Language
Country/Area
No result found
Знаете ли вы, почему изменение цвета белка показывает его концентрацию?
Белки играют жизненно важную роль во множестве биологических процессов, поэтому измерение их концентрации имеет решающее значение для многих биомедицинских исследований и экспериментов. Однако традиционные методы измерения часто требуют специального оборудования или сложных действий, из-за чего многие исследователи сталкиваются с трудностями при проведении анализа белков. Чтобы решить эти проблемы, в 1976 году Мэрион М. Брэдфорд изобрела простой и быстрый метод измерения концентрации белка, названный белковым анализом Брэдфорда.
Анализ белка в Брэдфорде использует изменение цвета для определения концентрации белка. Этот процесс основан главным образом на красителе под названием Coomassie Brilliant Blue G-250.
Согласно методу Брэдфорда, когда белковый раствор смешивается с красителем Coomassie Grey Blue G-250, цвет красителя меняется с исходного красного на синий. Ключом к этому изменению является то, что краситель будет нековалентно связываться с определенными аминокислотами в белке в кислой среде, тем самым изменяя его поглощение. В частности, краситель имеет пик поглощения при 465 нанометрах, а когда он связывается с белком, пик поглощения смещается до 595 нанометров.
Это изменение поглощения можно использовать для оценки концентрации белка в образце.
Этот метод не только обладает преимуществами высокой чувствительности и простоты эксплуатации, но также не подвержен влиянию других химических веществ (таких как натрий, калий или некоторые сахара и т. д.). Это очень важно для многих образцов, содержащих примеси. Однако если концентрация ДСН в образце слишком высока, это может повлиять на точность метода, что приведет к неправильному определению индекса белка. Столкнувшись с этой проблемой, исследователи постоянно корректируют условия измерений и изучают альтернативные методы анализа для поддержания точности эксперимента.
Ключевым преимуществом анализа белка по Брэдфорду является то, что его можно выполнить всего за полчаса, что экономит время и снижает затраты на эксперименты. Стандартная процедура чрезвычайно проста: просто смешайте реагент Брэдфорда с образцом, и после короткого ожидания можно сразу провести измерение фотометром. Кроме того, этот метод применим практически ко всем типам белков, особенно когда необходимо количественно определить следовые количества белков. Он чрезвычайно чувствителен и позволяет точно измерять образцы с массой менее 20 мкг.
Чувствительность и простота белкового анализа Брэдфорда позволяют исследователям гибко использовать его для анализа различных белков.
По мере развития научных исследований, анализ белка в Брэдфорде также сталкивается с некоторыми проблемами. Например, диапазон анализа относительно невелик и обычно составляет от 0 до 2000 мкг/мл, что вынуждает исследователей разбавлять образцы при анализе, что может привести к ошибкам измерений. Кроме того, результаты измерений метода Брэдфорда могут быть необъективными для определенных белков, особенно в образцах с более высоким содержанием коллагена, что делает улучшение метода приоритетом будущих разработок.
Еще одно примечательное улучшение заключается в том, что добавление небольшого количества додецилсульфата натрия (SDS) во время анализа значительно повышает точность обнаружения ключевых белков, таких как коллаген. Это улучшение не только повышает чувствительность обнаружения коллагеноподобных белков, но также снижает абсорбцию неколлагеновых белков.
По мере того как исследования в этой области продолжаются, белковый анализ Брэдфорда становится все более широко используемым. Они не только широко используются в биологии и биомедицине, но и способствуют дальнейшему углублению понимания белков и их функций. Такая технология может не только ускорить процесс исследования белка, но и предоставить важные базовые данные для развития новой лекарственной устойчивости. Какие подсказки могут дать нам изменения цвета белков, которые когда-то были неожиданными?
