Yang Qian

斑点叉尾鲖 BPI 1基因的原核表达及生物信息学分析

为探究斑点叉尾鲖 BPI 1抗菌肽基因编码蛋白的结构特征，实验提取斑点叉尾鲖肾脏RNA，根据 BPI 1基因序列设计引物，利用PCR方法克隆 BPI 1基因并构建至原核表达载体pTWIN1中。构建成功的重组质粒pTWIN1-BPI1经原核表达，SDS-PAGE检测显示得到约为50 ku的融合蛋白，与预期结果相一致。通过生物信息学软件对 BPI 1基因编码的蛋白序列进行分析，结果显示，克隆所得斑点叉尾鲖 BPI 1基因编码一条由223个氨基酸残基组成的多肽，等电点为9.07，属于BPI超家族，是稳定的亲水蛋白。亚细胞定位 BPI 1分布在线粒体（43.5%）、细胞质（30.4%）和细胞核（26.1%）中，表明 BPI 1可能在嘌呤和嘧啶合成以及能量代谢等过程中发挥信号转导、促进生长等重要作用。二级结构以α-螺旋和β-折叠为主，三级结构呈棒状。同源性及进化树分析表明，实验所得 BPI 1基因序列与斑点叉尾鲖 BPI 抗菌肽基因的同源性最高，序列一致性为99.1%，进化树聚为一支，表明 BPI 1基因编码的蛋白序列在相同物种中的突变率较低，保守性较高，相同物种中其生物活性与个体间的差异关系较小。