V. Loup

Identifying new human oocyte marker genes: a microarray approach.

The efficacy of classical IVF techniques is still impaired by poor implantation and pregnancy rates after embryo transfer. This is mainly due to a lack of reliable criteria for the selection of embryos with sufficient development potential. Several studies have provided evidence that some gene expression levels could be used as objective markers of oocyte and embryo competence and capacity to sustain a successful pregnancy. These analyses usually use reverse transcription-polymerase chain reaction to look at small sets of pre-selected genes. However, microarray approaches allow the identification of a wider range of cellular marker genes which could include additional and perhaps more suitable genes that could serve as embryo selection markers. Microarray screenings of around 30,000 genes on U133P Affymetrix gene chips made it possible to establish the expression profile of these genes as well as other related genes in human oocytes and cumulus cells. This study identifies new potential regulators and marker genes such as BARD1, RBL2, RBBP7, BUB3 or BUB1B, which are involved in oocyte maturation.

Comparative protein expression profiling in human cumulus cells in relation to oocyte fertilization and ovarian stimulation protocol.

Comparative profiling was performed on proteins synthesized in human cumulus cells (CC) from individual oocytes recovered after two different ovarian stimulation protocols for classical IVF (cIVF). Using high-resolution two-dimensional protein electrophoresis after metabolic labelling with [35S]-methionine, protein expression was profiled in CC of metaphase II oocytes obtained after two different ovarian stimulation protocols (rFSH versus human menopausal gonadotrophin). Analysis was done on CC from two cIVF cycles in the same patient and then extended to CC from individual oocytes from two groups of patients. CC from single oocytes have robust levels of protein expression into 600-800 protein spots. Comparison of CC protein expression from oocytes obtained from the same patient but after two different stimulation protocols shows that the type of hormonal treatment influences CC protein expression. In contrast, CC from oocytes obtained under the same stimulation protocol but with different fertilization outcome show a high profile similarity with differences in only a few spots. Comparison of two groups of patients indicates that dissimilarities in protein pattern between patients become very high, even when comparing the same stimulation protocol and oocyte fertilization outcome. Thus protein expression profiling of human CC may provide a correlation between the synthesis of specific cumulus proteins and maturity and fecundity.

Solutions thérapeutiques pour les infertilités masculines

La part de l’homme dans les causes de l’infertilité du couple, a été depuis la nuit des temps, sous estimée dans toutes les sociétés. Nous avons pensé pendant longtemps que la femme était le plus souvent tenue pour responsable de la stérilité du couple. C’est la femme qui procrée ! On considère qu’elle n’est pas enceinte, c’est donc elle est stérile. En effet, la responsabilité seule de la femme n’apparaît que dans 30 % des cas, celle de l’homme dans 30 % des cas et dans 40 % où les sont responsables. Ainsi, annoncer à l’homme les résultats d’azoospermie après un spermogramme, est, non seulement un véritable drame intérieur, mais aussi et surtout une catastrophe familiale. Heureusement, les récents progrès en AMP sont venus atténuer ce drame et redonner de l’espoir. Cependant, depuis une trentaine d’années, la part de l’infertilité masculine ne cesse de croître. Concernant la fréquence actuelle des infertilités masculines, trois facteurs pourraient être responsables de leur apparente augmentation : l’âge plus avancé du père dans les procréations des couples, une meilleure détection du nombre des infertilités en rapport avec des causes connues ou récemment découvertes, ou enfin une altération de la qualité du sperme. Malgré de multiples essais thérapeutiques, le traitement médical de l’infertilité masculine in vivo reste décevant. À l’exception des traitements antibiotiques ou anti-inflammatoires, le traitement par les gonadotrophines dans le cadre des insuffisances gonadotropes demeure la seule indication médicale de l’infertilité masculine. L’assistance médicale à la procréation (AMP) constitue aujourd’hui le seul recours au traitement de l’infertilité masculine. Les techniques d’AMP ne représentent pas un traitement curatif de l’infertilité masculine mais, une démarche thérapeutique permettant aux couples infertiles de réaliser leur projet parental. Les techniques de préparation du sperme in vitro en vue d’une AMP ont pour but d’éliminer le plasma séminal, les débris cellulaires et les spermatozoïdes immobiles et de sélectionner des spermatozoïdes mobiles et à morphologie normale. En fait, les techniques de préparation du sperme in vitro tendent à mimer le rôle de la glaire cervicale. Les deux techniques les plus communément utilisées sont la migration ascendante (swim-up) suivi d’un lavage, et la centrifugation sur gradient de densité (pure sperm). La première technique est principalement recommandée lorsque la mobilité des spermatozoïdes est préservée. Pour le pure sperm, elle est particulièrement utilisée pour un sperme ayant une oligo-asthéno-tératospermie modérée ou sévère. Le choix entre les différentes techniques d’AMP disponibles dans la prise en charge de l’infertilité masculine repose essentiellement sur le nombre de spermatozoïdes mobiles et à morphologie normale récupérés après préparation du sperme in vitro. C’est ainsi que progressivement la pratique de l’insémination artificielle (IA), en suite la FIVc et plus récemment la fécondation in vitro par micro injection ovocytaire (ICSI), ont complètement changé la prise en charge de l’infécondité masculine dans son ensemble et celle de l’azoospermie en particulier. L’insémination artificielle avec le sperme du conjoint (IAC) a été préconisée dès la fin du 18e siècle et la congélation des spermatozoïdes n’a eu lieu qu’au milieu du 20e siècle

Faut-il raisonnablement proposer une cinquième tentative de fécondation in vitro après échecs répétés d’implantation ?

Accepter ou non une cinquieme tentative en fecondation in vitro reste aujourd’hui un sujet a debat, tant par les couts engendres pour la societe que pour les faibles taux de grossesses obtenus. Faut-il selectionner seulement des patientes aux chances de grossesses acceptables ? Que proposer en cas d’echecs repetes d’implantation ? Le cas clinique presente ici illustre cette situation. Environ deux tiers des echecs d’implantation seraient dus a un defaut de receptivite ou une mauvaise synchronisation endometre/embryon. De nouveaux tests d’appreciation de la receptivite endometriale sont aujourd’hui disponibles, permettant de detecter de facon precise la fenetre d’implantation par une approche transcriptomique. Ces tests semblent prometteurs mais sont actuellement en cours d’evaluation. Des etudes prospectives randomisees devraient permettre prochainement une meilleure visibilite de la pertinence de ces tests.