自1976年由瑪麗安·布拉德福德(Marion M. Bradford)發明以來,布拉德福德蛋白質測定法(又被稱為考馬斯蛋白質測定法)迅速成為實驗室中不可或缺的工具。這項快速且準確的光譜分析技術,能夠有效測量溶液中蛋白質的濃度,對於科學界來說,布拉德福德測定法的成功秘訣在於其有效性與便利性。
布拉德福德蛋白質測定法基於考馬斯光亮藍G-250染料的吸收轉變,這使其在不同的環境下展現出不同的形態與顏色。例如,在酸性環境中,染料成為藍色形式並與蛋白質結合,而在沒有蛋白質的情況下,溶液則保持棕色。
這種分類的方法使得對於測量蛋白質的能力變得精確。當染料與蛋白質結合時,會使得樣品的吸光度從465 nm轉變到595 nm,並且在這個波長上進行讀取,表明樣品中蛋白質的濃度。
與其他蛋白質測定法相比,布拉德福德測定法在化學干擾方面的抗干擾性更強,尤其是對像鈉、鉀等化學物質或如蔗糖等碳水化合物。此外,該法的操作簡便,從準備到完成大約只需30分鐘,這使得其在實驗室的日常應用中十分受歡迎。
在環境對比中,布拉德福德蛋白質測定法彌補了其他技術的一些缺陷。例如,BCA法和洛里法在存在某些分子的情況下可能無法有效工作,而布拉德福德測定法在這方面則表現出更好的相容性。
然而,儘管其優勢顯著,布拉德福德測定法也存在一些挑戰。其線性範圍有限,這使得在測量較高顆粒樣品時需進行稀釋,此外某些物質(如清潔劑SDS)也可能對結果產生干擾。這些問題需要在操作中謹慎考慮,以確保數據的準確性。
有趣的是,研究人員正在積極改進布拉德福德測定法,以提高對特殊蛋白質如膠原蛋白的檢測精確度。最近的研究顯示,適當添加少量的SDS可以在檢測膠原蛋白時,顯著提高吸色反應,又不影響其他非膠原蛋白的吸收。
這些新改良的布拉德福德測定法不僅能提升對膠原蛋白的準確度,還大大擴展了其在高膠原蛋白樣本中的應用範圍,使得該方法的高效性和靈活性展現得淋漓盡致。
展望未來,我們能否想像一個更準確且多功能的蛋白質測定法,或許只需輕鬆的步驟,便能快速獲得實驗結果?這不僅能改變我們對於蛋白質的理解,更能推動生物技術的革命性進展。