Fernando Matamala

Características Morfológicas y Morfométricas de la Placenta de Término, en Recién Nacidos Pequeños para la Edad Gestacional (PEG) en la Ciudad de Temuco-Chile

El metabolismo placentario, el intercambio de sustancias y la produccion de hormonas son funciones vitales de la placenta para mantener y promover el desarrollo normal del feto. Existen factores de riesgo que alteran este patron en el caso del retardo del crecimiento intrauterino, cuyo resultado sera un recien nacido (RN) pequeno para la edad gestacional (PEG) que presentara una mayor morbilidad, crecimiento fisico e intelectual comprometido y una mayor probabilidad de desarrollar durante la vida adulta diferentes patologias. Los objetivos del presente trabajo son: 1. Reconocer las diferencias en los parametros morfometricos, como el area de las vellosidades, el area de los vasos, el numero de vasos y el area del sinciciotrofoblasto de las placentas de PEG en relacion con placentas de recien nacidos AEG y 2. Relacionar el diagnostico neonatal de PEG con las caracteristicas morfometricas. Se utilizaron 25 placentas de termino (37-42 semanas), 12 de recien nacidos adecuados a la edad gestacional (AEG), y 13 de recien nacidos pequenos para la edad gestacional (PEG). Las muestras fueron obtenidas de la maternidad del Hospital Hernan Henriquez Aravena de Temuco, IX Region Chile. De cada placenta se tomaron dos segmentos pericordonales, desde la placa subcorial hasta la placa basal y luego fueron fijadas en formalina tamponada al 10%. Las tecnicas histologicas utilizadas fueron H-E azul de Alcian, Tricromico de Masson, PAS-Hematoxilina y PAS-Diastasa. El area de las vellosidades mostraron diferencias significativas entre el grupo control (AEG) y el grupo PEG con p = 0,0194. En el grupo de PEG el area de los vasos fue significativamente mayor, con un valor de 234,05 |i,m2 en comparacion con el grupo control cuyo promedio fue de 150.99 |lm2 (p = 0,0001). El numero de vasos sanguineos por vellosidad libre no mostro diferencias significativas. En relacion con el area del sinciciotrofoblasto la diferencia no resulto ser significativamente diferente (p = 0,1410). Como conclusion se determino que las placentas de recien nacidos PEG presentaron diferencias significativas a nivel del area de los vasos y del area de las vellosidades coriales libres, en relacion con las placentas de AEG.

Tratamiento con Ultrasonido Continuo de Alta Intensidad en Nervios Isquiáticos de Rata (Sprague Dawley) Lesionados por Compresión

Actualmente las patologias compresivas de nervios espinales son de alta incidencia. Como una forma de contribuir con fundamentos morfologicos a la aplicacion de ultrasonido terapeutico se realizo la presente experiencia, que se refiere a la reparacion de los nervios espinales luego de una injuria compresiva. Para esto se utilizaron 9 ratas Sprague Dawley las cuales fueron separadas en tres grupos con 3 ratas cada uno: A) control sano, B) control lesionado y C) aplicacion de ultrasonido terapeutico de 1w/cm2. Las ratas de los grupos B y C fueron anestesiadas y se les aislo quirurgicamente el nervio isquiatico, el cual fue pinzado durante 45 segundos con una fuerza constante de 40N. La compresion se realizo a 10mm sobre su bifurcacion distal, luego se desinfecto y suturo. 24 horas despues de la compresion las ratas del grupo C fueron irradiadas con un equipo de ultrasonido terapeutico, utilizando 1w/cm2 de intensidad con frecuencia de 3 MHZ y un cabezal de 0,5cm2, durante 1 minuto y en 10 dias seguidos. 28 dias despues de la irradiacion se extrajeron los nervios isquiaticos y fueron sometidos a tecnicas histologicas de rutina con tincion de HE y VG. Se realizo el diagnostico histopatologico y la morfometria donde se midio: grosor del perineuro, perimetro de los nucleos de neurilemocitos, perimetro del axon mielinico, perimetro de la mielina, ancho del nucleo del fibroblastocito y largo del nucleo del fibroblastocito. Los resultados permiten concluir que el ultrasonido de modalidad continua estimula la regeneracion del nervio espinal lesionado por compresion.

