R. Haas

Determination of different cytomegalovirus immunoglobulins (IgG, IgA, IgM) by immunofluorescence

Cytomegalovirus (CMV) immunoglobulins were determined by immunofluorescence. CMV IgM-antibodies usually reach relatively high titers soon after infection and can be detected in the blood of patients 2–8 months post infection. This confirms the experience that demonstration of CMV-IgM-antibodies is a suitable indicator of recent infection. CMV-IgM-antibodies were found in cases of clinical infectious mononucleosis. The development of CMV antibodies types IgM and IgA was followed up in some patients over a period of several months. IgA-antibodies do not react with complement and therefore cannot be detected by complement-fixation-test (CFT). The immunofluorescence techniques proved as a useful means for the detection of CMV-IgA-antibodies. Immunofluorescence techniques are more suitable for CMV-antibody determinations than CFT.

Erfahrungen mit der fluorescenzserologischen Bestimmung von Antikörpern gegen Cytomegalie-Virus

SummaryA method for the determination of antibodies to Cytomegalovirus by the indirect immunofluorescence technique has been developed which makes it possible to obtain in a simple manner a large number of uniform, virus infected coverslip preparations and to use them for the determination of antibodies. The experimental procedure is not more complicated than that of Complement Fixation Text (CFT).With this method 300 sera of healthy and Cytomegalovirus infected persons were investigated for antibodies to Cytomegalovirus. The titer was determined by measuring only nuclear fluorescence. Persons who showed signs of an acute Cytomegalovirus infection had significantly higher antibody titers than healthy control persons. The antibody titers determined by means of the indirect immunofluorescence technique were clearly correlated with antibody titers obtained with CFT. Antibody determination by indirect immunofluorescence proved to be significantly more sensitive than that by CFT.Differences in the immunofluorescence of nuclear and cytoplasmatic inclusions indicate that at least two antibodies of different specificity exist.ZusammenfassungEs wurde ein Verfahren zur indirekten fluorescenzserologischen Bestimmung von Cytomegalie-Antikörpern entwickelt, das es erlaubt, auf einfache Weise möglichst viele und einheitliche, mit Cytomegalievirus infizierte Deckglaskulturen zu gewinnen und für die Titerbestimmung von Cytomegalie-Antikörpern zu benutzen. Der experimentelle Aufwand dieser Methode ist nicht größer als der der KBR.Mit dieser Methode wurden 300 Seren gesunder und kranker Personen auf Cytomegalie-Antikörper untersucht. Der Titerbestimmung wurde dabei die Kernfluorescenz zugrunde gelegt. Personen, welche Zeichen einer akuten Cytomegalie-Infektion aufwiesen, besaßen significant höhere Antikörpertiter als gesunde Vergleichspersonen. Die mit der indirekten Immunfluorescenz ermittelten Antikörpertiter waren deutlich mit den durch die KBR bestimmten Titern korreliert. Die indirekte fluorescenzserologische Methode zur Bestimmung von Cytomegalie-Antikörpern erwies sich in unseren Händen als wesentlich empfindlicher als die KBR.Unterschiede in der Immunfluorescenz von Kern- und Cytoplasmaeinschlüssen sprechen dafür, daß Antikörper unterschiedlicher Spezifität erfaßt werden können.

Experimentelle Infektionen von Cercopithecus aethiops mit dem Erreger des Frankfurt-Marburg-Syndroms (FMS)

