Raquel E. Ocazionez

Temporal distribution of dengue virus serotypes in Colombian endemic area and dengue incidence: re-introduction of dengue-3 associated to mild febrile illness and primary infection

We have investigated the temporal distribution of dengue (DEN) virus serotypes in the department (state) of Santander, Colombia, in relation to dengue incidence, infection pattern, and severity of disease. Viral isolation was attended on a total of 1452 acute serum samples collected each week from 1998 to 2004. The infection pattern was evaluated in 596 laboratory-positive dengue cases using an IgG ELISA, and PRNT test. The dengue incidence was documented by the local health authority. Predominance of DEN-1 in 1998 and DEN-3 re-introduction and predominance in 2001-2003 coincided with outbreaks. Predominance of DEN-2 in 2000-2001 coincided with more dengue hemorrhagic fever (DHF). DEN-4 was isolated in 2000-2001 and 2004 but was not predominant. There was an annual increase of primary dengue infections (from 13.7 to 81.4%) that correlated with frequency of DEN-3 (r = 0.83; P = 0.038). From the total number of primary dengue infections DEN-3 (81.3%) was the most frequent serotype. DHF was more frequent in DEN-2 infected patients than in DEN-3 infected patients: 27.5 vs 10.9% (P < 0.05). DEN-3 viruses belonged to subtype C (restriction site-specific-polymerase chain reaction) like viruses isolated in Sri-Lanka and other countries in the Americas. Our findings show the importance of continuous virological surveillance to identify the risk factors of dengue epidemics and severity.

Virucidal activity of Colombian Lippia essential oils on dengue virus replication in vitro.

The inhibitory effect of Lippia alba and Lippia citriodora essential oils on dengue virus serotypes replication in vitro was investigated. The cytotoxicity (CC50) was evaluated by the MTT assay and the mode of viral inhibitory effect was investigated with a plaque reduction assay. The virus was treated with the essential oil for 2 h at 37 masculineC before cell adsorption and experiments were conducted to evaluate inhibition of untreated-virus replication in the presence of oil. Antiviral activity was defined as the concentration of essential oil that caused 50% reduction of the virus plaque number (IC50). L. alba oil resulted in less cytotoxicity than L. citriodora oil (CC50: 139.5 vs. 57.6 microg/mL). Virus plaque reduction for all four dengue serotypes was observed by treatment of the virus before adsorption on cell. The IC50 values for L. alba oil were between 0.4-32.6 microg/mL and between 1.9-33.7 microg/mL for L. citriodora oil. No viral inhibitory effect was observed by addition of the essential oil after virus adsorption. The inhibitory effect of the essential oil seems to cause direct virus inactivation before adsorption on host cell.

Serotipo, Patrón de Infección y Dengue Hemorrágico en Área Endémica Colombiana

OBJECTIVE Describing the relationship between viral serotypes, infection pattern and dengue hemorrhagic fever. METHODS 1,545 febrile patients were studied from 1998-2004 in the Santander department of Colombia. Dengue infection was confirmed by IgM ELISA and the virus was isolated in C6/36 cells. Infection pattern was established by detecting IgG antibodies in acute serum. Neutralising antibody titres were investigated in dengue cases occurring during years when less (1998) and more (2001) dengue hemorrhagic cases were reported by using PRNT. RESULTS DEN-1 predominance in 1998 and the re-introduction of DEN-3 in 2001 coincided with an epidemic. DEN-2 infection caused more hemorrhagic cases than DEN-3 infection (24,5 % cf 11,2 %; p<0.05). DEN-2 was more associated with secondary infection than DEN-3 (56,8 % cf 15,7 %; p<0.001). An annual decrease of DHF was correlated with decreased DEN-2 dominance (r=0.95; p= 0.01), and secondary infection (r=0.9; p=0.03) and increased DEN-3 predominance (r=-0.91; p=0.03). There were no differences in neutralising antibody titres amongst analysed cases. DEN-1 neutralising antibodies presented the highest titres. CONCLUSIONS Change in relative dengue virus serotype abundance was associated with changed infection pattern and DHF frequency. Continuing virological surveillance should become a priority for preventing dengue hemorrhagic fever in endemic areas.

Vigilancia del dengue basada en el laboratorio: diferencias en el número de casos y virus aislados según la recolección del suero y la prueba serológica.

