A. Lamy

Clinical relevance of KRAS mutation detection in metastatic colorectal cancer treated by Cetuximab plus chemotherapy.

The predictive value of KRAS mutation in metastatic colorectal cancer (MCRC) patients treated with cetuximab plus chemotherapy has recently been suggested. In our study, 59 patients with a chemotherapy-refractory MCRC treated with cetuximab plus chemotherapy were included and clinical response was evaluated according to response evaluation criteria in solid tumours (RECIST). Tumours were screened for KRAS mutations using first direct sequencing, then two sensitive methods based on SNaPshot and PCR-ligase chain reaction (LCR) assays. Clinical response was evaluated according to gene mutations using the Fisher exact test. Times to progression (TTP) were calculated using the Kaplan–Meier method and compared with log-rank test. A KRAS mutation was detected in 22 out of 59 tumours and, in six cases, was missed by sequencing analysis but detected using the SNaPshot and PCR-LCR assays. Remarkably, no KRAS mutation was found in the 12 patients with clinical response. KRAS mutation was associated with disease progression (P=0.0005) and TTP was significantly decreased in mutated KRAS patients (3 vs 5.5 months, P=0.015). Our study confirms that KRAS mutation is highly predictive of a non-response to cetuximab plus chemotherapy in MCRC and highlights the need to use sensitive molecular methods, such as SNaPshot or PCR-LCR assays, to ensure an efficient mutation detection.

TP53 mutations predict disease control in metastatic colorectal cancer treated with cetuximab-based chemotherapy

Recent studies have suggested that activation of the EGFR pathway leads to malignant transformation only if the p53 protein is inactivated. Therefore, we evaluated the impact of TP53 mutations on cetuximab-based chemotherapy (CT) sensitivity in combination with KRAS mutations that have been associated with cetuximab resistance. KRAS and TP53 status were assessed in tumours from 64 metastatic colorectal cancer patients treated with cetuximab-based CT and correlated to clinical response using the Fishers exact test. Times to progression (TTPs) according to gene status were calculated using the Kaplan–Meier method and compared with log-rank test. TP53 mutations were found in 41 patients and were significantly associated with controlled disease (CD), as defined as complete response, partial response or stable disease (P=0.037) and higher TTP (20 vs 12 weeks, P=0.004). Remarkably, in the subgroup of 46 patients without KRAS mutation, but not in patients with KRAS mutation, TP53 mutations were also associated with CD (P=0.008) and higher TTP (24 vs 12 weeks, P=0.0007). This study suggests that TP53 mutations are predictive of cetuximab sensitivity, particularly in patients without KRAS mutation, and that TP53 genotyping could have a clinical interest to select patients who should benefit from cetuximab-based CT.

Genetic variations of the A13/A14 repeat located within the EGFR 3′ untranslated region have no oncogenic effect in patients with colorectal cancer

BackgroundThe EGFR 3′ untranslated region (UTR) harbors a polyadenine repeat which is polymorphic (A13/A14) and undergoes somatic deletions in microsatellite instability (MSI) colorectal cancer (CRC). These mutations could be oncogenic in colorectal tissue since they were shown to result into increased EGFR mRNA stability in CRC cell lines.MethodsFirst, we determined in a case control study including 429 CRC patients corresponding to different groups selected or not on age of tumor onset and/or familial history and/or MSI, whether or not, the germline EGFR A13/A14 polymorphism constitutes a genetic risk factor for CRC; second, we investigated the frequency of somatic mutations of this repeat in 179 CRC and their impact on EGFR expression.ResultsNo statistically significant difference in allelic frequencies of the EGFR polyA repeat polymorphism was observed between CRC patients and controls. Somatic mutations affecting the EGFR 3′UTR polyA tract were detected in 47/80 (58.8%) MSI CRC versus 0/99 microsatellite stable (MSS) tumors. Comparative analysis in 21 CRC samples of EGFR expression, between tumor and non malignant tissues, using two independent methods showed that somatic mutations of the EGFR polyA repeat did not result into an EGFR mRNA increase.ConclusionGermline and somatic genetic variations occurring within the EGFR 3′ UTR polyA tract have no impact on CRC genetic risk and EGFR expression, respectively. Genotyping of the EGFR polyA tract has no clinical utility to identify patients with a high risk for CRC or patients who could benefit from anti-EGFR antibodies.

