Language
Country/Area
No result found
المزيج الرائع من الأجسام المضادة والمستضدات: كيف تعمل الكيمياء المناعية؟
الكيمياء المناعية (IHC) هي تقنية تعتمد على ربط الأجسام المضادة بمستضدات محددة، والتي من خلالها يمكن تأكيد وجود المستضدات في الخلايا والأنسجة. نشأت هذه الطريقة من تقنية التألق المناعي التي طورها علماء مثل ألبرت هيويت كونز في عام 1941، والتي وضعت الأساس للكيمياء المناعية اللاحقة. مع مرور الوقت، تم استخدام الكيمياء المناعية على نطاق واسع في تشخيص السرطان، وخاصة في تحديد مستضدات الورم. ولذلك، فهم إجراءات الكيمياء المناعية أمر بالغ الأهمية للبحوث الطبية والبيولوجية.
في الوقت الحاضر، تعتبر الكيمياء المناعية أداة قوية لاستكشاف العلامات الحيوية، ومن خلال هذه التكنولوجيا، يمكن للباحثين تحديد التعبير وتوطين البروتينات المختلفة في الأنسجة البيولوجية.
تحضير العينة
يتم إجراء الكيمياء المناعية باستخدام عينات الأنسجة التي يتم تثبيتها ودمجها في البارافين، وأحيانًا يتم أيضًا استخدام الأنسجة المحفوظة بالتبريد (المجمدة). تتضمن عملية تحضير العينة التثبيت، واسترجاع المستضد، والحضانة بالأجسام المضادة الأولية، وأخيراً الحضانة بالأجسام المضادة الثانوية. طوال هذه العملية، كل خطوة حاسمة للنتيجة النهائية.
تحضير الأنسجة وتثبيتها
قبل إجراء الكيمياء المناعية، يتم تثبيت الأنسجة للحفاظ على البنية المورفولوجية للأنسجة، ويكون الكاشف المستخدم للتثبيت عادةً 10% من الفورمالين المخزن المؤقت. وسيؤثر وقت التثبيت ونسبة الكاشف بشكل كبير على النتائج التجريبية. بشكل عام، وقت التثبيت هو 24 ساعة، وتتراوح نسبة المثبت إلى الأنسجة من 1:1 إلى 1:20.
شريحة
تم إجراء تقسيم العينات باستخدام المشراح. عادةً ما يتم تقسيم الأنسجة المضمنة بالبرافين بسمك 4 ميكرون، في حين يتم تقطيع الأنسجة بالتبريد بسمك 4 إلى 6 ميكرون. يعد سمك المقاطع عاملاً حاسماً في نجاح الكيمياء المناعية، حيث أن الاختلافات في السمك يمكن أن تؤثر على عرض المستضد الملحوظ.
استرجاع المستضد
يعد استرجاع المستضد ضروريًا لمعظم أقسام الأنسجة الثابتة. والغرض منه هو استعادة الروابط المتقاطعة التي تشكلت أثناء التثبيت لجعل الحاتمة في متناول الجسم المضاد. إحدى الطرق الشائعة لاسترجاع المستضد هي غمر المقاطع في المخزن المؤقت عن طريق التسخين عند درجات حرارة عالية.
إن نجاح استرجاع المستضد غالبا ما يحدد مدى حساسية ونوعية اختبار الكيمياء المناعية.
حظر
في الكيمياء المناعية، يمكن أن يسبب الارتباط غير النوعي للأجسام المضادة مشاكل في تلطيخ الخلفية. لتقليل تلطيخ الخلفية، غالبًا ما يتم تحضين العينات بمصل طبيعي من النوع الذي تم إنتاج الجسم المضاد الثانوي منه.
نموذج العلامة
بعد اكتمال تحضير العينة، يمكن تمييزها بأجسام مضادة موسومة بمركبات الفلورسنت، أو المعادن، أو الإنزيمات. يمكن أن تكون الأجسام المضادة متعددة النسيلة أو وحيدة النسيلة، اعتمادًا على التطبيق المطلوب.
طريقة الكشف
هناك طريقتان رئيسيتان للكشف في الكيمياء المناعية: الطريقة المباشرة والطريقة غير المباشرة. تستخدم الطريقة المباشرة الأجسام المضادة الموسومة للتفاعل مباشرة مع المستضدات الموجودة في الأقسام، بينما تستخدم الطريقة غير المباشرة لتحسين الحساسية وزيادة تأثير تضخيم الإشارة من خلال مزيج من الأجسام المضادة الثانوية.
تتمثل ميزة الطريقة غير المباشرة في أنها تتطلب توليد عدد صغير نسبيًا من الأجسام المضادة الثانوية الموسومة، وهو أمر مفيد جدًا عند وضع العلامات المتعددة.
المراسل
تختلف جزيئات المراسلة المستخدمة في طرق الكشف المختلفة، والجزيئات الشائعة هي اكتشاف مولد الكروم والفلورسنت. في الكيمياء المناعية للكروموجين، يتم دمج الأجسام المضادة مع الإنزيمات وتتفاعل مع الركائز لإنتاج لون مرئي. يستخدم الكشف الفلوري أصباغ الفلورسنت لجعل الجسم المضاد يتوهج لسهولة المراقبة.
تلطيخ العد العكسي
بعد الانتهاء من الصبغ الكيميائي المناعي، غالبًا ما يتم تطبيق صبغ العد العكسي لتوفير التباين والمساعدة في توجيه الأنسجة وتصورها.
في كثير من الحالات، يمكن أن يؤدي تلطيخ العد العكسي إلى تحسين قدرات المراقبة لدى الباحث بشكل كبير.
استكشاف الأخطاء وإصلاحها
في تطبيق الكيمياء المناعية، قد تحدث مشاكل مثل تلطيخ الخلفية المفرط، وتلطيخ المستضد المستهدف الضعيف، والتشوهات، مما سيؤثر على نتائج الاختبار. ولذلك، ينبغي تحسين تقنيات الكيمياء المناعية وضمان جودة الأجسام المضادة.
العلامات المناعية الكيميائية في التشخيص السريري
أصبحت هذه التقنية أداة مهمة في أبحاث علم الأعصاب، ليس فقط لتأكيد التعبير البروتيني، ولكن أيضًا لتحديد الورم. على سبيل المثال، يتم استخدام علامات CD15 وCD30 لمرض هودجكين، في حين يتم استخدام PSA لتشخيص سرطان البروستاتا.
العلاج الموجه
مع تقدم علاجات السرطان، يمكن استخدام الكيمياء المناعية لتقييم الأورام التي من المحتمل أن تستجيب للعلاج عن طريق الكشف عن وجود الأهداف الجزيئية. يمكن تأكيد مستقبلات الهرمونات في بعض الأورام عن طريق الإشارات الكيميائية المناعية، والتي يمكن أن تساعد في تعزيز تنفيذ العلاج الشخصي.
لذلك، فإن الكيمياء المناعية ليست مجرد أداة تشخيصية ولكنها أيضًا عنصر أساسي في عملية العلاج السريري.
باختصار، توفر لنا الكيمياء المناعية أداة قوية لتحديد المؤشرات الحيوية وتوطينها على المستوى الخلوي والأنسجة. ومع ذلك، كيف يمكننا تحسين هذه التكنولوجيا لتقديم خدمة أفضل للمجتمعات الطبية والبحثية في المستقبل؟
