在基因组学的世界中,测序技术的演变为我们理解生命的组成与运作带来了革命性的影响。其中,单分子实时(SMRT)测序作为一项创新的技术,凭借其独特的运作原理和高效性能,正在重新塑造我们对基因组的认知。 SMRT测序的核心在于零模式波导(ZMW)技术,这使得研究人员能够在单分子层面上追踪DNA聚合酶的延伸过程,并最终解码基因组讯息。
SMRT测序能够在单分子的层面进行DNA测序,使得我们能够获得更加精确的基因组资讯。
SMRT测序的工作原理依赖于一种卓越的光学技术。在每一个ZMW中,一种单一的DNA聚合酶被固定到底部,随着DNA模板的延伸,四种不同的萤光染料标记的核苷酸被逐个添加。当聚合酶数据捕获到萤光信号时,对应的核苷酸便会被确定,这个过程即是实时测序的关键所在。
萤光染料的使用使得探测器可以精确识别出聚合酶合成过程中每一个核苷酸的加入。
在进行测序前,DNA片段会被转换成圆形结构,这是在文库准备阶段进行的。这种方法使我们能够将同一分子进行多次阅读,显著提升了读取长度及准确性。根据报告,利用最新的Sequel 6.0化学技术,较短插入文库的平均读取长度可以达到100,000个碱基序列,而较长插入文库的平均读长则约为30,000个碱基。
Sequel 6.0化学技术的推出大幅提升了测序准确性和数据产量,对于基因组研究而言显得尤为重要。
PacBio于2011年商业化了SMRT测序技术,随后推出了RS和RS II型号的仪器,这些仪器随着时间的推移不断进行改进,从而提升了测序的准确性和读取长度。 2013年,PacBio推出了新的DNA聚合酶结合试剂,不仅提升了读长,还改善了变异物的鉴别。
SMRT测序被应用于多个领域,包括探索新颖的基因组,鉴定基因变异,甚至是研究细菌和古菌的完整基因组。其超长的读取长度可以帮助科学家更精确地拼接基因组,并能够有效识别基因的不同转录变体。
超长读取技术使得研究人员能够毫无阻碍地捕捉到基因的全貌,开启了基因组学研究的新篇章。
随着基因组学技术的日益成熟,SMRT测序不仅为我们提供了探索生命奥秘的工具,更引发了对生命本质的深层思考。这项技术将如何进一步推动生命科学的发展,揭开未知的面纱,而我们对这一切的理解又会有怎样的演变呢?