体长，均值为13.45cm，符合正态分布（ P >0.05），“极端大群体”和“极端小群体”之间差异显著（ P Pst I/ Alu I、 Pst I/ BanI I、 Pst I/ Bsp 1286I、 Pst I/ Bst NI、 Pst I/ Hae Ⅲ、 Pst I/ Rsa I、 Pst I/ Taq I）分别进行酶切，获得基因组代表性DNA片段并用于文库构建。根据多态性克隆数和多态性率确定 Pst I/ Rsa I酶切组合为最优降低基因组复杂度方法。之后从 Pst I/ Rsa I基因组代表性DNA片段文库中扩增获得3360个片段，以此为多样性芯片探针进行芯片点制，杂交筛选获得18个大黄鱼体长相关DArT候选标记。经过新群体样本再次验证，仍有8个DArT标记与体长相关。本研究有助于选育生长性状优良的大黄鱼群体。