Shi Bao

Cloning of FSHR and expression analysis during the reproductive cycle in female Cynoglossus semilaevis Günther

The complete cDNA sequence of follicle-stimulating hormone receptor( FSHR) gene was cloned by degenerate primer PCR amplification and RACE cDNA amplification for the first time. The length of the cDNA is 3105 bp,and it encodes a protein of about 704 amino acids,which contains the conserved seven transmembrane helix domains( TM helix) ,and it belongs to glycoprotein hormone receptor( GHR) family. Phosphorylation site predictions identified 19 Ser,4 Thr and 5 Tyr potential phosphorylation sites in tongue sole,and only one protein kinase C phosphorylation site( 441T) was predicted. The Clustal X alignment also revealed the presence of specific signature sequences( e. g. 82CCAF,481ERW,594FTD and 667NPFLY) ,which are highly conserved in GpHRs. And comparison with the halibut FSH-R also allowed the identification of 10 imperfect LRRs in the FSHR of Cynoglossus semilaevis. Tissue expression analysis showed that FSHR mRNA is expressed widely in C. semilaevis. Except the high levels in gonads,strong amplification signals were also detected in extragonadal tissues including the spleen,kidney and head kidney. Plasma 17β- Estradiol( E2) seasonal changes are detected by radio immunoassay( RIA) . The result shows that the lowest level appears in April and the highest peak of a year is in October. And we analyzed the relative expression level of FSHR in reproductive cycle of female. There is the highest level in October and the lowest level in January.

膜孕激素受体(mPRα)在半滑舌鳎( Cynoglossus semilaevis )卵母细胞成熟过程中的表达特征

通过实时荧光定量PCR方法(qRT-PCR)检测半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)雌性性成熟不同时期、不同时相卵母细胞中膜孕激素受体(mPRα)的表达，通过qRT-PCR和Western blotting方法检测促性腺激素(HCG)对成熟期半滑舌鳎卵母细胞mPRα表达的影响，同时，采用原位杂交、免疫组化和Western blotting方法研究雌性性成熟半滑舌鳎mPRα mRNA和蛋白在各组织中的表达。对半滑舌鳎性成熟不同时期、不同时相卵母细胞中mPRαmRNA的定量研究结果显示，在成熟时期半滑舌鳎Ⅴ时相卵母细胞的mPRα mRNA表达量最高。HCG对成熟期半滑舌鳎卵母细胞mPRα表达的影响研究结果显示，20 IU/ml HCG比10 IU/ml HCG对成熟时期半滑舌鳎卵母细胞mPRα mRNA和蛋白表达的促进作用更明显，进一步证明mPRα介导孕激素参与了卵母细胞成熟的调控。对mPRα组织表达的定量和定位研究中，Western blotting结果显示，在半滑舌鳎的卵巢、垂体、脑、头肾、肾、肝脏组织中均有mPRα蛋白表达，且在脑、垂体和卵巢中表达量较高，表明mPRα在不同组织中都发挥着一定的作用，且在内分泌相关组织如脑、垂体和卵巢中的作用更明显。原位杂交和免疫组化结果显示，mPRα mRNA和蛋白表达明显定位在卵母细胞膜上，且在其他组织的外周和管腔结构表达。本研究为进一步研究mPRα在膜上的信号转导机制提供了理论基础和形态学依据。

两株有益菌的分离、培养、鉴定及其水质调控效果评价

自河口污泥中分离到两株有益菌，通过形态分析、革兰氏染色、生理生化测定、16S rRNA序列分析和系统发育树构建，其中一株鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，另一株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。建立了两株细菌的适宜生长条件，植物乳杆菌适宜生长pH为6.5、温度为30℃，枯草芽孢杆菌的适宜生长pH为6.0、温度为36℃。在实验室条件下，两株有益菌1:1组合制剂对人工配制的海水中氨氮、亚硝酸盐、磷酸盐的降解率分别达到了73.2%、58.0%和52.4%；池塘养殖环境下，其对养殖水体中氨氮、亚硝酸盐、磷酸盐的降解率分别达到了86.3%、88.9%和68.3%，具有明显的水质净化效果。本研究结果可为建立两株有益菌的规模化发酵生产技术和生产应用奠定基础。

黄条魳(Seriola aureovittata)肌肉营养组成分析与评价

为进一步认识和评价黄条 (Seriola aureovittata)的营养与食用价值，本研究测定了其肌肉中的水分、蛋白质、粗脂肪、灰分、氨基酸、脂肪酸和矿物质等成分，并对其养殖及野生个体的肌肉营养成分组成进行了比较分析。结果显示，黄条 肌肉中蛋白质含量较高，必需氨基酸和鲜味氨基酸含量丰富，完全符合FAO/WHO推荐的理想蛋白质标准，是一种优质蛋白供给源。根据AAS和CS分值，黄条 肌肉的第一限制氨基酸为蛋氨酸，第二限制氨基酸为缬氨酸。黄条 肌肉的脂肪含量高于三文鱼(Salmo salar)、金枪鱼(Thunnus thynnus)、石斑鱼(Epinephelus sp.)等，且肌肉中含有丰富的不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸比值较高，特别是EPA+DHA的含量高，具有较优的口感鲜度和较高的营养价值。另外，黄条 肌肉中含有多种机体新陈代谢所需的矿物质，经常食用可促进人体新陈代谢水平。比较发现，养殖黄条 较野生黄条 具有相对较高的脂肪含量和较低的水分含量，比能值(EP)分别为13.44 kJ/g和8.68 kJ/g，其他营养成分无显著差异，表明养殖与野生黄条 肌肉营养价值相似。综上所述，黄条 肌肉蛋白质和脂肪质量较高，口感鲜美，营养成分丰富，是一种值得大力开发养殖的海产经济鱼类。

