S. A. Slack

The latex agglutination test as a rapid serological assay forCorynebacterium sepedonicum

The latex agglutination test was evaluated for detection of the potato bacterial ring rot pathogen,Corynebacterium sepedonicum. The bacterium was detected in infected potato stems and tubers tested and in inoculated eggplant stems. Test reliability was confirmed using blind tests. A minimum of 106 bacterial cells/ml was requisite for observable agglutination. Nonspecific reactions were not observed from healthy extracts of plant tissues. Nonspecific reactions with other bacteria maintained in pure culture were eliminated by addition of bovine serum albumin to sensitized latex preparations.ResumenLa aglutinación de látex fue evaluada como prueba para la detección deCorynebacterium sepedonicum, agente etiológico de la podredumbre anular en la papa. Tallos y tubérculos de papas infectadas, así como tallos de berengena previamente inoculados se mostaron positivas a la prueba. Las muestras fueron previamente codificadas, para que el individuo que realizó la prueba desconociera su procedencia (prueba a ciegas). Para observar la aglutinación de látex fue necesario tener una cantidad mínima de 106 bacterias/ml. No se observaron reacciones inespecíficas contra extractos de tejidos vegetales sanos. Las reacciones inespecíficas contra cultivos puros, de otras bacterias fueron eliminadas al agregar albumina bovina a la solución amortiguadora con el látex sensibilizado.

Sample size determination in zero tolerance circumstances and the implications of stepwise sampling: Bacterial ring rot as a special case

A formula suitable for determining sample size in zero tolerance situations is developed. It is PEA = e-nP; where PEA = probability of erroneous acceptance of a field, e = base of natural logarithm, n = sample size, and p = probability that a plant is diseased. For a trace amount of disease,i.e., p = 0.001, a PEA of 0.01 is achieved with a sample size of 4605. Such a sample size might be achieved by sampling in a stepwise fashion whereby multiple samples are taken and sampling ceases when disease is found. In such schemes, if the total sample size of all samples is 4605, then the PEA will still be 0.01 when p = 0.001. General formulas for stepwise sampling and formulas for special circumstances such as stratified (non-random) sampling schemes, sampling small fields, and sampling in the presence of reduced disease expression can also be obtained. A case study is used to exemplify the use of these formulas in the development of a zero tolerance sampling strategy.CompendioSe desarrolla una fórmula apropiada para determinar la magnitud de la muestra en situaciones de tolerancia cero. La fórmula es: PEA=e-nP, donde PEA=probabilidad de significado erroneo en un campo, e=base de logaritmo natural, n=magnitud de la muestra y p=probabilidad de que una planta se enferme. Para una proporción muy pequeña de enfermedad, por ejemplo, p=0.001, se consigue PEA de 0.01 con una muestra de 4605 de magnitud. Dicha magnitud de muestra se puede alcanzar muestreando por etapas, para lo que se toman muestras múltiples y el muestreado se suspende en el momento que se encuentra la enfermedad. En tales esquemas, si la magnitud total de muestra de todas las muestras es 4605, entonces PEA será todavía de 0.01 cuando p=0.001. Se pueden obtener también fórmulas generales para el muestreo por etapas y fórmulas para circunstancias especiales tales como muestreo estratificado (no randomizado), muestreo de campos pequeños y muestreo en presencia de expresión reducida de enfermedad. Se emplea un caso en estudio como ejemplo del uso de estas fórmulas en el desarrollo de una estrategia de muestreo de tolerancia cero.

Biology and ecology ofCorynebacterium sepedonicum

ConclusionRecent studies on the ecology and biology ofC. sepedonicurn have altered our perception of BRR. As additional research contributions broaden our knowledge base, this perception will continue to change. Disease eradication is not easy under ideal circumstances and an incomplete description of the organism and the ecological niche it occupies only makes the task more difficult. It is imperative that we continue to explore the ecology and biology of BRR and to share the fruits of those explorations. Realistic cost-benefit assessments for BRR eradication will be no better than the information utilized in making those assessments.

