Language
Country/Area
No result found
من تثبيت الأنسجة إلى التلوين: هل تعرف العملية الغامضة للمناعة الكيميائية؟
المناعة الكيميائية النسيجية هي إحدى تقنيات التلوين المناعي التي تركز على التعرف الانتقائي على المستضدات (البروتينات) في الخلايا والأنسجة بواسطة الأجسام المضادة. تطورت هذه التقنية من تقنية المناعة الفلورية التي طورها في الأصل ألبرت هيويت كونز وآخرون في عام 1941. مع مرور الوقت، أصبحت المناعة الكيميائية شائعة جدًا في تشخيص السرطان والأبحاث الأساسية، مما يساعد العلماء على استكشاف توزيع المؤشرات الحيوية والبروتينات المعبر عنها بشكل مختلف في الأنسجة البيولوجية المختلفة.
إعداد العينة
يمكن إجراء المناعة الكيميائية على الأنسجة التي تم تثبيتها وغمرها في البارافين، أو على الأنسجة المجمدة. قبل أخذ العينة، يجب تنفيذ سلسلة من الخطوات المختلفة اعتمادًا على كيفية الحفاظ على الأنسجة. تتضمن الخطوات العامة ما يلي: التثبيت المناسب، واسترجاع المستضد، والحضانة مع الأجسام المضادة الأولية، والحضانة اللاحقة مع الأجسام المضادة الثانوية.
إعداد الأنسجة وتثبيتها
يعتبر إصلاح الأنسجة أمرا ضروريا للحفاظ على بنية الأنسجة وشكل الخلية. إن تركيبة المادة المثبتة، ونسبة المادة المثبتة إلى الأنسجة، ووقت التثبيت سوف تؤثر بشكل كبير على النتائج النهائية. يتم عادة استخدام الفورمالين المخزن المحايد بنسبة 10% كمثبت، ووقت التثبيت عادة يكون 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
شريحة
تم تقطيع عينات الأنسجة باستخدام الميكروتوم. بالنسبة للأنسجة المضمنة في البارافين، فإن سمك 4 ميكرون هو المعيار الشائع، في حين أن الأقسام المجمدة تكون عادة بسمك من 4 إلى 6 ميكرون. سمك المقاطع أمر بالغ الأهمية، وقد يؤثر الاختلاف في السمك على تصور المستضدات، لذا يجب توخي الحذر الشديد عند إجراء الكيمياء المناعية.
استرجاع المستضد
في أقسام الأنسجة الثابتة، يؤدي استرجاع المستضد إلى جعل المواقع المستضدية مرئية للأجسام المضادة. قد تتشكل جسور الميثان أو الروابط المتقاطعة للمجموعات الأمينية أثناء التثبيت، مما يعيق ارتباط الأجسام المضادة. الطريقة الأكثر شيوعًا لاسترجاع المستضد هي استعادة المستضد الكامن عن طريق التسخين والنقع في المحلول العازل.
عينة العلامة
يمكن إنجاز عملية وسم العينات باستخدام الأجسام المضادة الموسومة بمركبات فلورية أو معادن أو إنزيمات للتمييز بشكل فعال بين المستضدات المستهدفة.
طرق الكشف
الطريقة المباشرة هي طريقة تلوين بخطوة واحدة، بينما تتضمن الطريقة غير المباشرة ارتباط جسم مضاد أولي غير مُسمى أولاً بالمستضد المستهدف، يليه إضافة جسم مضاد ثانوي يرتبط بالجسم المضاد الأولي. بسبب تأثير تضخيم الإشارة للطريقة غير المباشرة، فهي تتمتع بحساسية أعلى وتُستخدم على نطاق واسع في الكشف عن مستضدات متعددة.
جزيئات المراسل الكشفيتختلف جزيئات المراسل التي تم اكتشافها وفقًا لطريقة الكشف، وأكثرها شيوعًا هي الكشف الكروموجيني والفلوري. في المناعة النسيجية الكروموجينية، عادة ما ترتبط الأجسام المضادة بإنزيم وتنتج لونًا مرئيًا في وجود ركيزة كروموجينية. في الكشف عن المناعة الفلورية، يتم تمييز الجسم المضاد بالفلوروفور.
التطبيق في الممارسة السريرية
لقد لعبت تقنيات المناعة الكيميائية دورًا كبيرًا في التشخيص الجراحي للأمراض، وخاصة في تحديد النمط المناعي للأورام (على سبيل المثال، تحديد علامات سرطان الثدي). ولها مجموعة واسعة من التطبيقات، بما في ذلك علم الأعصاب وتشخيص الأورام، مما يساعد الباحثين على استكشاف كيفية تصرف البروتينات في أنسجة محددة.
مواجهة التحدي
ولحل هذه المشاكل، يحتاج الباحثون إلى تحسين جودة الأجسام المضادة والتكنولوجيا المستخدمة فيها. خاتمةفي المناعة الكيميائية، هناك عدة خطوات يمكن أن تؤدي إلى مشاكل مختلفة، مثل التلوين المفرط للخلفية أو عدم كفاية وسم المستضد.
المناعة الكيميائية ليست مجرد تقنية كشف فعالة، بل إنها تسمح لنا أيضًا باكتشاف وفهم توزيع البروتينات في الأنسجة البيولوجية. ومع تقدم التكنولوجيا، سيستمر التوسع في تطبيقها في المجالات السريرية والبحثية. هل أنت على استعداد لاستكشاف الآفاق الجديدة التي قد تفتحها هذه التكنولوجيا؟