SummaryBlood of an African green monkey, experimentally infected with the causative agent of the so called Frankfurt Marburg Syndrome (FMS) was collected 1 day prior to death and the titer of infectious virus determined by subcutaneous inoculation in African green monkeys. All inoculated monkeys died, including those, which received the blood sample diluted 10−10. The longest observed time between inoculation and death of the animals was 25 days.By electronmicroscopy evidence for the presence of virus particles in the liver of the infected African green monkeys was demonstrated. In liver, spleen and lymph nodes virus-specific antigen was shown by immuno fluorescence. The possible meaning of this finding for the diagnosis of spontaneous infections of monkeys with the causative agent of the FMS is discussed.ZusammenfassungEinem experimentell mit dem Erreger des sog. Frankfurt-Marburg-Syndroms (FMS) infizierten Cercopithecus aethiops wurde 1 Tag vor seinem Tod Blut entnommen und dieses Blut durch subcutane Verimpfung in weitere Cercopithecusaffen auf seinen Gehalt an infektiösen Viren titriert. Alle inoculierten Affen, einschl. jener, die eine 10−10-Verdünnung der untersuchten Blutprobe erhielten, starben. Die längste beobachtete Zeit zwischen Inoculation des virushaltigen Materials und dem Tod der Tiere betrug 25 Tage.In der Leber dieser experimentell infizierten Cercopithecusaffen wurden elektronenoptisch Viruspartikel nachgewiesen. In Leber, Milz und Lymphknoten ließ sich fluorescenzserologisch virusspezifisches Antigen nachweisen. Die mögliche Bedeutung dieses Befundes zur Diagnostik einer spontanen Infektion von Affen mit dem Erreger des Frankfurt-Marburg-Syndroms wird diskutiert.

Die Wirkung von 5-Jod-2′-desoxyuridin auf die Vermehrung von SV-40 in Gewebekulturen

5-Jod-2′-desoxyuridin (IUDR) hemmt in Abhängigkeit von der verwendeten Konzentration die Bildung von infektiösen SV-40 Viruspartikeln in Nierengewebekulturen von Cercopithecus aethiops. Während der Virusadsorption und -penetration bleibt IUDR ohne Einfluß auf die Virusvermehrung, dagegen führt die Zugabe von IUDR 1 Stunde oder 24 Stunden nach der Infektion zu einer Hemmung der Synthese von infektiösem Virus; eine spätere Zugabe dieser Verbindung verhinderte einen weiteren Anstieg der extracellulären Viruskonzentration. Gewebekulturen, die in Gegenwart von IUDR ausgewachsen waren, führten nach Infektion mit SV-40 zur Bildung gleicher Viruskonzentrationen wie Kulturen, die nicht in Gegenwart von IUDR ausgewachsen waren. Die durch IUDR gehemmte Bildung infektiöser Partikel läßt sich regelmäßig — bis zu 8 Tagen nach Infektion — durch die Zugabe von Thymidin deblockieren. Die möglichen Wirkungsmechanismen von IUDR werden diskutiert. 5-iodo-2′-deoxyuridine (IUDR) inhibits the formation of infectious SV-40 particles in kidney tissue cultures of Cercopithecus aethiops. This effect is dependent on the applied IUDR-concentration. The presence of IUDR during the virus adsorption period does not interfere with virus multiplication, but the addition of this compound 1 hour or 24 hours after infection inhibits the formation of infectious virus. If IUDR is added even later during the virus multiplication the further increase of the extra- and intracellular virus concentration is inhibited. Tissue cultures grown in the presence of IUDR support the virus synthesis in the same way as cultures grown without this compound. The arrested formation of infectious virus particles can be reactivated — up to at least 8 days after infection — by the addition of thymidine. The possible mechanisms of action of IUDE are discussed.

Die Bildung inkompletter SV-40-Viren in Gegenwart von 5-Jod-2′-desoxyuridin

5-Jod-2′-desoxyuridin (IUDR) hemmt in Abhängigkeit von der verwendeten Konzentration die Synthese von infektiösen SV-40-Viren in Nierengewebekulturen von Cercopithecus aethiops. Trotz dieser Hemmung bilden die infizierten Zellen virusspezifisches Antigen, das mit Hilfe fluoreszein-markierter Antikörper und unter Verwendung von Zellextrakten als Antigen durch die Komplementbindungsreaktion nachgewiesen werden kann. Dieses virusspezifische Antigen in Zellen, in denen die Bildung infektiöser Partikel blockiert ist, liegt nach elektronenmikroskopischen Befunden nicht in strukturierter Form vor. Für eine Verwendung dieses Antigens bei einer später anlaufenden Synthese infektiöser Viruspartikel als Folge einer Aufhebung der IUDR-Hemmung durch Thymidinzugabe ergibt sich kein Anhalt. 5-iodo-2 -deoxyuridine (IUDR) inhibits the formation of infectious SV-40 particles in kidney tissue cultures of Cercopithecus aethiops. This effect is dependant on the applied IUDR-concentration. In spite of this inhibition produce the infected cells virus-specific antigen, which can be demonstrated with fluorescein-conjugated antibodies, and applying cell extracts as antigens by the complement fixation test. This viral antigen present in cells with arrested formation of infectious viruses is not synthesized in structured particles. There is no indication for a utilization of this viral antigen during the formation of infectious virus particles resulting from the abolition of the IUDR-inhibition after adding thymidine.