Efecto del Láser de Baja Energía sobre la Expresión de GAP-43 (Growth Associated Protein 43) en Nervio Isquiático Lesionado de Rata

El laser infrarrojo se ha utilizado con fines terapeuticos en artritis reumatoide, dolor musculo-esqueletico, enfermedades dentales y oseas. A nivel de lesiones nerviosas, se ha utilizado como coadyuvante en tratamientos conservadores y quirurgicos; sin embargo, no esta claro aun cual es su participacion en los mecanismos moleculares asociados al proceso regenerativo. Varios genes y sus productos de expresion relacionados conregeneracion axonal, estan siendo investigados, entre estos, la proteina GAP-43 (growth associated protein 43) ha sido detectada en diferentes tipos de lesiones de nervios perifericos, donde su expresion aumenta notablemente durante el proceso de recuperacion. Con el proposito de evaluar la expresion del transcrito de GAP-43 en nervio isquiatico de rata lesionado y, posteriormente, irradiados con laser infrarrojo de 2 J/cm2, se evaluo mediante RT- PCR en tiempo real la expresion del transcrito de GAP-43, en nervios lesionados tratados y no tratados. Los resultados indican que el nivel de expresion de GAP-43 en nervio tratado con laser de 2 J/cm2 , es mayor que en el nervio lesionado no tratado. Tambien se observo un aumento de la expresion hasta dos semanas post-tratamiento. Estos resultados sugieren un efecto estimulante del laser infrarrojo de 2 J/cm2 sobre la expresion de GAP-43, en nervio isquiatico de rata lesionado por compresion, lo cual podria estar relacionado con un menor tiempo de regeneracion del nervio.

Immunological Distribution of the Placental Lactogene and IGF-1 Receptor on Free-chorionic Villi of the Newborns Small for Gestational Age Placentae

El objetivo de este estudio fue observar diferencias en la distribucion del lactogeno placentario y receptor del factor de crecimiento similar a la insulina, entre placentas de recien nacidos normales para la edad gestacional AEG y pequenos para la edad gestacional PEG. Un total de 12 placentas de recien nacidos AEG y 12 PEG obtenidas de la maternidad del Hospital de Temuco, Chile fueron procesadas con tecnicas histologicas H&E, azul de Alcian y un metodo de tincion tricromico. La tecnica de inmunoperoxidasa utilizada fue: 1) lactogeno placentario (pohclonal, dilucion 1:200, NCL-PLP, Novocastra) 2) Factor de crecimiento similar a la insulina (monoclonal, dilucion 1:200, NCL-GHR, Novocastra). No se observaron diferencias en la distribucion de lactogeno placentario ni factor de crecimiento similar a la insulina entre las placentas provenientes de recien nacidos pequenos para la edad gestacional y adecuados para la edad gestacional.

Análisis Comparativo del Número de Neurofilamentos en Nervios Isquiáticos de Rata Sometidos a Neuropraxia Tratadas con Láser de Baja Intensidad y Ultrasonido Terapéutico

Es habitual que tras una compresion nerviosa se aplique terapia, ya sea, a traves de laser de baja intensidad (LBI) o ultrasonido (US). El objetivo de este trabajo fue determinar la efectividad de dichos tratamientos para reparar el citoesqueleto neuronal evaluando la variacion en el numero de neurofilamentos. Se realizo un diseno experimental, en el cual se utilizaron 30 ratas que fueron separadas en 6 grupos: 1- control sano; 2- control lesionado; 3- irradiado con LBI 2J/cm2; 4- irradiado con LBI 10 J/cm2; 5- irradiado con US 0,5W/cm2 y 6- irradiado con US 1W/cm2. Con excepcion del grupo 1 los especimenes fueron anestesiados y se les realizo la compresion del nervio isquiatico derecho utilizando una presion de 40N durante 45 segundos. Veinticuatro horas despues de la compresion se inicio la irradiacion con LBI y US, segun protocolo. En nuestra investigacion constatamos que el incremento en el numero de neurofilamentos se relaciono con la dosis aplicada de LBI y US. El valor medio de neurofilamentos/0,25 mm2 obtenidos en cada grupo fue: 1 - 128; 2 - 100; 3 - 156; 4 - 140; 5 - 100; 6 - 148. La aplicacion de LBI de y de US terapeutico aumenta el numero de neurofilamentos en nervios isquiaticos de rata sometidos a neuropraxia, siendo el LBI mas eficaz en comparacion al US. Se agrega que estas terapias para inducir la regeneracion del nervio lesionado se relacionan al tipo de protocolo utilizado, lo que demuestra la necesidad de establecer la adecuada dosis de irradiacion con el proposito de obtener la mejor respuesta terapeutica.

