Jean Boutonnat

Significance of low levels of thyroglobulin in fine needle aspirates from cervical lymph nodes of patients with a history of differentiated thyroid cancer

OBJECTIVEnMeasurement of thyroglobulin in the washout of lymph node (LN) fine needle aspirates is recommended in the follow-up of patients with differentiated thyroid cancer (DTC). The significance of low fine needle aspirates thyroglobin (FNATg) levels remains a question, which we addressed.nnnMETHODnProspective study comparing FNATg with FNA cytology. Exploration of 34 DTC patients (53 cervical LNs), 26 non-thyroidectomized patients with a thyroid-unrelated cervical mass (negative controls) and 13 with 21 thyroid nodules (positive controls). The 12 DTC patients (19 LNs) with a malignant FNA cytology and/or high FNATg level received LN surgery (11 patients) or I(131)-iodine treatment (1 patient) and the outcome measure was pathological or scintigraphic evidence of DTC LN metastasis.nnnRESULTSnAll 26 negative controls showed FNATg <1 ng/FNA and all 21 positive controls showed high levels of FNATg (127-210,000 ng/FNA, median 38,000). Among DTC patients in 25 LNs with a benign FNA cytology, FNATg was undetectable in 24 and low in 1 (6 ng/FNA); in 19 LNs with a malignant FNA cytology, FNATg was high in 17 (80-140,000 ng/FNA, median 7174 ng/FNA) and low in 2 (6.6 and 7.1 ng/FNA), which proved to be low Tg immunostaining oncocytic DTC metastasis; in 9 LNs with a non-informative cytology, FNATg was undetectable in 8 but 11,825 ng/FNA in 1, which proved a DTC metastasis. Measurement of FNA albumin demonstrated that contamination of FNA by serum proteins was negligible.nnnCONCLUSIONnLow FNATg levels can indicate a DTC metastasis. It cannot be related to clinically relevant levels of serum Tg.

TIMP-1/MMP-9 imbalance in an EBV-immortalized B lymphocyte cellular model: evidence for TIMP-1 multifunctional properties.

Tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs) were initially described as agents controlling metalloproteinase activity. The purpose of this study was to investigate the expression and the roles of TIMP-1 secreted by Epstein-Barr-virus (EBV)-immortalized B lymphocytes. TIMP-1 was isolated from conditioned medium of interleukin (IL)-1beta stimulated EBV-B lymphocytes; purified TIMP-1 was identified by mass spectrometry and immunochemistry. TIMP-1-free MMP-9 was quantified after purification by zymography and enzyme-linked immunosorbent assay. EBV-B lymphocyte-secreted TIMP-1 inhibited MMP-9 gelatinolytic activity resulting in decreased B-cell transmigration as measured in vitro. The release of huge amounts of TIMP-1 in proportion to MMP-9 from B lymphocytes after EBV transformation was shown to be correlated with secretion of IL-10 and dependent on culture time. In contrast, there was little TIMP-1 and almost no IL-10 released from native B cells, suggesting a possible IL-10 mediated autocrine regulation mechanism of TIMP-1 synthesis. The MMP-9/TIMP-1 imbalance observed in the culture medium of EBV-B lymphocytes (TIMP-1>MMP-9) and of native B cells (MMP-9>TIMP-1) is suggestive of a new function for TIMP-1. We propose that TIMP-1 acts as a survival factor controlling B-cell growth and apoptosis through an autocrine regulation process involving IL-10 secreted by EBV-B lymphocytes.

Identification of Amylase Crystalloids in Cystic Lesions of the Parotid Gland

OBJECTIVEnTo identify alpha-amylase crystalloid formations in parotid specimens obtained by fine needle aspiration.nnnSTUDY DESIGNnThe study concerned three cases of sialadenitis with crystalloid formation observed between 1993 and 1998. In one of these cases, transmission electron microscopy, mass spectrometry and measurement of amylase activity were used to characterize the nature of the crystalloids.nnnRESULTSnLight microscopy revealed the same crystalloid structure in all three cases. In one case, where the material was saved, a biochemical method made it possible to reveal high amylase activity, while protein electrophoresis and mass spectrometry were used to identify salivary alpha-amylase.nnnCONCLUSIONnCrystalloids of salivary alpha-amylase can be identified by May-Grünwald-Giemsa and Papanicolaou stain and can be rapidly confirmed through determination of amylase activity.

Adénocarcinome mammaire avec composante neuroendocrine majoritaire

Resume L’existence d’une differenciation neuroendocrine est rapportee dans les adenocarcinomes mammaires, le plus souvent sous la forme de cellules dispersees dans la tumeur, plus rarement sous la forme d’un contingent tumoral a part entiere. Nous rapportons un cas d’adenocarcinome mammaire infiltrant avec un contingent neuroendocrine majoritaire. Huit ans apres avoir beneficie d’un traitement conservateur du sein gauche pour un adenocarcinome infiltrant etiquete « canalaire commun » SBRIII pT2N1M0, une femme de 67 ans, a presente une metastase sternale de morphologie purement neuroendocrine. L’existence d’un lien entre la tumeur mammaire et la metastase osseuse est alors discutee. La relecture de la tumeur mammaire, du curage axillaire gauche et des immunomarquages realises a posteriori ont montre que : a) la tumeur du sein comportait un contingent neuroendocrine de haut grade de malignite, a petites et grandes cellules, synaptophysine +, NCAM + et chromogranine — (80 %) et 2 contingents n’exprimant pas les marqueurs neuroendocrines, metaplasique malpighien (10 %) et canalaire de type commun (10 %) ; b) 4 des ganglions du curage etaient envahis par le contingent de type canalaire commun englobant quelques cellules tumorales NCAM+ mais synaptophysine- ; c) les recepteurs hormonaux et HER2 n’etaient pas exprimes ni dans la tumeur mammaire ni dans les ganglions metastatiques. Nous discutons l’histogenese de ces tumeurs mammaires composites avec differenciation neuroendocrine ainsi que les potentiels evolutifs des differents contingents et les implications pronostiques de ce type de proliferation.