Introducción: El control del dengue depende de los datos de la vigilancia basada en el laboratorio. El objetivo de este estudio fue establecer las diferencias en número de casos (IgM positiva) y serotipos del virus según la estrategia de vigilancia. Materiales y métodos: Se compararon los resultados de dos estrategias de vigilancia. Primera (SIVIGILA local): de 337 casos con sospecha clínica de dengue se colectó un único suero (agudo o convaleciente) que se almacenó a 4oC. Se utilizó el estuche UMELISA DENGUE (IPK, Cuba) para detectar anticuerpos IgM y se hicieron intentos de aislamiento del virus en células C6/36. Segunda: de 318 casos sospechosos se colectaron sueros pareados que se almacenaron a -70oC, se usó una prueba local de MAC-ELISA y se intentó el aislamiento del virus como en la primera. Algunos sueros procesados por el MAC-ELISA se analizaron también por el UMELISA y los estuches Dengue IgM-capture ELISA (PANBIO) e IgM*ELISA anti-dengue (IPK, Cuba). Resultados: Se encontraron más casos IgM+ con la primera que con la segunda estrategia tanto con sueros agudos como convalecientes. Esto es, 61.1 vs 22% (p<0.001) y 86.8 vs 49.3% (p<0.001), respectivamente. Los resultados del MAC-ELISA concordaron 85% (k=0.29) con los del UMELISA, pero 90.4% (k=0.84 ) y 100% (k=1) con los estuches de PAMBIO e IgM*ELISA, respectivamente. Se encontraron diferencias significativas en la frecuencia del dengue en casos de la segunda estrategia, cuando el resultado de la serología con suero agudo o con pareado se comparó: 70 (22%) vs 155 (48.7%) (p<0.001). El aislamiento viral fue más exitoso de los sueros almacenados a -70oC que a 4oC: 17.8% vs. 4.7% (p<0.001). Se identificaron los 4 serotipos del virus. Se discuten la especificidad del UMELISA DENGUE y las consecuencias en el control del dengue en relación a la estrategia de vigilancia. Conclusiones: Se requiere evaluar la especificidad del estuche UMELISA considerando la alta frecuencia del dengue en casos con sospecha. El análisis de sueros pareados en la vigilancia del dengue es necesario para obtener información confiable.

Anticuerpos Neutralizantes contra el Virus de la Fiebre Amarilla 17 D en Colombianos Vacunados y no Vacunados con Inmunidad a Dengue

Objetivo Determinar la frecuencia de titulo protector de anticuerpos neutralizantes contra el virus de la fiebre amarilla (AN-VFA a titulo >1:10) en colombianos vacunados con la cepa 17 D y conocer la magnitud de neutralizacion del VFA por anticuerpos contra dengue. Metodologia Se colecto suero de 100 individuos con vacuna documentada por carne y de 116 residentes en municipios de Norte de Santander afectados por el brote en 2002-2003, quienes informaron haber sido vacunados. Se incluyeron sueros de individuos no vacunados con (n=61) y sin (n=16) anticuerpos contra dengue. Todos los sueros se analizaron por la prueba de neutralizacion para VFA por 75 % de reduccion de placa. Resultados AN-VFA a titulo >1:10 se encontraron en 90 % de vacunados con carne y sin variacion aparente en relacion con edad. Al contrario, hubo correlacion entre disminucion de la frecuencia de titulo protector de anticuerpos e incremento del tiempo de inmunizacion (r=0,95; p=0,04). En residentes de Norte de Santander, AN-VFA a titulo >1:10 se encontraron en 92,6 % adultos y 69 % ninos. El VFA fue neutralizado (52 -100 %) por sueros de inmunes a dengue mas eficientemente que por sueros de no inmunes (p<0.001). Conclusiones Vacunados con el virus 17 D podrian no estar protegidos contra fiebre amarilla: hasta 31 % ninos y 10 % adultos. Anticuerpos contra dengue inhibieron el VFA y su significancia en terminos de proteccion contra fiebre amarilla debera ser investigada.Objetivo Determinar la seroprevalencia de anticuerpos contra Leptospira sp. y los serovares dominantes, en poblacion urbana humana y canina de tres municipios del departamento del Tolima, Colombia. Materiales y Metodos Se realizo un estudio epidemiologico trasversal con seleccion de sujetos por conveniencia en 62 barrios. Se obtuvieron muestras de 850 personas.y 850 caninos durante los meses de junio, julio y agosto de 2007, las cuales fueron procesadas utilizando la prueba de microaglutinacion (MAT). En la prueba se incluyeron 5 serovares: Hardjo, Pomona, Grippotyphosa, Canicola, Icterohaemorrhagiae y Bratislava. La prueba se interpreto como positiva por la presencia de una aglutinacion >50 % de las leptospiras con uno o mas serovares, en una dilucion del suero >100 para las dos especies. Resultados Se encontro evidencia de infeccion en el 6 % de la poblacion humana y en el 21,4 % de los caninos, con al menos uno de los serovares. La mayor reactividad fue para los serovares Pomona y Grippotyphosa para humanos y caninos. Se presentaron coaglutinaciones en el 13,7 % de los sueros humanos y en el 4,4 % de los caninos. Fue evidente la disminucion de la frecuencia de aglutinacion de los serovares Canicola e Icterohaemorrhagiae en los perros. Conclusiones Se observa un cambio en el patron de presentacion de la leptospirosis en poblaciones urbanas, siendo necesario fortalecer la vigilancia epidemiologica activa y pasiva, la implementacion de pruebas rutinarias de diagnostico y medidas de prevencion especifica en los reservorios animales.