Efecto de Estimulaciones Infrarrojas sobre Hepatoesteatosis Microvesicular Alcohólica de Ratas

24 ratas hembras de 4 meses de vida con peso aproximado de 250 gramos fueron divididas en dos grupos de animales, A y B. Ambos grupos se mantuvieron con pellet y solucion de alcohol 40% durante 60 dias generandoseles una hepatoesteatosis microvesicular. Los higados de los animales pertenecientes al grupo B fueron estimulados con laser infrarrojo 6 J/cm2 durante 15 dias consecutivos. Posteriormente, las ratas fueron sacrificadas y se extrajeron muestras de higado y luego procesadas para microscopia electronica de transmision. De ambos tipos celulares se obtuvieron microfotografias electronicas de transmision con aumentos finales de 8.500 X, las cuales fueron sometidas a estudios morfometricos para determinar fracciones volumetricas de los siguientes componentes celulares: Reticulo endoplasmatico rugoso (RER), mitocondrias, inclusiones lipidicas y de glicogeno, eu y heterocromatina. De igual manera se cuantificaron las areas celulares y nucleares. Del analisis de los resultados entre hepatocitos esteatosicos e irradiados se visualiza que existen diferencias en todos los componentes celulares cuantificados y se concluye que los efectos de la estimulacion infrarroja con dosis de 6 J/cm2 provoca en los hepatocitos con esteatosis microvesicular transformacion en su ultraestructura y en su morfologia, fundamentalmente en la disminucion acentuada de las infiltraciones lipidicas hasta en un 80% situacion que se traduciria, en una variacion funcional, representando de esta manera un efecto evidente que estas inducciones infrarrojas generan.

Análisis morfométrico del efecto del láser infrarrojo sobre hepatocitos de rata

El laser infrarrojo emitido por el diodo Arsenurio de Galio (904 nm) proporciona terapia a lesiones articulares por su accion analgesica, cicatrizante y antiinflamatoria, promoviendo a nivel celular sintesis de ATP mitocondrial, modulacion de canales de calcio, activando el proceso mitotico e incremento en la sintesis de DNA y de proteinas. Para determinar las dosis que estimulen componentes celulares involucrados en sintesis proteica, del higado de ratas fueron tomadas muestras de tejido normal e irradiado mediante laser infrarrojo con 1, 2, 4, 8 y 16 Joules/cm2 durante 15 dias consecutivos. Fueron tratadas para microscopia electronica de transmision y se obtuvieron micrografias con aumentos de 10.000 X. Se realizaron estudios morfometricos, cuantificandose las fracciones volumetricas de nucleos, citoplasma, reticulo endoplasmatico rugoso (RER), inclusiones de glicogeno, nucleolos, eucromatina y heterocromatina, relacion nucleo- citoplasmatica y las areas celulares y nucleares. Los resultados del presente estudio que compara hepatocitos normales e irradiados, indican que existen diferencias significativas en todos los parametros evaluados. Se concluye que los hepatocitos estimulados alteran su morfologia y por ende sus componentes celulares, modificando la funcion celular determinandose con exactitud la dosis de estimulacion infrarroja donde estas celulas presentan un mayor desarrollo de su maquinaria citoplasmatica involucrada en sintesis de proteinas.