Effect of inoculum dose and preparation, strain variation, and plant growth conditions on the eggplant assay for bacterial ring rot

Quantitative differences among strains ofCorynebacterium sepedonicum (Spieck. and Kotth.) Skapt. and Burkh. (=Clavibacter michiganense subsp.sepedonicum) were distinguished in eggplant (Solanum melongena L. ‘Black Beauty’) bioassays with a simple leaf axil inoculation technique. Latent period of infection (time from inoculation to first appearance of symptoms) varied inversely with inoculum dose. Latent period of infection varied significantly among strains ofC. sepedonicum. Symptoms developed more rapidly in plants grown under controlled conditions in a growth chamber than those grown in a greenhouse. Plants treated with inoculum prepared from broth cultures exhibited symptoms more rapidly than those treated with inoculum grown on agar.ResumenSe encontraron diferencias cuantitativas entre las variantes de Corynebacterium sepedonicum (Spieck y Kotth) Skapt. y Burkh. (=clavibacter michiganense) subsp.sepedonicum, al efectuar pruebas biológicas utilizando la prueba simple de inoculación de la bacteria en la axila de las hojas de plantas de berenjena (Solanum melongena L. ‘Black Beauty’). El período latente de infección (tiempo transcurrido desde la inoculación hasta la aparición de los primeros síntomas) varió en relación inversa con la dosis del inóculo. El período latente de infección varió significativamente entres las variantes deC. sepedonicum. Los síntomas se desarrollaron más rápidamente en las plantas creciendo bajo condiciones controladas en una cámara de crecimiento que en aquellas que crecían en un invernadero.Las plantas tratadas con inóculo obtenido en caldo de cultivo mostraron síntomas más rápidamente que aquellas tratadas con inóculo producido sobre agar.

Studies on the sensitivity of a latex agglutination test for the serological detection of potato virus S and potato virus X in Wisconsin.

A latex agglutination test using capillary pipettes as reaction vessels was a sensitive serodiagnostic procedure for detecting potato virus S (PVS) and potato virus X (PVX). In purified preparations, PVS could be detected at 0.5 μg/ml and PVX could be detected at 0.1 μg/ml. PVS and PVX were detected in composite samples simulating one infected plant in 10 or fewer plants at all stages of growth. Detection, however, was most effective when leaflets were collected from the middle of the haulm at midseason (prebloom to bloom). Then, depending on the cultivar, PVS could be detected in composite samples of leaflets from 10–20 plants and PVX could be detected in composite samples of leaflets from 20–25 plants. Tuber sprouts were as suitable as leaflets for virus indexing.ResumenUna prueba de aglutinación de Latex en tubos capilares fue un procedimiento sensitivo para serodiagnostico de los virus S (PVS) y X (PVX) de la papa. En preparaciones purificadas, PVS pudo ser detectado a una concentration de 0.5 μg/ml y PVX a 0.1 μg/ml. PVS y PVX fueron detectados en muestras compuestas simulando una planta infectada en 10 ó menos plantas en todos los estados de crecimiento. La detección, sin embargo, fue más efectiva cuando los foliolos fueron colectados de la parte media de los tallos a la mitad del desarrollo de las plantas (prefloración a floración). Dependiendo del cultivar PVS pudo ser detectado en muestras compuestas de 10–20 plantas y PVX pudo ser detectado en muestras compuestas de 20–25 plantas. Brotes de tubérculos fueron igualmente apropriados para detección de virus.

Reinfection of potato seed stocks with potato virus S and potato virus X in Wisconsin

Reinfection of potato seed stocks with the potato viruses S (PVS) and X (PVX) varied with cultivar, virus, and grower. Rapid recontamination was observed for the cultivars Norgold Russet and Ontario with PVS and for the cultivars LaChipper, Norchip, and Norgold Russet with PVX. Recontamination was low for the cultivars LaChipper and Monona with PVS and for the cultivars Kennebec, Monona, Norland, and Superior with PVX. Survey results suggest that PVS and/or PVX can be eliminated from cultivars which appear to possess field resistance to infection, but that further evaluation of cultivars which are very susceptible to reinfection will be necessary.ResumenLa reinfección de clones de papas sanas con los virus S (PVS) y X (PVX) varió con el cultivar, el virus y el agricultor. Una recontaminación rápida se observó en los cultivares Norgold Russet y Ontario con PVS y en los cultivares LaChipper, Norchip y Norgold Russet con PVX. La recontaminación fue baja en los cultivares LaChipper y Monona con PVS y en los cultivares Kennebec, Monoma, Norland y Superior con PVX. Los resultados sugieron que PVS y/o PVX pueden ser eliminados de cultivares que parecen tener resistencia de campo a la infección, pero en el caso de aquellos muy susceptibles a la infección es necessaria una evaluación más completa.

