Itamar Antônio Piffer

Comparação de métodos de isolamento de bactérias NAD-dependentes do trato respiratório superior de suínos sadios

Secrecoes nasais, tonsilares e tecido tonsilar foram coletados de 67 leitoes de 9 a 15 semanas de idade, provenientes de tres rebanhos positivos para Actinobacillus pleuropneumoniae (App), e de 50 leitoes provenientes de dois rebanhos negativos. Foram classificados como positivos aqueles rebanhos com isolamento previo de sorotipos 3, 5 e 7 e rebanhos negativos aqueles submetidos a controle veterinario, sem notificacao de sintomas clinicos, lesoes de pleuropneumonia suina e sem isolamento do agente. O material coletado foi submetido a tres diferentes metodos de cultivo: 1- semeadura direta em meio de cultivo solido seletivo; 2- diluicao em caldo seletivo seguido de subsemeadura em meio de cultivo solido seletivo; 3- diluicao em caldo seletivo seguido de subsemeadura em agar sangue. Entre as amostras NAD-dependentes recuperadas 86 foram classificadas como App, 13 como grupo minor e 21 como grupo taxon (C, D, E e F). Dos rebanhos positivos foram recuperadas quatro amostras de App (sorotipos 3, 7 e 12) e 51 nao sorotipificaveis. Dos rebanhos negativos foram recuperadas 31 amostras de App nao sorotipificaveis, indicando que o App faz parte da flora normal do trato respiratorio superior dos suinos. O melhor metodo de isolamento de amostras NAD-dependentes de leitoes portadores foi da biopsia de tecido tonsilar semeado diretamente em meio solido seletivo (PPLO agar adicionado de 2m g de cristal violeta, 10m g NAD, 1m g de lincomicina, 1,4m g de bacitracina por ml).

Comparison of methods for the isolation of NAD-dependent bacteria from the upper respiratory tract of healthy pigs.

Secrecoes nasais, tonsilares e tecido tonsilar foram coletados de 67 leitoes de 9 a 15 semanas de idade, provenientes de tres rebanhos positivos para Actinobacillus pleuropneumoniae (App), e de 50 leitoes provenientes de dois rebanhos negativos. Foram classificados como positivos aqueles rebanhos com isolamento previo de sorotipos 3, 5 e 7 e rebanhos negativos aqueles submetidos a controle veterinario, sem notificacao de sintomas clinicos, lesoes de pleuropneumonia suina e sem isolamento do agente. O material coletado foi submetido a tres diferentes metodos de cultivo: 1- semeadura direta em meio de cultivo solido seletivo; 2- diluicao em caldo seletivo seguido de subsemeadura em meio de cultivo solido seletivo; 3- diluicao em caldo seletivo seguido de subsemeadura em agar sangue. Entre as amostras NAD-dependentes recuperadas 86 foram classificadas como App, 13 como grupo minor e 21 como grupo taxon (C, D, E e F). Dos rebanhos positivos foram recuperadas quatro amostras de App (sorotipos 3, 7 e 12) e 51 nao sorotipificaveis. Dos rebanhos negativos foram recuperadas 31 amostras de App nao sorotipificaveis, indicando que o App faz parte da flora normal do trato respiratorio superior dos suinos. O melhor metodo de isolamento de amostras NAD-dependentes de leitoes portadores foi da biopsia de tecido tonsilar semeado diretamente em meio solido seletivo (PPLO agar adicionado de 2m g de cristal violeta, 10m g NAD, 1m g de lincomicina, 1,4m g de bacitracina por ml).

Avaliação de testes de ELISA para o diagnóstico sorológico de infecções pelos sorotipos 3, 5 e 7 de Actinobacillus pleuropneumoniae em suínos

Compararam-se dois antigenos no teste de ELISA para o diagnostico sorologico dos sorotipos 3, 5 e 7 de A. pleuropneumoniae prevalentes no Brasil. Um compunha-se da fase aquosa da extracao fenolica de suspensao bacteriana (FAF) e o outro de lipopolissacarideos de cadeia longa (LPS-CL). Com esses antigenos foram padronizados ELISAs monovalente e polivalente para os sorotipos prevalentes no Brasil. Com os resultados dos testes de um conjunto de amostras de soro de suinos livres de infeccao para A. pleuropneumoniae e um conjunto de amostras de soro obtidas de leitoes inoculados com os sorotipos citados e que apresentaram soroconversao, determinaram-se as equacoes discriminantes para os conjuntos de soros e compararam-se os testes quanto a distância generalizada de Mahalanobis, ao coeficiente de determinacao, ao teste F, ao coeficiente global, a sensibilidade e a especificidade. Na analise desses parâmetros observou-se que o antigeno FAF foi superior. Com o ELISA PFAF reacoes positivas nao esperadas foram observadas com animais inoculados com os sorotipos heterologos 2 e 9, nao observadas com o PLPS-CL. A sensibilidade dos testes polivalentes ficou entre 91,5 e 95,7% com especificidade similar, indicando que ambos os testes sao adequados para triagem sorologica uma vez que detectam os sorotipos 3, 4, 5, 6, 7 e 8.