Yellow fever virus 17D neutralising antibodies in vaccinated Colombian people and unvaccinated ones having immunity against dengue

Objetivo Determinar la frecuencia de titulo protector de anticuerpos neutralizantes contra el virus de la fiebre amarilla (AN-VFA a titulo >1:10) en colombianos vacunados con la cepa 17 D y conocer la magnitud de neutralizacion del VFA por anticuerpos contra dengue. Metodologia Se colecto suero de 100 individuos con vacuna documentada por carne y de 116 residentes en municipios de Norte de Santander afectados por el brote en 2002-2003, quienes informaron haber sido vacunados. Se incluyeron sueros de individuos no vacunados con (n=61) y sin (n=16) anticuerpos contra dengue. Todos los sueros se analizaron por la prueba de neutralizacion para VFA por 75 % de reduccion de placa. Resultados AN-VFA a titulo >1:10 se encontraron en 90 % de vacunados con carne y sin variacion aparente en relacion con edad. Al contrario, hubo correlacion entre disminucion de la frecuencia de titulo protector de anticuerpos e incremento del tiempo de inmunizacion (r=0,95; p=0,04). En residentes de Norte de Santander, AN-VFA a titulo >1:10 se encontraron en 92,6 % adultos y 69 % ninos. El VFA fue neutralizado (52 -100 %) por sueros de inmunes a dengue mas eficientemente que por sueros de no inmunes (p<0.001). Conclusiones Vacunados con el virus 17 D podrian no estar protegidos contra fiebre amarilla: hasta 31 % ninos y 10 % adultos. Anticuerpos contra dengue inhibieron el VFA y su significancia en terminos de proteccion contra fiebre amarilla debera ser investigada.Objetivo Determinar la seroprevalencia de anticuerpos contra Leptospira sp. y los serovares dominantes, en poblacion urbana humana y canina de tres municipios del departamento del Tolima, Colombia. Materiales y Metodos Se realizo un estudio epidemiologico trasversal con seleccion de sujetos por conveniencia en 62 barrios. Se obtuvieron muestras de 850 personas.y 850 caninos durante los meses de junio, julio y agosto de 2007, las cuales fueron procesadas utilizando la prueba de microaglutinacion (MAT). En la prueba se incluyeron 5 serovares: Hardjo, Pomona, Grippotyphosa, Canicola, Icterohaemorrhagiae y Bratislava. La prueba se interpreto como positiva por la presencia de una aglutinacion >50 % de las leptospiras con uno o mas serovares, en una dilucion del suero >100 para las dos especies. Resultados Se encontro evidencia de infeccion en el 6 % de la poblacion humana y en el 21,4 % de los caninos, con al menos uno de los serovares. La mayor reactividad fue para los serovares Pomona y Grippotyphosa para humanos y caninos. Se presentaron coaglutinaciones en el 13,7 % de los sueros humanos y en el 4,4 % de los caninos. Fue evidente la disminucion de la frecuencia de aglutinacion de los serovares Canicola e Icterohaemorrhagiae en los perros. Conclusiones Se observa un cambio en el patron de presentacion de la leptospirosis en poblaciones urbanas, siendo necesario fortalecer la vigilancia epidemiologica activa y pasiva, la implementacion de pruebas rutinarias de diagnostico y medidas de prevencion especifica en los reservorios animales.