Piedad C. Gomez-Contreras

MG132 proteasome inhibitor modulates proinflammatory cytokines production and expression of their receptors in U937 cells: involvement of nuclear factor‐κB and activator protein‐1

In response to inflammatory stimuli, monocytes/macrophages secrete greater quantities of the proinflammatory cytokines tumour necrosis factor‐α (TNF‐α), interleukin‐1β (IL‐1β) and IL‐6. The inflammatory process and the innate immune response are related to the activation of several transcription factors, such as nuclear factor κB (NF‐κB) and activator protein 1 (AP‐1). The proteasome is a multimeric protease complex, which plays a vital role in several cellular functions, including the regulation of transcription factors like NF‐κB. In this study, we used the human monocyte cell line U937 stimulated with lipopolysaccharide (LPS) and phorbol 12‐myristate 13‐acetate (PMA) as a model to investigate the in vitro effects of MG132, a proteasome inhibitor, on the release of TNF‐α, IL‐1β and IL‐6 and on the expression of their membrane and soluble receptors TNF‐R1, IL‐1R1 and IL‐6R. We also analysed the effects of MG132 on the activation of NF‐κB and AP‐1 and on the IκB molecule. MG132 significantly inhibited the secretion of those proinflammatory cytokines. MG132 increased the release of the soluble receptors TNF‐R1 and IL‐1R1 from U937 cells and decreased their cell‐surface expression. MG132 also increased IL‐6R cell‐surface expression and decreased its release. Proteasome inhibition also led to an increase in LPS+PMA‐induced AP‐1 activation and the attenuation of LPS+PMA‐induced IκB degradation, resulting in the abolition of NF‐κB activation. Our experiments strongly suggest that the proteasome is an important factor in the regulation of proinflammatory cytokines and their receptors.

Retinopatía del prematuro y estrés oxidativo

Introduccion Existen algunas evidencias de que la retinopatia del prematuro es consecuencia de un elevado estres oxidativo sobre la retina en desarrollo, lo cual se debe a la generacion exagerada de radicales libres o a una disminucion en la capacidad para su eliminacion. Objetivo Determinar la asociacion entre la concentracion elevada de estres oxidativo y la presencia de retinopatia del prematuro. Material y metodos Se realizo un estudio de cohorte prospectiva. Se incluyeron 50 prematuros de menos de 33 semanas de gestacion. El estres oxidativo se midio con la concentracion serica de lipoperoxidos. Se tomaron muestras a partir de la primera semana de vida y despues, cada semana hasta la cuarta. Se compararon los resultados de las 4 muestras juntas, entre los prematuros con retinopatia de cualquier grado con los que no la desarrollaron. Las evaluaciones oftalmologicas se realizaron a partir de la cuarta semana de vida. Resultados La incidencia de retinopatia en el estudio fue del 22 % (11/50). Hay una diferencia significativa en los valores promedio de todas las muestras, entre aquellos que presentaron retinopatia del prematuro, 5,44 ± 1,30 nmol/ml, comparados con los que no presentaron la enfermedad, 2,94 ± 0,89 nmol/ml, con una p = 0,00001. El riesgo relativo para el desarrollo de retinopatia con concentraciones elevadas de lipoperoxidos fue de 5,15, 5,63, 4,15 y 12,70 para las muestras de cada una de las semanas, respectivamente. Conclusiones Existe una asociacion entre la concentracion elevada de lipoperoxidos sericos, como una medida de estres oxidativo y la incidencia de la retinopatia del prematuro.

In vitro Induction of Apoptosis in U937 Cells by Perillyl Alcohol with Sensitization by Pentoxifylline: Increased BCL-2 and BAX Protein Expression

Background: Chemotherapy is effective against a wide variety of tumor cells, although its use is limited by side effects. In vitro experiments and phase I and II trials have shown that phytochemicals such as perillyl alcohol (P-OH) have antitumor effects. Pentoxifylline (PTX), a synthetic methylxanthine used mainly to treat pathologies associated with hematological diseases, sensitizes tumor cells to chemotherapy. The aim of this study was to determine whether PTX amplifies the antitumor effects of P-OH in U937 human myelomonocytic leukemia cells. Methods: Apoptosis was measured by the loss of mitochondrial membrane potential determined by flow cytometry using dihexyloxacarbocyanine iodide (DiOC6) and propidium iodide. Bcl-2 and Bax protein expression was also assessed by Western blot analysis. Results: P-OH and PTX induced loss of the mitochondrial membrane potential in U937 cells in vitro. Culturing the cells in the presence of both compounds caused a significant increase (p < 0.001) in apoptosis and expression of anti-apoptotic Bcl-2 and pro-apoptotic Bax proteins. However, despite their coexistence, Bax expression prevailed in our experiments. These data suggest that the effects of PTX might be attributable to changes in the mitochondrial membrane potential. Conclusion: PTX sensitizes tumor cells to the anti-neoplastic action of P-OH. These observations may have clinical relevance in the treatment of cancer patients.

Glucosaminoglicanos séricos de pacientes con artritis reumatoide no afectan la secreción de especies reactivas de oxigeno de monocitos normales.

Introduccion. Diversas observaciones sugieren que los macrofagos juegan un papel importante en la fisiopatologia de la artritis reumatoide (AR). Uno de los mas importantes hallazgos de la AR es la importante destruccion del cartilago con la consecuente liberacion de glucosaminoglicanos (GAG). Nosotros estudiamos si los GAG de pacientes con AR pueden inducir a los monocitos de sangre periferica a secretar especies reactivas de oxigeno (ROS), siendo entonces responsables de la lesion inflamatoria. Pacientes y Metodos. Diez mujeres voluntarias estudiantes de postgrado y 10 pacientes femeninas con AR fueron incluidas. El GAG fue aislado y purificado de acuerdo a los metodos de Merhraban y Volpi. Se obtuvieron celulas mononucleares de 15 mL de sangre periferica, los monocitos fueron identificados por la coloracion de rojo neutral y fagocitosis y purificados por adherencia al plastico. La quimoluminicencia (CL) fue medida en un Bioluminometro LKB-1250 a 37°C. Los recipientes conteniendo monocitos en una cantidad de 5 x 105 de los donadores sanos se resuspendieron en una solucion de Hank sin rojo fenol a 37°C y un pH de 7.4. Diferentes concentraciones de GAG de voluntarios normales (5, 40, 80 y 160 μg/mL) o pacientes con AR (5 y 80 μg/mL) fueron resuspendidos en solucion de Hank en un volumen estandar de 100 μL. Para obtener la emision de CL, fueron adicionados 100 μL de una solucion que contenia 4 mg/mL de zymosan opsonizado y la fotoemision fue medida cada 10 minutos durante 60 minutos. Resultados. Los patrones electroforeticos de GAG obtenidos de voluntarios normales y pacientes con AR fueron comparables: en ambos casos fueron identificados condroitin 4 sulfato y condroitin 6 sulfato. No se emitieron signos de quimoluminicencia por los monocitos en presencia de luminal y GAG, sugiriendo que los GAG no son capaces de generar una explosion respiratoria en esas celulas ni via la entrada de Ca++ por protein-quinasa C ni via los receptores Fc. La emision de Cl por zymosan de monocitos perifericos fue mayor en presencia de GAG en pacientes con AR, que en presencia de GAG de voluntarios normales o sin GAG (aumento de 36%). Sin embargo, la diferencia no fue estadisticamente significativa. Conclusion. El GAG serico de pacientes no parece tener participacion en la fisiopatologia de la AR a traves de la secrecion de ROS por los monocitos.