Sten Lagerstedt

The effect of formaldehyde containing fixatives on ribonuclease activity

Summary1. The inactivation of crystalline ribonuclease by formaldehyde and formaldehyde containing fixatives (Serras solution) is demonstrated.2. The rate of inactivation is shown to be dependent uponph, formaldehyde concentration, and time of action of the fixative.3. The effect of formaldehyde containing fixatives on the RNase activity in sections from fixed tissues is discussed, and the inactivation of that enzyme system in rat pancreas is demonstrated.

The effect of formaldehyde-fixation on the amount of ultraviolet absorbing substances released from tissue sections in the histochemical ribonuclease test

Zusammenfassung1.Frisches und gefriergetrocknetes Rattenpankreas wurde entweder in gepuffertem 10%igen Formaldehyd oder in Carnoy-Lösung fixiert. Außerdem wurden Schnitte von dem Material, das in Carnoy-Lösung fixiert war, mit Formaldehydlösung behandelt. Nach vollständiger Spaltung mit Ribonuklease wurden die Reaktionsflüssigkeiten im ultravioletten Licht spektrometrisch analysiert, und die Komponenten, die bei 260 mμ absorbierten, mit Hilfe von Papierchromatographie qualitativ charakterisiert. Die Vollständigkeit der Spaltung wurde durch weitere Extraktionen mit N Überchlorsäure geprüft. Säurelösliche Nukleotide wurden durch kalte 5%ige Überchlorsäure entfernt.2.Nur etwa 60% der ultraviolettabsorbierenden Substanzen, die von den Carnoy-fixierten Schnitten freigesetzt wurden, waren in den Reaktionsflüssig-keiten der Schnitte, die mit Formaldehyd behandelt waren, oder die von frisch formaldehydfixiertem Material herstammten, nachzuweisen. Es konnte gezeigt werden, daß das Formaldehyd 40% der ultraviolettabsorbierenden Substanzen aus dem Carnoy-fixierten Material extrahierte, und daß diese den säurelöslichen Nukleotiden der Schnitte entsprachen. Die Ribonukleaseverdauung ist also nach beiden Fixierungsarten vollständig, und die erwähnte Diskrepanz beruht auf dem niedrigeren Gehalt an Nucleotiden in den mit Formaldehyd fixierten Schnitten.3.Die Frage nach dem Ursprung des säurelöslichen Materials in den Carnoyfixierten Schnitten wird unter besonderer Berücksichtigung der Angaben im neueren Schrifttum diskutiert.

Some characteristic reactions catalysed by the ribonuclease activity in sections from fixed tissues

Summary1. The ribonuclease activity in sections from freeze-dried Carnoy-fixed rat pancreas has been characterized through studies on the products of interaction with synthetic nucleoside derivatives, nucleotide esters, and of the polynucleotide synthetic properties.2. Homogenates of the sections in McIlvaines buffer atph 7.0 degrade pyrimidine 2′:3′-phosphates to the corresponding 3′-dihydrogen phosphate, and the purine derivatives at a much slower rate.3. Synthetic cytidylyl-cytidine, and benzyl- and ethyl-3′-esters of pyrimidine nucleotides are degraded to nucleoside 3′-phosphates. All the purine, and the 2′-esters of pyrimidine nucleotides are not affected during 24 hours of incubation.4. Under influence of the homogenates, ribopolynucleotides will readily be synthesized from cytidine-2′:3′-phosphate and cytidine, the 3′-P-5′dinucleotide links being identified in cytidylyl-cytidine and cyclic dicytidylic acid.5. The conclusion is reached that the activity of the sections coincides with the DEase and CPase activity of crystalline pancreatic RNase. Some aspects of the possibilities for the histochemical localization of the activity are briefly discussed.