Untersuchungen ber den Nucleinsurestoffwechsel von Affennierengewebe-Kulturzellen nach Infektion mit SV 40: II. Einflu\ der Infektion auf den DNS-Stoffwechsel der Zelle

Nierengewebekulturen (Cerc. aeth.) zeigen 72 bis 120 Stunden nach Infektion mit SV 40 einen gesteigerten Einbau von14C-Thymidin im Vergleich zu nicht infizierten Kontrollkulturen. Bei chromatographischer Untersuchung der aus infizierten Kulturen extrahierbaren DNS unter Verwendung der MAK-Säule wiesen nur etwa 10% dieser DNS die Charakteristika von Virus-DNS auf, die übrige DNS verhält sich in dieser Hinsicht wie Zell-DNS. Die Frage, wieweit die Infektion mit SV 40 die Synthese von Zell-DNS in infizierten Zellen induziert, wird diskutiert. Die Einbaurate von14C-Uridin in die RNS zeigte zwischen infizierten und nicht infizierten Kulturen keine wesentlichen Unterschiede. After infection of primary cultures of green monkey (Cerc. aeth.) kidney cells with SV 40 the incorporation of14C-thymidine is increased in comparison to uninfected cultures. The nature of DNA synthesized after infection was analysed by chromatography on MAK-columns. About 10% of the total DNA extracted from infected cultures show the chromatographic characteristics of viral DNA, most of the extracted DNA behave like cell DNA in this respect. The problem whether the infection of monkey kidney cell cultures induces the synthesis of cell DNA is discussed. The incorporation of14C-Uridin into RNA during SV 40 development was not significantly different from control cultures.

Untersuchungen zum Mechanismus der Formaldehydinaktivierung von Poliomyelitisviren

Es wurden Untersuchungen über die Formaldehydinaktivierung von Poliomyelitisvirus Typ I (Mahoney) und ihre Beeinflussung durch chemische (Aminosäuren) und physikalische (Dialyse) Paktoren durchgeführt. Es ergab sich, daß bei der Störung der Formaldehydinaktivierung durch Aminosäuren die Abbindung des freien Formaldehyds eine wesentliche Ursache für die Verlangsamung der Inaktivierungsgeschwindigkeit ist. Der bei formaldehydbehandelten Poliomyelitisviren zu beobachtende Verzögerungseffekt in bezug auf die Infektion von Gewebekulturzellen und das Auftreten cytopathogener Effekte konnte durch Zusatz von Histidin und durch Dialyse bei 25° C vollkommen rückgängig gemacht werden. Die mögliche Bedeutung für die Unschädlichkeitsprüfung der Poliomyelitisvaccine wird diskutiert. Nach Anwendung formaldehyd-„desorbierender“ Verfahren kann es in begrenztem Ausmaß zu einer Reaktivierung des Poliomyelitisvirus kommen, woraus hervorgeht, daß die Reaktion zwischen Poliomyelitisvirus und Formaldehyd über partiell reversible Stufen läuft.