Utilização de um teste de ELISA polivalente para detecção de anticorpos contra Actinobacillus pleuropneumoniae (App)

Sera from piglets and sows from 10 positive and 10 negative herds to Actinobacillus pleuropneumoniae (App) were submitted to a polyvalent ELISA test based on long chain lipopolysaccharides (LC-LPS) against sorotypes 3, 5 and 7. Positive herds were those in which a strain of serotype 3, 5 or 7 was isolated and negative those ones in which there were neither notification of clinical symptoms, nor lesions of swine pleuropneumoniae, nor App isolation and all the herds were under veterinary control. All positive herds contained animals that seroconverted and the frequency of sows serologically positive was significantly higher than that of positive piglets. Four negative herds were serologically negative, but five herds had sows considered positive with high positive predictive values (96 to 99%) and one herd had a positive predictive value of 56%. The polyvalent ELISA LC-LPS to App serotypes 3, 5 and 7 had 100 % of sensibility but apparently low specificity. The sensibility of the polyvalent test and its capability of detecting the prevalent Brazilian serotypes and those with shared LPS antigens (3, 4, 5, 6, 7 e 8) indicates that this test might be used only as a screening test.

Caracterização da virulência da cepa de Escherichia coli - BK99

In order to evaluate the pathogenicity and antimicrobial resistance pattern of BK99 E. coli strain, several tests were assessed: slide agglutination for detection of the fimbriae F5, STa production, hemolytic and colicin activity, pathogenicity assessement using piglet inoculation and antimicrobial resistance to drugs. The strain BK99 showed the following profile: F1+, F5+, STa+, Col V+, Hly-, STR, KAR, NOR, TTR SFR. It produced clinical disease and death of infected piglets. Moreover, it was possible to recover the BK99 strain from diarrheic feces and from the gut contents of the piglet, with high rate of recovery of colonies expressing fimbriae F5+. The present results suggest that the E. coli BK99 strain could produce virulence factors and experimentally reproduce neonatal colibacillosis in pigs.

Estimativa dos índices de pneumonia, pela tosse, e de rinite atrófica, por espirros, em suínos

A study in 64 swine herds was carried out in order to estimate the pneumonia index (PI) and the atrophic rhinitis index (ARI) through the quantification of coughing and sneezing in growing-finishing pigs. In each herd, 60 pigs were evaluated from lodging in the growing-finishing phase up to slaughter. The amount of coughing and sneezing episodes was counted in four opportunities (30, 50 and 80 days after lodging, and three days before slaughter). In each opportunity three counts of two minutes each were made and the percentage of coughing and sneezing was calculated by the average of the three counts in relation to the batch size. At slaughter, for all pig-batches the frequency and severity of lung consolidation and atrophic rinithis were determined and scored. All data were submitted to the Pearson correlation and to the simple regression analyses of the PIe in relationship to the percentage of coughing and ARIe in relationship to the percentage of sneezing. The resulting equation were: PI estimated = 0.35 + (0.11 ´ % of coughing) with R2 = 0.45, and ARI estimated = 0.36 + (0.065 ´ % of sneezing) with R2 = 0.36. It is concluded that the quantification of coughing and sneezing can be used to estimate ARI and PI indexes in growing-finishing pigs.

Padronização de três ELISAs polivalentes com lipopolissacarídeos de cadeia longa dos sorotipos 1 e 5, 2, 3 e 7 ou 10 e 12 de Actinobacillus pleuropneumoniae

Three polyvalent ELISA based on long chain lipopolysaccharides (LC-LPS) were established to detect all prevalent serotypes of Actinobacillus pleuropneumoniae. Samples from a serum bank of experimentally inoculated animals with all serotypes of A. pleuropneumoniae were tested. Antibodies specific to LC-LPS of each serotype were detected. Cross-reactions were observed in the polyvalent ELISA produced with serotypes 1 and 5, with specific antisera to serotypes 9 and 11 due to common somatic antigens presence in serotypes 1, 9, and 11. In the polyvalent with serotypes 2, 3 and 7 reactions were observed with antisera of serotypes 4, 6, and 8, due to the presence of somatic antigens in serotypes 3, 6, and 8 and serotypes 4 and 7. Experimentally infected animals with respiratory agents of swine Mycoplasma hyopneumoniae, Mycoplasma flocculare, and Haemophilus parasuis did not present cross-reactions with the antigens based on LC-LPS.