Takehiko Ishibashi

Inducement of blood vessel formation by ovarian extracts from mice injected with gonadotropins

Ovarian extracts prepared from immature mice injected with human chorionic gonadotropin (hCG) and pregnant mare serum gonadotropin (PMSG) were assayed for angiogenic activity. The assay method consisted of implanting a film coated with ovarian extracts to the lateral wall of the m.rectus abdominus of a mouse for 20 days and examining the site for vascularization. The higher angiogenic activity obtained with PMSG-treated extract may be related to its follicle stimulating activity.

Meiotic Arresting Substance Separated from Porcine Ovarian Granulosa Cells and Hypothetical Arresting Mechanism of Meiosis

In mammals, oogonia enter prophase of the first meiotic division in prenatal life, and shortly after birth, all oocytes are arrested in a late prophase known as the dictyate stage, and when an oocyte in an ovary reaches the end of its growth period, it contains a single large nucleus called the germinal vesicle (Franchi et al., 1962). It is now generally accepted that the resumption of the arrested first meiotic division occurs as a result of the surge of luteinizing hormone (LH) at each ovarian cycle (Shuetz, 1969; Tsafriri, 1978a), although the ability to complete the first meiotic division is related as well to the stage of follicular development (Tsafriri and Channing, 1975a; Sorensen and Wassarman, 1976).

Effects of the temperature of ice-seeding on survival of frozen-and-thawed mouse morulae

Mouse morulae were frozen to −196°C in the presence of 1.2 M ethylene glycol or 1 M glycerol. After iceseeding in embryo samples at −10°C or below, the survival rates in vitro were lower than those obtained by ice-seeding between −4° and −8°C. The proportion morulae developing into live young in vivo after ice-seeding at −13°C and freezing was lower than that of embryos seeded at −4°C.

Effect of Inhibin-Like Substance Isolated from Porcine Follicular Fluid on the Follicle-Stimulating Hormone (FSH) Level in Mouse Serum and on FSH Binding to Porcine Granulosa Cells *

An inhibin-like substance, a follicle-stimulating hormone (FSH) inhibitor, was isolated from porcine follicular fluid and purified. Serum FSH levels of unilaterally ovariectomized mice which received injections of the inhibitor were lower than those of unilaterally ovariectomized mice which received injections of saline. The inhibitor also suppressed FSH binding to granulosa cells in vitro. These results suggest that this protein is an FSH inhibitor and that it has two modes of action: suppression of FSH levels in serum and suppression of FSH binding to granulosa cells.

Effects of low temperatures on survival of frozen-thawed mouse embryos

Almost no damage to mouse morulae was observed between 0 and −40°C, and freezing damage to embryos in DMSO, glycerol or ethylene glycol occurred after exposure to −60, −50 or −50°C, respectively. Cooling embryos in DMSO or glycerol to temperatures below −50 to −60°C increased freezing damage. To the contrary, in the presence of ethylene, glycol, no more damage occurred after exposure to temperatures below −50°C.

The effects of time of equilibration with cryoprotectants at 0°C prior to freezing on the survival of mouse embryos frozen by the two-step method

Mouse embryos were frozen by the two-step method after equilibration for 0.1–60 min with cryoprotectants at 0°C. No survival or a very low survival was obtained after equilibration for only 0.1 min. The morulae showed the highest survival rates when equilibration time was 5–30 min with 2 M DMSO, 20–30 min with 2 M glycerol, 5–10 min with 2 M ethylene glycol and 20–30 min with 2 M propylene glycol, respectively.

Electron Probe X-Ray Microanalysis of Iron in the Rumen Mucosa of Cattle

X線マイクロアナライザー(島津EMX-SH)を用い,面,線,点分析によって牛の第一胃粘膜における鉄の存在,分布,色調との関係などを調べた.用いた材料は色調を異にする粘膜で成牛(暗褐色),1ヶ月齢(褐色)胎児(白色)から採取したものである.粘膜の色調は粘膜上皮にみられる鉄反応陽性の色素に由来すると言われるが,X線マイクロアナライザーによる測定でもそれらの色素に多量の鉄が存在することが確認された.鉄の含有量は粘膜の色調に比例し,色調の濃い成牛で最も多く,1ヶ月齢のものがそれに次ぎ,白色を呈する胎児では極めて少量であった。成牛の粘膜の表面には鉄のほか,カルシウム,カリウム,マンガン,オスミウム,燐,硫黄が検出され,そのうちオスミウムおよび燐が比較的多く見出された.しかし,オスミウムは面分析の結果粘膜の全面に亘つて強い反応がみられ,恐らく固定液に使用したオスミウム酸に由来するものと考えられる.これに反し,燐の分布は鉄の分布とほぼ一致し,鉄は燐酸鉄の型で上皮の色素中に沈着しているのではないかと推察される,粘膜における色素はメラニン反応に陰性で,その分布は上皮の角質層では大きな塊の状態で表層に付着しているが,深層になるにしたがい小さくなり,顆粒層や胚芽層では微細な顆粒として存在する.このことから他の研究者の報告と同様に鉄を含むそれらの色素は細胞や組織内で作られたものでなく,胃の内容物など外部から取り入れられたものと考えられる.