Specific aspects of immunocytochemistry

L’immunocytochimie (ICC) représente une aide non négligeable pour le diagnostic cytologique. Cependant, son utilisation est parfois très limitée au sein des laboratoires d’anatomie et cytologie pathologiques en raison des difficultés de réalisation et de reproductibilité [1]. Une des contraintes majeures qui limite la standardisation et la généralisation de la pratique de l’ICC est représentée par l’importante diversité des échantillons et des préparations cytologiques que l’on rencontre au sein des laboratoires. Le matériel cytologique peut parvenir sous forme de lames de frottis étalés et séchés à l’air par le clinicien ou de liquides frais fixés ou non fixés qui seront traités selon différents protocoles techniques au laboratoire. Les étalements traditionnels qui parviennent directement au laboratoire peuvent poser des difficultés liées à la présence d’amas tridimensionnels. L’interprétation peut être gênée par un bruit de fond important, notamment lors de prélèvements hémorragiques avec une technique de révélation utilisant la peroxydase [2]. Les liquides fixés ou non fixés se prêtent relativement bien à la réalisation de l’ICC sur cytospins, à condition de respecter au préalable certaines règles de réalisation et de conservation des lames. Les prélèvements issus de milieu liquide (technique en couche mince) sont mieux standardisés mais nécessitent également le respect de certaines règles de confection des lames [3]. Enfin, l’inclusion de culots cellulaires en paraffine (cytoblocs) présente l’avantage de mieux standardiser les étapes de la technique qui sera comparable à celle réalisée sur des prélèvements tissulaires mais augmente le délai de réponse.

SymposiumLes particularités de l’immunocytochimieSpecific aspects of immunocytochemistry☆

L’immunocytochimie (ICC) représente une aide non négligeable pour le diagnostic cytologique. Cependant, son utilisation est parfois très limitée au sein des laboratoires d’anatomie et cytologie pathologiques en raison des difficultés de réalisation et de reproductibilité [1]. Une des contraintes majeures qui limite la standardisation et la généralisation de la pratique de l’ICC est représentée par l’importante diversité des échantillons et des préparations cytologiques que l’on rencontre au sein des laboratoires. Le matériel cytologique peut parvenir sous forme de lames de frottis étalés et séchés à l’air par le clinicien ou de liquides frais fixés ou non fixés qui seront traités selon différents protocoles techniques au laboratoire. Les étalements traditionnels qui parviennent directement au laboratoire peuvent poser des difficultés liées à la présence d’amas tridimensionnels. L’interprétation peut être gênée par un bruit de fond important, notamment lors de prélèvements hémorragiques avec une technique de révélation utilisant la peroxydase [2]. Les liquides fixés ou non fixés se prêtent relativement bien à la réalisation de l’ICC sur cytospins, à condition de respecter au préalable certaines règles de réalisation et de conservation des lames. Les prélèvements issus de milieu liquide (technique en couche mince) sont mieux standardisés mais nécessitent également le respect de certaines règles de confection des lames [3]. Enfin, l’inclusion de culots cellulaires en paraffine (cytoblocs) présente l’avantage de mieux standardiser les étapes de la technique qui sera comparable à celle réalisée sur des prélèvements tissulaires mais augmente le délai de réponse.

Les particularités de l’immunocytochimie

L’immunocytochimie (ICC) représente une aide non négligeable pour le diagnostic cytologique. Cependant, son utilisation est parfois très limitée au sein des laboratoires d’anatomie et cytologie pathologiques en raison des difficultés de réalisation et de reproductibilité [1]. Une des contraintes majeures qui limite la standardisation et la généralisation de la pratique de l’ICC est représentée par l’importante diversité des échantillons et des préparations cytologiques que l’on rencontre au sein des laboratoires. Le matériel cytologique peut parvenir sous forme de lames de frottis étalés et séchés à l’air par le clinicien ou de liquides frais fixés ou non fixés qui seront traités selon différents protocoles techniques au laboratoire. Les étalements traditionnels qui parviennent directement au laboratoire peuvent poser des difficultés liées à la présence d’amas tridimensionnels. L’interprétation peut être gênée par un bruit de fond important, notamment lors de prélèvements hémorragiques avec une technique de révélation utilisant la peroxydase [2]. Les liquides fixés ou non fixés se prêtent relativement bien à la réalisation de l’ICC sur cytospins, à condition de respecter au préalable certaines règles de réalisation et de conservation des lames. Les prélèvements issus de milieu liquide (technique en couche mince) sont mieux standardisés mais nécessitent également le respect de certaines règles de confection des lames [3]. Enfin, l’inclusion de culots cellulaires en paraffine (cytoblocs) présente l’avantage de mieux standardiser les étapes de la technique qui sera comparable à celle réalisée sur des prélèvements tissulaires mais augmente le délai de réponse.

Modelling of cell proliferation: nuclear versus membrane labelling

Cell proliferation is a fundamental process involved in growth, development and oncogenesis. Monitoring and quantification of proliferation are essential to analyse the behaviour of cells drug-treated or not. Flow cytometry assessment of cell proliferation requires mathematical models to extract information of interest from fluorescence distributions. Various methods are available for cell cycle analysis, including estimation of cell phase durations and doubling time. In this context, we compare widely used flow cytometric methods based on nuclear labelling (using BrdUrd incorporation in combination with DNA content) to membrane labelling (using intercalating dyes PKH).