A. Tran

Importance of Wetlands Management for West Nile Virus Circulation Risk, Camargue, Southern France

To assess environmental and horse-level risk factors associated with West Nile Virus (WNV) circulation in Camargue, Southern France, a serosurvey was conducted on non-vaccinated horses (n = 1159 from 134 stables) in 2007 and 2008. Fifteen Landsat images were examined to quantify areas with open water and flooded vegetation around sampled horses. Mean percentages of areas of open water and flooded vegetation, as well as variations in these percentages between 3 periods (November to February = NOT, March to July = END and August to October = EPI), were calculated for buffers of 2 km radius around the stables. Results of the final logistic regression showed that the risk of WNV seropositivity in horses decreased with their date of acquisition and age. Results also demonstrated the significant role of environmental variables. Horse serological status was associated with variations of open water areas between the NOT (November to February) and END (March to July) periods, as well as between END and EPI (August to October). WNV spillover was found more intense in areas where water level decreased strongly from winter to spring and from spring to summer.

Intrahepatic CD4+ T-cell apoptosis is related to METAVIR score in patients with chronic hepatitis C virus

Hepatitis C virus (HCV) infection leads to liver injury, which is thought to be immune‐mediated. Apoptosis of hepatic T cells could influence histological damage. We quantified peripheral and intrahepatic T‐cell apoptosis in 28 patients with chronic hepatitis C by using cytofluorometric techniques. METAVIR score and HCV plasma viral load were determined. Six liver biopsies, obtained from controls without chronic hepatitis during hepatobiliary surgery, served as controls. In patients, liver T‐cell apoptosis was upregulated compared to peripheral T cells: 35 versus 7% for CD4+ and 56 versus 13% for CD8+ T cells (Pu2003<u20030.001). Liver T‐cell apoptosis levels from patients were increased compared to controls for both CD4+ (Pu2003=u20030.041) and CD8+ T cells (Pu2003=u20030.007). Nine patients exhibiting METAVIR scores A and F ≤1 showed higher intrahepatic CD4+ T‐cell apoptosis compared to the 19 patients with a higher METAVIR score (Pu2003=u20030.001) and both histological activity and fibrosis were related to apoptosis level. There was also an inverse relationship between the level of intrahepatic CD8+ T‐cell apoptosis and serum transaminase activity (Pu2003=u20030.023). Our study shows immune compartmentalization, suggesting that the study of peripheral blood lymphocytes may not be fully relevant to the pathophysiology of HCV hepatitis, and that the severity of liver injury is inversely correlated with intrahepatic CD4+ T‐cell apoptosis.

1274 MORBIDLY OBESE PATIENTS WITH ALANINE AMINOTRANSFERASE (ALT) LEVEL BELOW THE THRESHOLD 0.5 TIMES THE UPPER LIMIT OF NORMAL HAVE NO NASH

Background: The natural course of Nonalcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD) and Nonalcoholic steatohepatitis (NASH) towards cirrhosis or/and liver-cancer is unclear. Aims and Methods: To identify predictor factors for progressive outcome we retrospectively revised our liver biopsy reports done from 2000–2011 in Liver Unit, Holy Family Hospital, Nazareth. We included tested cases with histological documented NAFLD at age over 18 years. Cases with metabolic syndrome or other etiologies for liver diseases were excluded. Clinical characterizations (age, gender, BMI), Histology severity (steatosis in percentage, necroinflammatory activity and fibrosis scoring) and serum levels of vitamin D, liver enzymes (ALT, AST), insulin resistance (serum fasting-insulin levels, HbA1c and HOMA-IR score), lipid profile (TG, HDL and LDL) and CRP were evaluated. For in-vitro settings, lymphocytes were obtained from donors of low and normal levels of vitamin D. These lymphocytes were analyzed for their NK activity (CD107a) and phagocytosis with human hepatic stellate cell line (LX2) by the flow-cytometry. Results: 72 cases fulfill inclusion/exclusion criteria, 44 males, mean age at biopsy timing was 39.4±10.6 years and mean BMI 29±2.8. None of the patients had cirrhosis as Fibrosis scores were up to F3 and activity up to A3. Normal serum vitamin-D levels were found in 15 (21%, 9 men), insufficient levels found in 21 (29.1%, 14 men) and deficient levels in 36 cases (49.9%, 21 men). Lower serum vitamin-D levels significantly correlated with decreased hepatic fat-content but increased liver-injury (CRP, fibrosis-scoring and necro-inflammatory-activity), insulin-resistance (serum insulin levels, HbA1c and HOMA-IR score) and CRP. CRP levels had a significant positive correlation with LDL, CRP, HBA1C, Insulin and HOMA-score. BMI had a significant positive correlation with AST, Insulin and liver fat content. Compared to normal vitamin-D levels with mild liver injury (A1/F1), peripheral blood lymphocytes from low vitamin-D donors increased the in-vitro activation of hepaticstellate cells. In additions, NK cells from low vitamin-D donors showed low count with increased in their activity accompanied with decreased phagocytosis suggesting impairment of their killing effects. In conclusion: Low vitamin-D serum levels predict severe insulin-resistant and liver-injury but decreased hepatic content. Immunological explanations are suggested as a mechanism via immune mechanism of NK-impairment.

