Wataru Chiba

Fluorescence-based polymerase chain reaction-single-strand conformation polymorphism analysis of p53 gene by capillary electrophoresis.

Mutation of the p53 gene plays an important role in neoplastic progression in human tumorigenesis. Polymerase chain reaction-single-strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) techniques are now available for the detection of point mutations. The original method using polyacrylamide gel electrophoresis is disadvantageous, particularly for clinical tests and for analysis of large numbers of samples. Therefore, using an automated capillary electrophoresis (CE) technique with a molecular-sieving polymer solution, we have devised a completely automatic fluorescence-based PCR-SSCP system (CE-FSSCP) for the differential detection of point mutations that dose not require SSCP with radioisotopes and polyacrylamide gels. The automatic CE-FSSCP system was developed for reproducible operations in the denaturation of double-stranded DNA and electrophoresis of single-stranded DNA. The detection system consists of a 100 W I2 lamp and photomultiplier. We performed CE-FSSCP with a 2% linear polyacrylamide polymer solution containing 5% glycerol. Four tissue specimens of lung tumors with mutations in exon 7 of the p53 gene were found to have mutant alleles; six-base-pair deletion at codons 247-248, a one-base-pair deletion at codon 260, a one-base-pair deletion at codon 244 and a GGC to CGC substitution at codon 244. We expect this technique to prove useful for the clinical DNA diagnosis of human cancers, determination of the therapeutic effect of anticancer agents and for the study of the molecular aspects of the mechanisms involved in the pathogenesis of human cancers.

A case of solitary bronchial papilloma.

非常にまれな孤立性気管支乳頭腫の1例を経験した.症例は43歳, 女性.咳漱, 血疾を主訴とし, 胸部X線上右S6に塊状陰影を認めた.気管支鏡検査では右B6bはポリープ状の腫瘍で閉塞しており, 生検組織診断は乳頭腫の疑い, 洗浄細胞診では高分化扁平上皮癌を疑った.肺癌に準じて右下葉切除を施行した.腫瘍は5.0×5.0×3.0cm大で, 嚢胞状に拡張した右B6bに充満しており, 末梢肺は無気肺を呈していた.組織学的には気管支粘膜部に発生した分化のよい扁平上皮細胞の乳頭状増殖で, 浸潤増殖は認めず配列極性は保たれており乳頭腫と診断した.喀疾細胞診では炎症による軽度異型扁平上皮化生と診断したが, 気管支洗浄液中には重積性著明でmonotonousな細胞集塊を認め, 明らかに腫瘍性増殖集塊と考えられた.それらの細胞異型は軽度であったが構造異型を重視し, 高分化扁平上皮癌を疑った.孤立性気管支乳頭腫の細胞学的診断は喀疾細胞像のみでは困難であるが, 気管支鏡による積極的な細胞採取を行い腫瘍性増殖像を認めれぼ可能であると考えられた.

Correlation between Loss of Heterozygosity of p53 Gene and Amplification of Oncogenes in Cases of Resected Lung Cancer.

凍結保存していた切除肺癌組織と同一患者の正常肺組織60例を用いて, p53遺伝子の腫瘍特異的多型性喪失 (LOH) と, myc系, ras系, c-erbB-2遺伝子の増幅について検討した. 対立遺伝子がhomozygote (HOMO) であったのは37例, heterozygote (HETERO) であったのは23例で, このうち7例でLOHを認めた. LOHのあった症例のうち他の癌遺伝子に増幅を認めたのは1例だけであり, HOMO症例では12例 (46%) で他の癌遺伝子の増幅を認めた. LOHは病期別ではI期2例 (8%), IIIA期3例 (19%), IV期2例 (25%) で認め, 組織型別では腺癌5例 (15%), 扁平上皮癌2例 (9%) で認めた. HETERO症例のうち, LOHのあった症例の平均生存期間 (MST) は22カ月, LOHの無かった症例のMSTは19カ月で有意差はなかった. p53のLOHは病期が進むほど増加するが予後との関連性は無く, 組織型との関連性も無かった. 癌遺伝子の増幅はLOHを認めない症例で多くみられた.