Untersuchungen über den Nucleinsäurestoffwechsel von Affennierengewebe-Kulturzellen nach Infektion mit SV-40

Merengewebekulturen (Cerc, aeth.) wurden nach Infektion mit SV-40 von der 72. bis 74. Stunde p.i. mit 2-14C-Thymidin markiert. 74, 98 und 122 Stunden p.i. wurde die DNS aus den Kulturen extrahiert und mit Hilfe der Bandenzentrifugation untersucht. Veränderungen der Molekülgroße der zu diesen Zeiten extrahierten DNS waren nicht feststellbar. Röntgenbestrahlte Nierengewebekulturen bildeten nach der Infektion mit SV-40 im gleichen Ausmaß Virus wie nicht bestrahlte Zellkulturen. Auch in röntgenbestrahlten Gewebekulturen wurde neben Virus-DNS eine DNS zellulären Typs gebildet. SV-40 infected monkey kidney tissue cultures (Cerc, aeth.) were labeled with 2-14C-thymidine from the 72nd to the 74th hour after infection. 74, 98 and 122 hours after infection all DNA was extracted from the cultures and investigated by zone centrifugation. No changes in the molecular size of the DNA extracted at the different times were detectable. X-irradiated monkey kidney tissue cultures synthesized as much SV-40 virus as non-irradiated cultures. In X-irradiated tissue cultures as well as in non-irradiated cultures the synthesis of a DNA of the cellular type was stimulated in addition to the synthesis of viral DNA.

Über die Verwendung von Aluminiumhydroxyd zur Reinigung und Differenzierung von Enteroviren

ZusammenfassungEs werden Befunde über die Adsorption und Elution von Poliovirus Typ 1, Stamm Mahoney, unter Verwendung von Aluminiumhydroxyd Cγ mitgeteilt. Unter geeigneten Bedingungen gelingt es, das Virus aus Gewebekulturflüsigkeiten zu über 99% zu adsorbieren, während ca. 95% des stickstoffhaltigen Materials nicht adsorbiert werden und mit dem Überstand dekantiert werden können. Die Elution des Virus gelingt praktisch quantitativ, wenn bestimmte Anionen wie Phosphate in genügender Konzentration vorhanden sind und die Konzentration des Adsorbens relativ zur Viruskonzentration nicht zu hoch gewählt wird. Magnesiumionen können die quantitativen Verhältnisse erheblich verschieben; sie hemmen die Elution des Poliovirus durch Phosphatlösung. Umgekehrt konnte mit dem Metallkomplexbildner ÄDTA auch ohne Phosphationen das Virus eluiert werden.

Untersuchungen zur thermischen Resistenz von Polioviren

Die thermische Inaktivierung von Poliomyelitisviren Typ I (Stamm Mahoney), die in Gewebekulturen trypsinaufgeschlossener Affennieren vermehrt worden waren, wurde im Temperaturbereich um +45°C untersucht. Es ergab sich, daß in den Virussuspensionen enthaltene niedermolekulare Substanzen die thermische Inaktivierung stark beschleunigen können. Diese Substanzen konnten durch Dialysen entfernt werden, wodurch die thermische Resistenz erheblich verstärkt wurde. Es gelang außerdem durch Komplexbildner wie EDTA und, wenn auch in schwächerem Maß, KCN, die beschleunigende Wirkung auf die thermische Inaktivierung aufzuhalten. Der Zusatz von Aminosäuren hatte einen analogen Effekt. Da diese Befunde auf die mögliche Beteiligung von Metallionen hinwiesen, wurde eine Reihe von Salzen untersucht. Dabei wurde gefunden, daß Salze des dreiwertigen Chroms eine stark beschleunigende Wirkung auf die thermische Inaktivierung besitzen. Studies on the thermal inactivation of poliomyelitis virus type 1 (Mahoney), prepared in monolayer tissue cultures of trypsinized monkey kidney cells, were made at a temperature of 45° C. Evidence was furnished of the presence in the virus fluid of substances of low molecular weight, which increase the rate of thermal inactivation. These substances could be eliminated by dialysis, whereby thermal resistance became greatly increased. Inhibition of thermal inactivation was possible by addition of chelating agents as EDTA and partly by KCN. Addition of aminoacids had a similar effect. The data pointed to the possible role of metal ions. Therefore we tested the effect of some metal salts. Cr+3 — salts increased the rate of thermal inactivation.