Influence of water on the circulation of the West Nile Virus in horses in Southern France

Background West Nile Virus (WNV) affects humans and horses, potentially causing severe neurological manifestations. Recent outbreaks of West Nile fever in horses were reported in Camargue (2000, 2004), Var (2003) and Pyrenees Orientales (2006). The circulation of this virus is strongly influenced by environmental conditions. This study aimed at explaining the circulation of WNV in horses by quantifying water bodies around equine stables using Landsat images.

378 HUMAN SERUM METABOLIC PROFILING REVEALS NOVEL BIOMARKERS ASSOCIATED WITH NAFLD PROGRESSION

alcohol intake, ferritin and transferrin saturation. Sixty-three % of patients with hepatocellular siderosis were positive for at least one of these genetic variants. The beta-thalassemic trait had the highest specificity (93.8%; prevalence 31.2% in those with parenchymal vs. 6.2% in those without parenchymal siderosis) for predominantly parenchymal iron accumulation, and was the only genetic factor independently associated with the fibrosis >1 (OR 2.122; 95%CI 1.280–3.462). The IVS1–24 ferroportin polymorphism and the PiZ and PiS AAT variants did not influence the presence and pattern of siderosis or liver fibrosis. Conclusions: In patients with NAFLD, predominantly hepatocellular iron deposition is often related to genetic factors. Beta-globin mutations predispose to parenchymal iron accumulation and progressive liver fibrosis.

O21 Expression différentielle de gènes de l’inflammation et de L’immunité spécifiquement associés à l’obésité et à la NASH dans le foie des patients obèses morbides

Introduction Les modifications d’expression hepatique des genes de l’inflammation et de l’immunite au cours de la progression du foie normal vers la steatose et ensuite vers la NASH sont mal caracterisees. Notre but a ete d’identifier des genes de l’inflammation et de l’immunite dont l’expression est specifiquement alteree par l’obesite et la NASH dans le foie de patients obeses morbides. Patients et Methodes L’expression de 222 genes de l’inflammation et de l’immunite a ete evaluee par PCR quantitative en temps reel dans le foie de 3 groupes de patients obeses morbides : (1) patients sans atteintes hepatiques (NAS = 0, n = 6), (2) patients presentant une steatose severe (NAS = 3, n = 6), (3) patients presentant une NASH associee avec une steatose severe (NAS≥5, n = 6) et dans le foie de sujets controles (n = 5). Resultats Parmi les 222 genes de l’inflammation et de l’immunite etudies, l’expression hepatique de 58 genes etait augmentee chez les patients NASH. Les principaux changements ont lieu sur les genes codant pour a) les chimiokines et leurs recepteurs impliques dans le recrutement des leucocytes (CXCL 1, 3, 8–11 ; CXCR 1–2, CCL 2–5 ; CCR5), b) les CD et cytokines impliques dans l’activation des lymphocytes vers un phenotype Th1 (IFNγ, TNFα, IL1β, IL6, CD 18, 28, 54, 80, 86) mais aussi c) les semaphorines immunes (SEMA 4A, 7A, 4D). 47 autres genes de l’inflammation et de l’immunite sont deja augmentes chez les patients obeses independamment des complications hepatiques (e.g. CRP ; TLR2, 4, 6 ; CD14). Conclusion Nous avons identifie des genes de l’inflammation et de l’immunite dont l’expression est deja modifiee dans le foie des patients obeses morbides ne presentant aucun signe histologique d’inflammation, suggerant que des facteurs extra hepatiques (adipokines, FFA, LPS) puissent modifier les fonctions hepatiques. Par ailleurs, la NASH est caracterisee par une signature genique specifique independante de l’obesite et de la steatose. Ces resultats pourraient aider a mieux comprendre la pathogenese des steatopathies metaboliques et permettre d’identifier des cibles therapeutiques pour la prise en charge des complications hepatiques associees a l’obesite.

