Language
Country/Area
No result found
Магическая химия метода Брэдфорда: как обнаружить секрет белка с помощью капли красителя?
С момента разработки в 1976 году Мэрион М. Брэдфорд анализ белка по Брэдфорду стал незаменимым инструментом в биохимических исследованиях. Этот быстрый и точный спектроскопический метод позволяет измерять концентрацию белков в растворе и известен своей зависимостью от аминокислотного состава. Метод Брэдфорда не только прост и удобен в применении, но и очень чувствителен, что делает его все более широко используемым в лабораториях.
Метод Брэдфорда основан на измерении изменения цвета фталоцианиновых красителей и количественно измеряется путем наблюдения за взаимодействием между различными белками и красителями.
Принцип
Анализ Брэдфорда представляет собой колориметрический метод измерения белка, основанный на изменении поглощения красителя фталоцианина синего G-250. Краситель выпускается в трех формах: анионной (синей), нейтральной (зеленой) и катионной (красной). В кислой среде красный краситель становится синим и связывается с измеряемым белком. Если связывающего белка нет, раствор останется коричневым.
Краситель связывается с карбоксильными и аминогруппами белков посредством сил Ван-дер-Ваальса и заряженных взаимодействий. В ходе этого процесса красный фталоцианиновый краситель переносит свободные электроны на ионизированные боковые цепи белка, разрушая его нативное состояние и обнажая гидрофильный карман, что позволяет красителю еще больше усилить свое связывание посредством сил Ван-дер-Ваальса и ионных взаимодействий. Связывание с белки.
ПреимуществаКогда краситель связывается с белком, поглощение смещается с 465 нм до 595 нм, делая показание поглощения при 595 нм индикатором концентрации.
Метод Брэдфорда позволяет избежать помех со стороны многих других методов обнаружения белков и имеет высокую устойчивость к таким веществам, как сульфат натрия (SDS), что делает этот метод применимым в различных средах. Многие образцы невозможно надежно измерить в диапазоне поглощения 280 нм, а метод Брэдфорда требует только добавления красителя и последующего измерения при 595 нм.
Это делает его использование таким же простым, как смешивание образца с фталоцианиновым синим красителем в пробирке, а затем считывание поглощения при длине волны 595 нм. Метод позволяет измерять от 1 до 20 мкг белка и является очень чувствительным. Процесс тестирования обычно занимает не более 30 минут и может проводиться при комнатной температуре.
Простота и гибкость анализа Брэдфорда делают его быстрым и надежным выбором для обнаружения белка в вашей лаборатории.
Недостатки
Хотя метод Брэдфорда имеет ряд преимуществ, он имеет относительно узкий линейный диапазон и требует разбавления перед анализом, что может привести к накоплению ошибок. Кроме того, если образец содержит определенные щелочные вещества или высокие концентрации моющих средств, это может повлиять на результаты испытаний. Кроме того, этот метод может быть недостаточно точным для обнаружения некоторых типов белков, таких как коллаген.Это означает, что при проведении теста Брэдфорда ученым необходимо знать состав и возможные эффекты используемых реагентов, чтобы гарантировать точность результатов.
Направление будущего развития
По мере развития научных исследований анализ белка Брэдфорда продолжает развиваться. Одной из заметных модификаций является введение небольшого количества SDS, что увеличивает реакцию обнаружения коллагена в четыре раза. В то же время это также снижает абсорбцию других неколлагеновых белков, что делает результаты теста более точными.
Процесс работы
Стандартная операционная процедура метода Брэдфорда очень проста. Например, при использовании в качестве стандарта белка гамма-глобулина из сырой бычьей плазмы параметры составляют 200–1500 мкг/мл. В тестовом приложении вам нужно всего лишь разбавить стандартный раствор различной концентрации, добавить краситель фталоцианиновый синий, дать постоять 5 минут, измерить поглощение при 595 нм, построить стандартную кривую и рассчитать концентрацию неизвестного белка.
Подготовка и использование стандартной кривой делает метод Брэдфорда эффективным и точным при расчете концентрации белка.
Анализ белка Брэдфорда появился в области научных исследований благодаря своим уникальным и удобным характеристикам. Поскольку в будущем спрос на анализ окружающей среды и образцов будет расти, применимость и важность этого метода будут еще больше возрастать. Можем ли мы в этом быстро меняющемся научном мире найти более простые и эффективные методы раскрытия тайн жизни?
