Sophie Alain

Value of a new rapid non-radioactive sequencing method for analysis of the cytomegalovirus UL97 gene in ganciclovir-resistant strains

Various DNA changes located within a restricted region of the UL97 open reading frame were shown to be associated with the resistance of cytomegalovirus strains to ganciclovir (GCV). In order to analyse this UL97 region in sensitive and GCV-resistant strains, a non-radioactive sequencing assay (Promega, Madison, WI, USA) which combines the dideoxy visualisation by silver-staining of the gel was used. Using this assay, polymerase chain reaction products from results were obtained within 1 day. Point mutations modifying the amino acid sequence of the putative UL97 catalytic site were detected in three isolates. These led to an alanine to valine substitution in residue 594 in one strain with reduced GCV sensitivity, and to a cysteine to glycine substitution in residue 592 in two GCV-resistant isolates. These mutations were different from the DNA changes previously mapped in GCV-resistant laboratory or field strains. No amino acid substitution in the UL97 catalytic site was found in GCV-sensitive isolates. Transfer marker experiments are in progress in order to test the significance of these DNA changes for GCV resistance. This rapid non-radioactive sequencing protocol could be a useful tool for analysing the UL97 region encoding the putative UL97 catalytic site of clinical isolates.

Tolérance des vaccins contre le rotavirus

Les etudes realisees avant commercialisation ont montre que les deux nouveaux vaccins, Rotarix ® (GSK) et RotaTeq ® (Sanofi-Pasteur MSD), ont une bonne tolerance et une efficacite satisfaisante. Mais le sur-risque d’invagination intestinale aigue (IIA), observe auparavant avec le Rotashield ® et qui avait entraine son retrait, a conduit a renforcer la surveillance post-AMM pour les deux nouveaux vaccins (tous deux vivants attenues). Cette surveillance a permis de constater un leger accroissement du risque d’IIA (environ 1 a 2 pour 100 000 nourrissons vaccines). Pour limiter ce sur-risque, il est imperatif d’administrer la premiere dose (seule en cause) dans une fenetre de temps etroite comprise entre des âges allant de six a 12 semaines. Les liens entre vaccins contre le rotavirus et maladie de Kawasaki, diabete ou pathologies auto-immunes n’ont pas ete demontres. La detection de sequences de circovirus porcins (PCV-1 et/ou PCV-2) dans les vaccins n’est associee a aucun risque, ces virus etant tres repandus (aliments) et non pathogenes pour l’homme. Par precaution, ces vaccins doivent desormais etre exempts de ces virus. Le benefice-risque est tres en faveur de ces vaccins, mais toutes les instances recommandent une surveillance post-AMM tres rigoureuse.

Quelles perspectives pour les vaccins papillomavirus prophylactiques de deuxième génération

Deux vaccins papillomavirus viennent d’etre mis sur le marche. Ils sont tous deux prophylactiques. Necessitant trois injections IM, ils sont a base de pseudo-particules virales (VLP), mais different par les valences contenues dans ceux-ci : l’un est bivalent (HPV 16 + 18) et l’autre quadrivalent (HPV 6 +11 +16 + 18). Ces vaccins ciblent tous deux la prevention du cancer du col de l’uterus, mais le quadrivalent vise en plus les condylomes. Cependant, les papillomavirus humains sont tres nombreux – une centaine est sequencee –, avec des hauts risques et des bas risques ; ils sont impliques dans un certain nombre d’autres cancers vaginaux, vulvaires, peniens et anaux, et sont a l’origine de certains cancers de la sphere ORL – des vaccins prophylactiques ayant ces autres cibles sont envisageables. Les affections sont planetaires et les actuels vaccins tres couteux. Il est donc logique de developper une deuxieme generation de vaccins a plus large spectre, utilisables dans les pays en voie de developpement (cout faible, mode d’administration simple, pas de chaine de froid). Cette revue prend en consideration differentes approches : 1) changement d’antigenes, en utilisant toujours les pseudo-particules virales L1, mais avec accroissement du nombre de serotypes, utilisation de capsomeres ou de proteines recombinantes L1, recours a la proteine L2, et vaccins ADN, voire recours a des vecteurs bacteries ou viraux ; 2) changement de presentation, par accroissement de la stabilite, avec liberation d’antigene differee, ce qui peut limiter le nombre d’injections, et avec augmentation de l’immunogenicite ; 3) changement de voie d’administration : les approches vaccinales prophylactiques sont tres variees et des vaccins de deuxieme voire de troisieme generation, moins couteux, plus facilement administrables, plus immunogenes et ayant un plus large spectre sont envisageables et pourraient prevenir les infections sexuellement transmissibles des deux sexes, mais aussi un large spectre de cancers.