P220 Étude de l’autophagie dans la mort cellulaire hépatocytaire in vitro et in vivo

Introduction L’obesite s’accompagne de nombreuses complications dont les complications hepatiques comprenant la steatose, l’inflammation et la mort hepatocytaire. Les mecanismes moleculaires responsables de cette apoptose hepatocytaire sont encore mal definis. Materiels et methodes La mort cellulaire a ete etudiee par cytometrie en flux. L’expression des genes a ete mesuree par PCR quantitative en temps reel. Les modeles d’etude sont des lignees hepatocytaires, des cultures primaires d’hepatocytes humains et des biopsies hepatiques de souris et de patients obeses morbides. Resultats Dans cette etude, nous avons pu mettre en evidence que le traitement de lignees hepatocytaires ou de cultures primaires d’hepatocytes humains par un acide gras sature (le palmitate) conduisait a une activation de l’autophagie, evaluee par une accumulation de la proteine LC3-II. Ce mecanisme n’est pas induit lors d’un traitement par un acide gras insature (l’oleate). L’activation de l’autophagie est directement associee a l’induction de l’apoptose hepatocytaire (plus de 50 % de cellules mortes a 16 heures). Cette activation de l’autophagie et de l’apoptose est totalement prevenue par le co-traitement de ces hepatocytes avec un melange palmitate/oleate (1/1). Par contre, un traitement par la bafilomycine, un inhibiteur specifique de l’autophagie, augmente de 30 % la mort cellulaire induite par le palmitate. Enfin, nous avons pu mettre en evidence une augmentation de l’expression genique des ATG dans le foie de souris ou patients avec une steatose hepatique severe par rapport aux souris controles et patients obeses sans atteintes hepatiques. Conclusion Ces resultats indiquent que l’activation de l’autophagie a un role protecteur sur l’apoptose hepatocytaire induit par les acides gras satures. Ce mecanisme de protection est present dans les foies steatosiques mais son niveau d’activation pourrait etre insuffisant pour prevenir l’apoptose hepatocytaire. Une activation de l’autophagie pourrait constituer une nouvelle cible therapeutique des complications hepatiques de l’obesite.

P221 L’élévation de l’expression de l’ostéopontine dans l’obésité morbide est corrélée à l’accumulation des macrophages dans le tissu adipeux et à la stéatose hépatique

Introduction Losteopontine (OPN) joue un role important dans le developpement de linsulinoresistance et des complications hepatiques dans les modeles murins. Le but de letude etait de determiner le profil dexpression dOPN et de son recepteur CD44 chez les patients obeses en fonction de linsulinoresistance et de la steatose hepatique. Patients et methodes Lexpression dOPN et CD44 a ete etudiee par PCR quantitative en temps reel chez 52 patients obeses morbides. Les etudes in vitro ont ete realisees sur des cellules HepG2. Resultats Lexpression hepatique dOPN et CD44 est positivement correlee a la steatose hepatique et a linsulinoresistance (HOMA-IR) chez les patients obeses. Cette augmentation de lexpression dOPN pourrait etre due a la steatose car laccumulation de triglycerides dans les cellules HepG2 stimule lexpression dOPN. En revanche, lexpression dOPN dans le tissu adipeux (TA) est augmentee de facon independante de linsulinoresistance et de la steatose hepatique. Lexpression dOPN dans le TA est correlee a linfiltration des macrophages et ces deux phenomenes sont reverses par la perte de poids deux ans apres chirurgie bariatrique. Le taux circulant dOPN est augmente chez les patients obeses mais nest pas correle a la steatose hepatique et lOPN semble ne pas etre secretee par le TA. Par contre, la perte de poids un an apres une chirurgie bariatrique saccompagne dun doublement du taux circulant dOPN. Conclusion Ces resultats indiquent que la faible elevation du taux circulant dOPN chez les patients obeses ne reflete pas la forte induction de son expression dans le foie et le TA, suggerant un effet local de lOPN. Dans le TA, lOPN pourrait favoriser linfiltration des macrophages et, dans le foie, laugmentation de son expression au cours de la steatose pourrait participer a la progression des complications hepatiques.

