Language
Country/Area
No result found
Революция ПЦР в реальном времени: как сделать обнаружение РНК проще, чем когда-либо прежде?
С момента появления метода нозерн-блоттинга в 1977 году методы количественной оценки РНК продолжали развиваться. Теперь появление полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) представляется крупным прорывом в этой технологии. В диагностике и исследованиях ОТ-ПЦР стала предпочтительным методом обнаружения и количественной оценки специфической РНК. Ее простота и высокая чувствительность, несомненно, изменили способ проведения экспериментов по обнаружению.
«ОТ-ПЦР в сочетании с технологией амплификации второго этапа делает анализ РНК более точным и удобным, чем когда-либо прежде».
В основе ОТ-ПЦР лежит процесс транскрипции РНК в комплементарную ДНК (кДНК) и проведение ПЦР-амплификации. Этот процесс не только повышает чувствительность обнаружения РНК, но и позволяет проводить обнаружение в короткие сроки даже при наличии лишь следовых количеств образцов РНК. Появление этой технологии привело к появлению множества новых сфер ее применения, включая анализ экспрессии генов и количественное обнаружение вирусной РНК.
Два способа упростить процесс
ОТ-ПЦР можно проводить с использованием комплексного одношагового метода или пошагового метода. При одношаговом методе все реакции завершаются в одной пробирке, что позволяет снизить риск загрязнения во время работы; при пошаговом методе обратная транскрипция и ПЦР-амплификация разделены на два независимых этапа, хотя и относительно сложных. . , но с более высокой точностью.
«Появление технологии одношаговой ОТ-ПЦР не только упрощает процесс работы, но и делает обнаружение различных сложных образцов РНК более осуществимым».
Расширение области применения
В последние годы область применения ОТ-ПЦР постоянно расширяется: от базового анализа экспрессии генов до диагностики генетических заболеваний и рака, что свидетельствует о ее широкой практичности. Многие ученые работают над разработкой новых приложений ОТ-ПЦР. Например, при открытии биомаркеров рака исследователи используют ОТ-ПЦР для обнаружения уникальных транскриптов мРНК, продуцируемых циркулирующими опухолевыми клетками, — метод, который помогает улучшить прогноз и эффективность лечения. монитор.
Достижения в технологии обнаружения в реальном времени
Беспрецедентное удобство также стало возможным благодаря появлению технологии ОТ-ПЦР в реальном времени, которая позволяет ученым мгновенно отслеживать генерацию продуктов ПЦР в каждом цикле. Технологии Transform, такие как SYBR Green и TaqMan, предлагают разнообразные решения для обнаружения продуктов ПЦР в этой технологии.
«Развитие технологии ОТ-ПЦР в реальном времени позволило РНК-тестированию достичь качественного скачка в точности и гибкости».
Проблемы и перспективы
Хотя технология ОТ-ПЦР имеет много преимуществ, она также имеет некоторые проблемы. Например, загрязнение ДНК в образце может привести к ложноположительным результатам. Кроме того, чтобы гарантировать точность своих анализов, исследователи должны тщательно планировать свои эксперименты и использовать соответствующие контрольные группы, чтобы избежать предвзятости при анализе данных.
«Учитывая потенциал технологии ОТ-ПЦР, будущие технологические усовершенствования еще больше повысят точность и надежность ее обнаружения».
Оглядываясь назад на развитие ОТ-ПЦР, можно сказать, что она, несомненно, стала золотым стандартом для обнаружения РНК, но вместе с тем она возлагает и более высокие надежды на будущее применение этой технологии. Это заставляет нас задаться вопросом: какие новые возможности принесет с собой развитие технологии ОТ-ПЦР в условиях стремительного развития современной науки и техники?