Pathologie moléculaire tumorale : à propos du génotypage de KRAS dans les carcinomes colorectaux

Resume La pathologie moleculaire (PM) est une branche emergeante de l’anatomie et cytologie pathologiques. La mise en place des techniques de PM dans les laboratoires de pathologie a ete initialement facilitee par la proximite d’un laboratoire de genetique ou d’une unite de recherche. En effet, la reussite de ces transferts technologiques a ete en partie liee aux fortes interactions existantes entre les pathologistes et les geneticiens/biologistes moleculaires. La complementarite des pathologistes (maitrisant la conservation et l’identification des tissus) et des geneticiens (maitrisant les outils de BM) a permis ainsi de garantir la qualite des examens effectues a partir des tissus. Cependant, c’est avec le genotypage de KRAS effectue « a grande echelle » pour tous les carcinomes colorectaux metastatiques que la PM est apparu comme un outil indispensable a la pratique de la pathologie et egalement comme une evolution irremediable de notre discipline.

CO.21 Intérêt de la recherche des mutations de TP53 chez les patients sans mutation de KRAS traités par cetuximab plus chimiothérapie pour un cancer colorectal métastatique

Introduction Les mutations de KRAS ont ete identifiees comme marqueurs de resistance aux anticorps monoclonaux anti-EGFR ( Epidermal Growth Factor Receptor ) dans le cancer colorectal metastatique (CCRM). Par ailleurs, l’efficacite de ces anticorps necessite que l’activation de la voie de l’EGFR contribue a la transformation maligne. Des etudes recentes suggerent que p53 agit comme un frein sur la voie de l’EGFR et que cette voie ne contribue a la carcinogenese que si p53 est inactivee. Cette observation suggere ainsi que les tumeurs comportant une mutation de TP53 seraient plus sensibles aux anticorps anti-EGFR. A notre connaissance, cette hypothese n’a jamais ete evaluee dans le CCRM [1, 2]. But Nous avons evalue l’impact des mutations somatiques de TP53 en combinaison avec les mutations de KRAS sur l’evolution clinique des patients traites par une chimiotherapie a base de cetuximab pour un CCRM. Materiels et Methodes Les tumeurs de 64 patients ont ete etudiees. Les mutations ont ete recherchees par sequencage direct des exons 5 a 8 pour TP53 et par la technique du SnaPshot pour KRAS. La reponse clinique a ete correlee aux statuts mutationnels par le test de Fisher. Le controle de la maladie etait defini par une reponse complete, partielle ou une stabilite. Les survies sans progression ont ete calculees selon la methode de Kaplan Meier et comparees par le test du log rank. Les facteurs predictifs cliniques et biologiques de survie sans progression ont ete recherches par une analyse multivariee selon le modele de Cox. Resultats Une mutation de KRAS a ete retrouvee chez 18 patients (28 %). Ces mutations etaient significativement associees a une progression de la maladie (pxa0=xa00,044). La survie sans progression des patients mutes pour KRAS etait significativement inferieure a celle des patients non mutes (12 vs 20 semaines, pxa0=xa00,034). Une mutation de TP53 a ete retrouvee chez 29/39 (74 %) patients avec une maladie controlee et chez 12/25 (48 %) patients avec une maladie en progression. Sur la population totale de l’etude, les mutations de TP53 etaient significativement associees au controle de la maladie (pxa0=xa00,037), et la survie sans progression etait significativement augmentee chez les patients presentant une mutation de TP53 (20 νs 12 semaines, pxa0=xa00,004). Chez les 46 patients sans mutation de KRAS, les mutations de TP53 etaient egalement significativement associees au controle de la maladie (pxa0=xa00,008) et la survie sans progression des patients mutes pour TP53 etait significativement superieure a celle des patients non mutes (24 νs 12 semaines, pxa0=xa00,0007). En analyse multivariee, les mutations de TP53 et KRAS ont ete identifiees comme les deux seuls facteurs independants predictifs de survie sans progression (HRxa0=xa01,99, IC : 1,09 - 3,63, pxa0=xa00,024 et HRxa0=xa00,48, IC : 0,25 - 0,94, pxa0=xa00,032 respectivement). Conclusion Notre etude suggere que chez les patients presentant un CCRM, les mutations de TP53 sont predictives d’une plus grande sensibilite au cetuximab, et en particulier en l’absence de mutation de KRAS. Le genotypage de TP53 pourrait ainsi avoir une valeur additionnelle chez les patients sans mutation de KRAS pour optimiser la selection des patients susceptibles de beneficier des therapies ciblees anti-EGFR. Remerciements, financements, autres Ce travail a recu le soutien financier de l’Association pour la Recherche sur le Cancer.