O39 La C-Réactive Protéine induit une insulinorésistance dans les hépatocytes et les adipocytes humains

Introduction La C-Reactive Proteine (CRP), marqueur non specifique de linflammation, est elevee chez les sujets obeses morbides (∼ 10 mg/l). Nous avons evalue le role de la production locale de CRP sur la voie de signalisation de linsuline dans une lignee hepatocytaire humaine (cellules HepG2) et des adipocytes humains. Patients et methodes Les adipocytes humains proviennent de la differenciation in vitro de pre-adipocytes de tissu adipeux sous-cutane et sont utilises pour la mesure du transport de glucose. Des biopsies de tissu adipeux humain ont servi a la mesure de la lipolyse. Les cellules HepG2 et les adipocytes humains sont incubes avec ou sans CRP avant mesure du niveau dexpression dIRS1, IRS2 et SOCS3 par PCR en temps reel et dIRS1 par Western blot. Resultats Un traitement des cellules HepG2 par la CRP (10 mg/l pendant 24 h) induit une augmentation de lexpression de SOCS3 (proteine qui altere la voie de signalisation de linsuline par interaction avec le recepteur de linsuline et les proteines IRSs) et une diminution dIRS1 et dIRS2. Dans des explants de tissu adipeux humain, la CRP induit une forte augmentation de la secretion de glycerol. Dans les adipocytes humains, la CRP (10 mg/l pendant 48 h) diminue fortement lactivation de la PKB et du transport de glucose en reponse a linsuline, alors quune faible concentration de CRP (1 mg/l) etait sans effet. De plus, la CRP (10 mg/l) diminue fortement lexpression de la proteine IRS1 dans les adipocytes. Conclusion Nos donnees montrent pour la premiere fois que la CRP induit in vitro une insulinoresistance dans les hepatocytes et les adipocytes humains. Laugmentation de la lipolyse dans les adipocytes humains qui augmente le flux dacides gras vers le foie et le developpement de linsulinoresistance pourraient favoriser le developpement de la steatose hepatique chez les patients obeses morbides.

La sequence d’IRM en phase et en opposition de phase permet-elle le diagnostic d’adenome hepatique

Objectifs Evaluer les performances de la sequence d’IRM en phase et en opposition de phase pour etablir un diagnostic d’adenome hepatique. Materiels et methodes Etude prospective, monocentrique, ayant inclus 169 lesions tissulaires hepatiques consecutives, mesurant plus de 10 mm de diametre et pour lesquelles un diagnostic d’adenome (n = 15), d’autre lesion benigne (n = 63) ou de lesion maligne (n = 91) etait etabli. Pour ces patients etait realisee une IRM (Philips 1 Tesla) comprenant une sequence en echo de gradient ponderee en Tl (TR = 275 msec), en phase (TE = 6,7 msec) et en opposition de phase (TE = 3,5 msec). Le signal tumoral etait mesure en phase (SEP) et en opposition de phase (SOP). Resultats SOP/SEP etait signifcativement plus bas pour les adenomes (0,66±0,17) comparativement aux autres tumeurs benignes (0,98±0,08) ou aux tumeurs malignes (0,99±0,ll). Pour un seuil SOP/SEP = 0,9, la sensibilite, la specificite et l’aire sous la courbe ROC pour le diagnostic d’adenome etaient egaux respectivement a 100 %, 92,9 % et 0,979. Conclusion La sequence en phase et en opposition de phase, en detectant le contingent tumoral graisseux, permet a elle seule de porter un diagnostic d’adenome hepatique avec une sensibilite et specificite tres elevees.