Estudio Comparativo entre Dos Intensidades de Ultrasonido Continuo en la Reparación del Nervio Espinal Lesionado por Compresión

El ultrasonido continuo fundamenta su efectividad en la energia termica que genera, favoreciendo la reparacion nerviosa. Es por esto que surge la interrogante de que si al aplicar diferentes intensidades de ultrasonido continuo sobre el nervio espinal lesionado, la respuesta reparativa sera igual o distinta. Para ello se utilizaron 12 ratas de sexo masculino a las que se les aislo quirurgicamente el nervio isquiatico, el cual fue pinzado durante 45 segundos con una fuerza constante de 40N. La compresion se realizo a 10mm sobre la bifurcacion, luego se desinfecto y suturo. Inmediatamente despues de la operacion las ratas fueron agrupadas de a 3: A) control sano, B) control lesionado, C) aplicacion de ultrasonido terapeutico de 0,5w/cm2 y D) aplicacion de ultrasonido terapeutico de 1w/cm2. El grupo A se utilizo como control sano y no recibio irradiacion. Las ratas del grupo B fueron lesionadas y no recibieron irradiacion y las del grupo C y D fueron lesionadas e irradiadas transcutaneamente en la region correspondiente al recorrido del nervio isquiatico utilizando intensidades de 0,5w/cm2 y 1w/cm2, 3 MHZ de frecuencia, un cabezal de 0,5cm2, durante 1 minuto y 10 dias consecutivos. 28 dias post operatorio se extrajeron los nervios isquiaticos y fueron sometidos a tecnicas de tincion de H-E y Van Gieson. Se realizo el diagnostico histopatologico y la morfometria: se midio el Grosor del Perineuro, Perimetro del nucleo del Schwannocito, Perimetro del Axon Mielinicoy Perimetro de la Mielina. Los resultados revelan que el ultrasonido continuo es efectivo en la reparacion del nervio espinal, siendolo mas con 1w/cm2 que con 0,5w/cm2.

Análisis Morfométrico Ultraestructural de Células Normales de Glándula Parótida de Rata

A partir de 10 ratas hembras con un peso aproximado de 250 g y 4 meses de vida, fueron obtenidas quirurgicamente muestras de glandula parotida las que se trataron con tecnicas de microscopia electronica de transmision para posteriormente obtener microfotografias de celulas parotideas con aumentos finales de hasta 21300 X. En las citadas microfotografias se aplicaron tecnicas morfometricas con el objetivo de cuantificar las fracciones volumetricas que los distintos componentes ocupan en estas celulas normales, describiendo de esta manera sus volumenes y relacionandolos con la funcionalidad que desempenan en esta celula normal. Se evaluaron las fracciones volumetricas pertenecientes a: citoplasma, nucleo, mitocondrias, reticulo endoplasmatico rugoso (RER), granulos de zimogeno, eu y heterocromatina. De igual forma, se cuantifico las areas celulares y nucleares. Contando con los datos numericos producto de la evaluacion morfometrica de sus componentes se podra determinar el patron de distribucion de sus organelos y de funcionalidad de esta celula activa en la sintesis y secrecion de proteinas representada por los granulos de zimogeno de diastasa y diversas proteinas salivales.

Persistencia de los Efectos del Láser Infrarrojo 6 J/cm² en Hepatocitos de Rata

Higados de ratas Sprague Dawley fueron irradiados con dosis diarias de 6 J/cm2 emitida por el laser AsGa equivalente a 904 nm durante 15 dias De estos animales previamente anestesiados fueron sacrificados transcurridos 5, 10, 30, 45 y 60 dias post irradiacion para posteriormente obtener quirurgicamente muestras de higado y ser procesadas para microscopia electronica de transmision, aplicando tecnicas morfometricas utilizando aumentos de 8.500 X con especial enfasis en cuantificar fracciones volumetricas de componentes celulares con el objetivo de precisar la duracion de las estimulaciones infrarrojas. El analisis de los resultados entre hepatocitos controles e irradiados con dosis de 6 J/cm2 y tiempo de estimulacion infrarroja revela que existen marcadas diferencias entre las fracciones volumetricas de componentes celulares determinantes de funcionalidad celular e involucrados en sintesis proteica, cuantificacion que demuestra claramente que el efecto del laser infrarrojo persiste hasta los 30 dias post estimulacion, evidenciandose modificaciones de organelos que revelan alta funcionalidad, mientras que sobre este tiempo es observada una notable inhibicion de dicha funcionalidad, concluyendose entonces que los efectos de radiacion infrarroja persisten en tiempos precisos provocando en los hepatocitos una drastica transformacion en sus componentes y por ende en su funcionalidad. en estas celulas de elevado metabolismo.