Language
Country/Area
No result found
كيفية استخدام تقنية بحث المستضد لاستعادة قدرات تصور البروتين؟
مع التقدم المستمر للعلوم والتكنولوجيا ، أصبحت تكنولوجيا التصور للبروتين واحدة من الطرق التي لا غنى عنها في الأبحاث الطبية الحيوية.على وجه الخصوص ، تتيح تقنية الكيمياء المناعية (IHC) للباحثين التعرف على البروتينات وتوطينها في الأنسجة البيولوجية من خلال ربط الأجسام المضادة المحددة للمستضدات.هذه التكنولوجيا ذات أهمية كبيرة لتشخيص الخلايا غير الطبيعية ، مثل الأنسجة السرطانية.ومع ذلك ، فإن عملية التصور للبروتينات غالبًا ما تحجبها المستضدات أثناء الشلل والمعالجة.في هذا الوقت ، فإن إدخال تكنولوجيا البحث عن المستضد مهم بشكل خاص.
ضرورة تقنية البحث في المستضد
تم تصميم تقنيات البحث عن المستضد للتغيرات الهيكلية التي تحدث أثناء تثبيت العينات ، والتي يمكن أن تؤدي إلى إخفاء مواقع المستضد.عادةً ما تنتج العينات الثابتة تفاعلات متقاطعة من خلال المثبتات مثل الفورمالديهايد ، مما تسبب في غموض حلقات المستضد.باستخدام تقنية البحث عن المستضد ، يمكننا استعادة هذه المستضدات المخفية ، وبالتالي تحسين تصور البروتينات.
الطريقة الأكثر شيوعًا لاسترجاع المستضد هي علاج درجات الحرارة العالية ، وعادة ما تنقع أقسام في المخزن المؤقت ، والتي يمكن أن تدمر الهيكل المتشابك واستعادة إمكانية الوصول إلى موقع المستضد.
عملية إعداد العينة
عند أداء الكيمياء المناعية ، هناك حاجة إلى سلسلة من خطوات تحضير العينة ، والتي تعد حاسمة لنتيجة تلطيخ النهائي.تتضمن الإجراءات الأساسية عادة التثبيت ، والقسمة ، واسترجاع المستضد ، والحضانة مع الأجسام المضادة ، إلخ.
التثبيت والتقطيع
التثبيت خطوة أساسية في الحفاظ على مورفولوجيا الأنسجة ، وعادة ما يتم استخدام الفورمالدهيد المحايدة المحايدة المحايدة كمثبت.بعد اكتمال التثبيت ، يجب تقطيع العينة ، عادةً بسمك 4-6 ميكرون ، مما قد يضمن عرضًا كافياً للمستضد.في الوقت نفسه ، يجب إزالة البارافين قبل إجراء التقسيم.
طرق خاصة للبحث عن المستضد
تقنيات البحث المستضد عادة ما تعتمد على الطرق الفيزيائية أو الكيميائية لتدمير الهياكل الثابتة والترابط.هناك العديد من الطرق لعلاج درجات الحرارة المرتفعة ، وتشمل التقنيات الشائعة تسخين الميكروويف وحمامات الماء والبخار المضغوط.يمكن أن يؤدي البحث عن المستضد أيضًا إلى زيادة تحسين قوة الإشارة للأقسام الثابتة مع الإيثانول أو الأسيتون.
العلاج ضد ربط الأجسام المضادة غير المحددة هو أيضًا أمر بالغ الأهمية ، ويمكن تقليل تلطيخ الخلفية بشكل فعال باستخدام المصل العادي أو العازلة المهنية.
الصباغة والتصور
بعد اكتمال عملية إعداد العينة ، فإن الخطوة التالية هي إجراء تلطيخ العينة.تتطلب هذه العملية عادةً استخدام الأجسام المضادة المسمى مع مراسلين أو إنزيمات جزيء صغير لتسمية مستضد الاهتمام على وجه التحديد.يمكن لهذه العلامات أن تجعل المستضد مرئيًا تحت المجهر.اعتمادًا على طرق الكشف المختلفة ، يمكن أن يكون الجسم المضاد أحادي النسيلة أو متعددة النسيلة ، وعادة ما يستهدف الأول حلقًا واحدًا لمستضد معين ، ويمكن لهذا الأخير التعرف على حلقات متعددة.
تحديد طريقة الكشف
تتضمن طرق الكشف الرئيسية الخمسة الكشف المباشر والاكتشاف غير المباشر.الكشف المباشر بسيط نسبيًا ويمكن تنفيذه باستخدام جسم مضاد واحد فقط.ومع ذلك ، فإن طريقة الكشف غير المباشر أكثر حساسية لأنها تتيح الأجسام المضادة الثانوية المتعددة المسمى بالربط بالأجسام المضادة الأولية ، ويحسن تأثير تضخيم الإشارة دقة الكشف.
الاختبار والتحليل الحسابي
بعد تلطيخ ، من الضروري مراقبة أداء المستضد تحت المجهر.يمكن أن يؤدي استخدام مؤشرات تلطيخ مثل طريقة المسح (EDX) إلى إجراء تحليل نصفوي وكمي لشدة الإشارة ، مما يجعل مقارنة أنماط تعبير البروتين أكثر وضوحًا.
خريطة تعبير البروتين
يمكن للباحثين استخدام الكيمياء المناعية لتعيين تعبير البروتين في الأنسجة الطبيعية والآفة.تجمع هذه التكنولوجيا بين تقنية الأنسجة الميكروية ويمكنها عرض أنماط تعبير البروتين بشكل فعال في أنواع الأنسجة المختلفة.توفر قاعدة بيانات خريطة البروتين البشري منصة ممتازة لمساعدة الباحثين على فهم كيفية توزيع البروتينات في أنسجة مختلفة.
نظرًا لأهمية الكيمياء المناعية في علم الإكلينيكي ، فإنه لا يمكن أن يساعد فقط في تشخيص السرطان ، بل يوفر أيضًا أساسًا مهمًا للعلاج اللاحق.على هذه الخلفية ، لا يسعنا إلا أن نفكر في التقنيات الجديدة التي ستكون متوفرة في المستقبل والتي ستتيح لنا أن يكون لدينا فهم أعمق لوظائف ووظائف البروتينات؟