Distribution of Langerhans-islets and B-cells in Pancreas of Pig and the Crossbred of Pig×Wild Boar

膵臓はその発生の違いにより,背側膵臓と腹側膵臓に分けられる.この違いにより,ランゲルハンス島における内分泌細胞の分有などに差異がみられることが,種々の動物で調べられている.今回,ブタとイノブタの膵臓における,ランゲルハンス島およびB細胞の公布について調べた.ブタおよびイノブタの成熟雌各3頭を用いて,常法に従いパラフィン切片を作製しアルデヒド•フクシン染色によってランゲルハンス島およびB細胞の染あわけを行なった後,当的法によって計測した.ブタおよびイノブタでは,ランゲルハンス島は膵臓全体に散在性にみられ,腹側膵臓では1.05～1.16%,背側膵臓では0.74～0.92%で,腹側膵臓で高い傾向を示した.B細胞は,ランゲルハンス島の中心部から全体にわたって存在し,その体積比は腹側膵臓では91.06～95.45%,背側膵臓では82.78～91.40%で腹側膵臓に多くみられた.これらの結果から,ブタおよびイノブタ膵臓における内分泌細胞の分布は,ヒト,ウサギ,ラットなどにみられるB細胞がランゲルハンス島の中心部に位置する型と同じであると思われた.

The distribution of hydroxysteroid dehydrogenase activities in the mouse ovary during the estrous cycle.

IVCSマウスを用いて,性周期にともなうマウス卵巣のhydroxysteroid dehydrogenase(HSD)の分布と活性の強さの変動を明らかにするために実験をおこなった。検出したHSDは3β-HSD(基質にpregnenoloneとdehydroepiandrosterone(DHA)を使用)と17β-HSD(estradiol-17β使用)であった。1.3β-HSD.基質としてpregnenoloneとDHAのいずれを用いても,酵素の分布と活性の強さに差は認められなかった。穎粒層が4層以上の卵胞腔形成前卵胞と小型胞状卵胞の卵胞膜内層に弱いか中等度の活性が認められたが,穎粒層細胞には活性は存在しなかった。大型胞状卵胞の穎粒層細胞に活性が出現し,発情前期と発情期に中等度に増した。これらの卵胞の卵胞膜内層における活性は発情休止期,発情前期,発情期に増し,強い活性が認められた。発情後期-2の黄体に他の周期より強い3β-HSDが認められたが,これはこの時期に黄体機能が高まったことを示している。間質腺はつねに非常に強い3β-HSD活性が認められ,表在上皮には活性は存在しなかった。以上の成績は,マウス卵巣におけるprogesterone合成には間質腺,胞状卵胞の卵胞膜内層および黄体がおもな役割をはたすことを組織化学的に示している。2.17β一HSD.多くの場合酵素活性は認められず,まれに黄体,間質腺などに弱い活性が存在するにすぎなかった。

Histochemical Demonstration of Glucose-6-phosphate and Isocitrate Dehydrogenasesin the Ovary of the Crossbred of Pig×Wild Boar

ブタとイノシシの交雑であるイノブタの卵巣機能を明らかにするために本研究を行なった、グルコース6リン酸脱水素酵素 (G6PDH) はペントース回路の, イソクエン酸脱水素酵素 (ICDH) はクエン酸回路の重要な位置をしめNADPHを産生する. この経路によって産生されるNADPHはステロイドの水酸化に役割を果たしている. 発情周期中の各期の成熟イノブタ13頭と未成熟イノブタ4頭から卵巣を採取し, NADP依存性のG6PDHとICDHを組織化学的に検出した. 卵胞の卵胞膜内層にG6PDHの強い活性が, 冨粒層細胞に中等度の活性が存在した。発情前期と発情期の直径5mm以上の卵胞では, これらの部位のG6PDH活性が増した. 発情後期から休止期にかけての発育中の黄体では非常に強いG6PDH活性を示し, 白体では活性が著しく低下した. ICDHに関しては卵胞膜内層に弱い活性が, 冨粒層細胞に弱いか中等度の活性が認められた. 黄体にも弱いICDH活性が存在した. 間質腺の発達は悪かったが, 強いG6PDH活性と弱いICDH活性が存在した. 表在上皮に弱いG6PDH活性が存在したが, ICDHは認められなかった. イノブタ卵巣におけるこれらの酵素の分布と強さは, 以前の研究で得られたΔ 5-3β-ステロイド水酸基・脱水素酵素のそれ (胞状卵胞の卵胞膜内層, 黄体および間質腺に存在し, とくに直径5mm以上の卵胞の卵胞膜内層と発育黄体は中等度ないし強い活性を示した) と一致する傾向がみられた. これらの組織化学的結果から, イノブタ卵巣はG6PDHとICDHによって産生されるNADPHをステロイド合成に利用していると思われる. さらに, イノブタ卵巣におけるプロジェステロン合成には, 他の動物種と同様に黄体が主要な役割を果たしていることを組織化学的に示した.