Antigenic anomaly in a naturally occurring nonfluidal strain ofCorynebacterium sepedonicum

A nonfluidal strain (SSNF50) ofCorynebacterium sepedonicum (=Clavibacter michiganense subsp.sepedonicum) was isolated from potato (Solanum tuberosum) stems from Idaho. A precipitin band common to other strains was not detected in Ouchterlony double diffusion (ODD) tests of SSNF50. SSNF50 was indistinguishable from fluidal strain SS20 ofC. sepedonicum with respect to latent period in eggplant or potato, reaction in latex agglutination and fluorescent antibody stain, and level of population in infected potato stems. Latent period of infection in potato from nonfluidal strain SSNF201, isolated in the laboratory from a culture of fluidal strain SS20, was longer than that of SS20 or SSNF50 despite similar pathogen population levels. A precipitin band common to ODD tests of SS20 and SSNF50 was not detected in tests of SSNF201. SSNF50 is the first nonfluidal strain ofC. sepedonicum to be isolated from potatoes.CompendioUna variante no fluida (SSNF50) deCorynebacterium sepedonicum (= Clavibacter michiganense subsp.sepedonicum) fue aislada de tallos de papa (Solanum tuberosum) procedente de Idaho. Una banda de precipitin común en otras variantes no fue detectada en SSNF50 mediante pruebas de doble difusión de Ouchterlony (DDO). SSNF50 fue indistinguible de la variante fluída SS20 deC. sepedonicum con respecto al período de latencia en berenjena o papa, reacción en la prueba de aglutinación en látex, tinción fluorescente de anticuerpos, y el nivel de la población en tallos de papa infectados. El período latente de infección en la papa para la variante no fluída SSNF201, aislada en el laboratorio de un cultivo de la variante fluída SS20, fue más prolongado que aquel de SS20 o SSNF50, a pesar de tener niveles similares de población del patógeno. La banda de precipitin, común en las pruebas DDO de SS20 y SSNF50, no fue detectada cuando se probó la variante SSNF201. SSNF50 es la primera variante no fluída deC. sepedonicum que haya sido aislada de papa.

Detection of potato viruses S and X in dormant potato tubers by the latex agglutination test

A simple procedure for detection of potato viruses S and X from dormant tubers by a latex agglutination test was developed. Eyes were pricked with a toothpick after having been covered with 50μ1 of buffer. Approximately 20μ1 of buffer then were drawn into a capillary pipette containing 10μ1 of antibody-sensitized latex and a latex agglutination test was performed.Both viruses were detected in all infected tubers tested. For potato virus S, the mean agglutination value was shown to vary significantly among cultivars. Tests on one eye were sufficient for detection with some cultivars, but tests on three eyes were necessary for detection with other cultivars. Eye location on tubers did not appear to influence test results, but better results were obtained when eyes were tested than when other tuber locations were tested.ResumenFue desarrollado un procedimiento simple para detectar los virus S y X de la papa en tubérculos no brotados mediante la prueba de aglutinación de Latex.Las yemas, después de haber sido cubiertas con 50 ul de buffer fueron hincadas con un monda-dientes. Aproximadamente 20 ul del buffer fueron succionados en una pipeta capilar que contenia 10 ul de latex sensibilizado con anticuerpos y la prueba de aglutinación fue realizada.Ambos virus fueron detectados en todos los tubérculos infectados que fueron chequeados. Con el virus S, el valor medio de aglutinación varió significativamente entre cultivares. Las pruebas en una yema fueron suficientes para la detección con algunos cultivares. La posición de las yemas en los tubérculos pareció no tener influencia en los resultados pero mejores resultados fueron obtenidos de yemas que de otras partes del tubérculo.

Geddes Simpson retires as Journal Editor-in-Chief

Geddes W. Simpson has announced his retirement as Editor-in-Chief of the American Potato Journal after 14 years of service. Dr. Simpson has provided outstanding leadership in his role as Editor-in-Chief since November 1974. Dr. Simpson accepted the role of Editor-in-Chief following a distinguished career as an entomologist at the University of Maine. The Potato Association of America Executive Committee was unanimous in its commendation of Dr. Simpson at the Annual Meeting in July at Fort Collins, Colorado. One member noted that the excellence of Dr. Simpsons efforts has been most noticeable by the absence of complaints about the Amencan Potato Journal. Hugh Murphy, a Past President of The PAA and long-time PAA Secretary, succeeds Dr. Simpson as Editor-in-Chief.