CO.20 Impact clinique des polymorphismes des récepteurs FcγRIIa/FcγRIIIa et des mutations KRAS dans les cancers colorectaux métastatiques traités par cetuximab et irinotecan

Introduction Le cetuximab est un anticorps chimerique monoclonal de type IgG1 dirige contre le recepteur du facteur de croissance epidermique (EGFR). Il est efficace dans les cancers colorectaux metastatiques (CCRm) refractaires a l’irinotecan et non mutes pour KRAS . Le cetuximab pourrait aussi exercer son activite antitumorale par des mecanismes de type cytotoxicite cellulaire dependante des anticorps (ADCC). Ce phenomene peut induire la mort des cellules tumorales par interaction entre le fragment Fc de l’anticorps lie a la cellule tumorale et les recepteurs Fc des cellules effectrices du systeme immunitaire. Les recepteurs FcγRIIa et FcγRIIIa presentent des polymorphismes constitutionnels (FcγRIIa-H131R et FcγRIIIa-V158F) qui pourraient affecter leur affinite avec les IgG1. De tels polymorphismes ont un impact sur la reponse et la survie de patients atteints de lymphome folliculaire et de cancer du sein metastatique, respectivement traites par rituximab et trastuzumab, anticorps therapeutiques egalement de type IgG1. Le but de l’etude etait de correler le statut KRAS et les polymorphismes de FcγRIIa et FcγRIIIa au taux de reponse et a la survie sans progression (SSP) des patients atteints de CCRm traites par cetuximab et irinotecan, initialement refractaires a l’irinotecan. Patients et Methodes Les ADN tumoraux et normaux, extraits a partir de materiel fixe et inclus en paraffine de 69 patients atteints de CCRm, ont respectivement fait l’objet de recherche de mutations de KRAS par technique SNaPshot apres PCR de l’exon 2 et des polymorphismes des recepteurs FcγRIIa et FcγRIIIa par sequencage direct et PCR multiplex. Resultats Le statut KRAS mute, detecte chez 39 % des patients, etait associe avec un plus faible taux de reponse (4 % chez les patients KRAS mute vs 27 % chez les patients KRAS non mute, pxa0=xa00,021) et a une SSP plus courte (3 νs 5,3 mois, pxa0=xa00,021). Les patients avec les genotypes FcγRIIa-131HH et/ ou FcγRIIIa-158VV (32 % des cas) avaient une SSP plus longue que ceux qui presentaient les deux alleles 131R et 158F (5,5 νs 3 mois, pxa0=xa00,005). Cette difference restait significative chez les patients mutes pour KRAS . En analyse multivariee, le statut KRAS et la combinaison des genotypes constituaient des facteurs independants pour la SSP. L’analyse combinee de ces parametres montrait que le taux de reponse et la SSP augmentaient avec le nombre de facteurs favorables ( KRAS non mute et genotypes FcγRIIa-131HH et/ou FcγRIIIa-158VV). Conclusion Notre etude confirme la valeur predictive du statut KRAS chez les patients atteints de CCRm traites par cetuximab et irinotecan. Elle montre un impact favorable de la combinaison des genotypes FcγRIIa-131HH et/ou FcγRIIIa-158VV sur la SSP dans la meme population de patients. Un role important de l’ADCC dans l’activite antitumorale du cetuximab peut etre suggere notamment parce que ces polymorphisms restent favorables dans le groupe de CCRm mutes pour KRAS , ou la voie de l’EGFR est constitutivement activee. Les polymorphismes des recepteurs FcγRIIa / FcγRIIIa pourrait ainsi s’integrer a de nouveaux facteurs predictifs.