mPRα在性成熟雌性牙鲆( Paralichthys olivaceus )不同组织中的定性定量表达特征

通过荧光实时定量PCR方法(qRT-PCR)检测雌性性成熟牙鲆(Paralichthys olivaceus)第Ⅴ时期不同时相的卵母细胞中膜孕激素受体(mPRα)的表达，同时采用原位杂交、免疫组化和Western blotting方法研究性成熟雌性牙鲆mPRα mRNA和蛋白在各组织中的分布和表达。qRT-PCR结果显示，在牙鲆卵巢成熟时期的第Ⅴ时相卵母细胞，mPRα mRNA的表达量最高，表明mPRα介导孕激素参与了牙鲆卵母细胞成熟的调控。组织定量定位结果显示，在牙鲆的卵巢、脑、头肾、肾、肝脏组织中均有mPRα mRNA和蛋白表达存在，且在脑、卵巢中表达量较高，表明mPRα在牙鲆不同组织中都发挥着一定的作用，且在内分泌相关组织如脑和卵巢中的作用更明显。原位杂交和免疫组化结果显示，mPRα mRNA和蛋白表达明显定位在牙鲆卵母细胞膜上，且分布在其他组织的管腔结构。本研究为进一步探究牙鲆mPRα信号转导机制提供了理论基础和形态学依据。

孕酮受体膜组分1基因在性成熟雌性半滑舌鳎( Cynoglossus semilaevis )的组织学定位定量分析

运用Western blotting、免疫组化和原位杂交方法检测性成熟半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)孕酮受体膜组分1 (Progesterone receptor membrane component 1, PGRMC1)蛋白和mRNA在不同组织的分布和表达特征。原位杂交结果发现，PGRMC1 mRNA主要分布在成熟的卵母细胞膜上，在脑组织神经元和分散的垂体细胞中也有表达。利用制备的半滑舌鳎PGRMC1多克隆抗体，对不同组织中的PGRMC1蛋白表达量进行Western blotting检测，发现在半滑舌鳎卵巢、脑、肝脏中PGRMC1蛋白表达量相对较高，在垂体、头肾、肾也有表达，但表达量相对较少。免疫组化结果表明，半滑舌鳎PGRMC1蛋白在成熟的卵母细胞膜上显著表达，进一步证明PGRMC1为卵膜上的受体基因，推测其主要在卵膜上行使相关的生理功能。研究结果为探究PGRMC1在半滑舌鳎卵母细胞成熟过程中的生理功能提供了重要参考。

编码金属标签对牙鲆( Paralichthys olivaceus )苗种标记的效果

为了开发适宜牙鲆(Paralichthys olivaceus)苗种放流的标志技术，利用编码金属标签(CWT)对不同规格牙鲆苗种进行了标记实验，并从标记死亡率、脱标率、适宜标记鱼规格等方面评价了CWT的标记效果。结果显示，CWT标记3种规格的牙鲆苗种后，脱标均发生在标记后的4 d内，其后未再发生脱标现象。小规格苗种[全长为(5.92±0.41) cm]死亡率较高(13%)，中规格苗种[全长(8.92±0.36) cm]死亡率为2%，大规格苗种[全长为(12.06±0.62) cm]死亡率为1%。小规格、中规格和大规格苗种脱标率分别为3.3%、2.4%和0.7%。建立了标记死亡率(M)与苗种全长(TL)、体厚度(BT)的关系模型：M=0.7254 TL2-15.3220 TL+79.4260 (R2=0.9601)；M=1.3627 BT2-15.5610 BT + 44.4330 (R2=0.9645)，为适宜苗种规格选择与标记效果评价提供了依据。今后利用CWT标签进行牙鲆苗种标志放流时，建议选择全长6 cm以上的苗种进行背部肌肉标记，标记对苗种游泳行为和生长无影响，表明CWT是一种适宜在牙鲆大规模标志放流中应用的理想标志方式。

黄条( Seriola aureovittata )形态度量与内部结构特征

为了全面认识黄条 (Seriola aureovittata)生物学特性，利用传统测量方式、框架测度法、几何形态测量法和解剖学方法，观察和测度了其外部形态特征、可量与可数性状及内部结构特征，并模拟构建了黄条 形态性状度量框架图。观察了黄条 不同部位鳞片和耳石形态特征，比较了各形态度量性状的比值关系，发现全长与体长比值、下颌长与上颌长比值、尾柄长与尾柄高比值变异较小，表明这些性状关联密切。利用统计分析方法建立了黄条 全长(TL)与体重(BW)之间的关系模型：BW=2.1652TL2-140.35TL+2479.9 (R2=0.9812)，体高(BH)与体重间的关系模型：BW=0.7575BH3.0059(R2=0.9816)。研究分析表明，在黄条 的12个可量形态性状中，除眼径外的其他11个形态性状间均存在显著相关关系。通径分析进一步揭示了体高和体长性状是影响体重的2个关键因素，其对体重的决定程度分别达41.34%和13.11%，它们对体重的共同决定程度达42.88%。本研究观察描述了黄条 内部结构特征，其比肠长为0.62-0.69，脊椎骨数量为23-25，总出肉率可达75%。本研究结果可为黄条 种质判别、系统分类及人工繁育与养殖技术开发提供形态认知依据。