Karl Winsauer

Separation of sugars by HPLC with electrochemical detection

ZusammenfassungDa für die Bestimmung von Zuckern nach HPLC-Trennung ein Bedarf an neuen empfindlichen Detektoren besteht, wurde das voltammetrische Verhalten einiger Mono- und Disaccharide untersucht. Nickel-Elektroden erwiesen sich als gut geeignet für dieses Problem. Die Eigenschaften der Elektrode wurden in einem stationÄren System, im flie\enden System und in Kopplung mit der Hochdruckflüssigkeitschromatographie untersucht. Parameter für die Optimierung werden diskutiert und die Anwendungen auf Detektion verschiedener Zucker gezeigt.SummaryIn order to develop new sensitive detectors for the determination of sugars after HPLC-separation, the voltammetric behaviour of several mono- and disaccharides has been investigated. Nickel electrodes turned out to be well suited for this problem. The properties of the electrodes were studied in a stationary system, in a flow-injection system and in combination with high-performance liquid chromatography. Parameters for optimisation are discussed and the application to the detection of several sugars is shown.

Determination of glutathione in biological material by high-performance liquid chromatography with electrochemical detection

Abstract Glutathione in biological samples is extracted by perchloric acid and separated by ion-paier chromatography on a RP-18 phase. In a post-column reaction, glutathione is converted to an isoindole derivative by reaction with o-phthalaldehyde and detected at a galssy carbon electrode at 800 mV v. Ag/AgCl/3 M KCl. The detection limit is 40 pmol of glutathione injected.

The structure of “photobilirubin”

Anaerobic irradiation of bilibrubin in the region of the main absorption band produces the diastereomers of (Z,E)- and (E,Z)-configurations with high quantum yield. The structure of these “photobilirubins” is proven by a chemical correlation with the corresponding diastereomers of biliverdindimethylester characterised before. Their1H-NMR spectroscopic features have been recorded and are discussed.ZusammenfassungAnaerobe Bestrahlung von Bilirubin im Gebiet der Hauptabsorptionsbande ergibt in hoher Quantenausbeute die Diastereomeren der Konfigurationen (Z,E) und (E,Z). Die Struktur dieser „Photobilirubine“ wird durch eine chemische Korrelation mit den entsprechenden bekannten Diastereomeren des Biliverdindimethylesters bewiesen. Die1H-NMR-Daten der Diastereomeren werden diskutiert.

Spurenbestimmung von Penicillin V mittels Hochdruckflüssigkeits-Chromatographie

SummaryA new method for the determination of penicillin V in the nanogram-region is described. Penicillin V is selectively split to 6-aminopenicillanic acid with the enzyme penicillin Vamidase. After HPLC-separation the 6-aminopenicillanic acid is reacted with orthophthalaldehyde and the derivative determined fluorimetrically. The limit of detection is 1 ng penicillin V-potassium using an injection volume of 20 Μl. For the relative standard deviation of the method at a concentration of 1 Μg of penicillin V-potassium/ml a value of 1.7% was found.ZusammenfassungEs wird eine Methode zur Bestimmung von Penicillin V im Nanogrammbereich beschrieben. Penicillin V wird mit dem Enzym Penicillin V-Amidase selektiv zu 6-AminopenicillansÄure gespalten. Nach HPLC-Trennung wird die erhaltene 6-AminopenicillansÄure mit Orthophthalaldehyd umgesetzt und das entstandene Derivat fluorimetrisch bestimmt. Bei einem Einspritzvolumen von 20 Μl wurde eine Nachweisgrenze von 1 ng Kalium-Penicillin V erhalten. Als relative Standardabweichung der Methode wurde für eine Konzentration von 1 Μg Kalium-Penicillin V/ml ein Wert von 1,7% gefunden.

Method for the simultaneous determination of traces of atrazine, pyrazon and lindane for monitoring potable water supplies

When groundwater reservoirs situated in agriculturally used areas are assigned as future potable water supplies, it has to be provided that traces of plant protection agents used in this area can be monitored in this groundwater. A method is described for the simultaneous quantitative determination of atrazine, pyrazon and lindane in potable water at the (sub-)ppb level. An adsorption column filled with Amberlite XAD-2 microporous resin advantageously replaces other preconcentration techniques. The concentrated eluate is analyzed by capillary gas chromatography without further purification. The recovery is 80% for atrazine and lindane at the 0.1 ppb level and 40% for pyrazon (1 ppb). The method was tested using tap water from the public water supply network. The complete procedure including sample preparation, preconcentration by adsorption on a macroporous resin, elution with diethyl ether, evaporation to dryness, addition of internal standard solution and capillary gas Chromatographic analysis is carried out in less than three hours (sample volume: 11).

Extraction and enrichment of chlorinated phenols from surface waters for the determination by capillary-GC/FTIR-spectroscopy

ZusammenfassungEine Methode zur Trennung und substanzspezifischen Erfassung von Chlorphenolen in Wasser im Spurenbereich mittels Capillar-GC/FTIR-Spektroskopie wird beschrieben. Da mindestens 100 ng Substanzmenge zu dosieren sind, um gut strukturierte IR-Spektren zu erhalten, muß die Extraktions- und Anreicherungsmethode einen Konzentrierungsfaktor von 104 bei gleichzeitig hohen Wiederfindungsraten ermöglichen. Eine SE 54-Quarzkapillare wird zur Trennung aller Chlorphenol-Isomeren ohne Derivatisierung verwendet; das Ausmaß der Abnahme an Trennleistung, die durch das FTIRS-Detektionssystem hervorgerufen wird, wird diskutiert. Die Anwendbarkeit eines Thermodesorptions- und Cold-Trap-Injektors zur on-column-Probenaufgabe großer Volumina an Konzentrat mit vorheriger Abtrennung des Lösungsmittels wird untersucht. Ausgehend von 11 Wasserprobe und 10 ppb Konzentrationsniveau werden alle Chlorphenole richtig über ihre IR-Spektren identifiziert; die mittlere Ausbeute liegt bei 90%. Weiterhin wird die Möglichkeit diskutiert, die Identität von Matrixbestandteilen allein aus den IR-Daten zu bestimmen.SummaryA method is presented for the separation and substance-specific determination of chlorinated phenols at trace level in surface waters using capillary-GC/FTIR-spectroscopy. Since an injected amount of at least 100 ng is required to obtain well-structured IR spectra, the extraction and enrichment procedure must provide a concentration factor of 104 and simultaneously high recoveries. The separation of the complete range of chlorinated phenols is performed without derivatisation on a SE54 fused silica WCOT column; the degree of decrease in separation efficiency introduced by the FTIRS detection system is discussed. The applicability of an on-column injection technique using a thermodesorption- and cold trap injector with solvent removal is tested, which allows the injection of large volums of concentrate. Proceeding form 1 l water volume and a 10 ppb concentration level the chlorophenols are correctly identified by their IR spectra and the mean recovery is in the 90% range. Furthermore, the possibility is discussed to obtain information on the identity of matrix components based on IR data only.

Qualitätskontrolle vonα-Acetyldigoxin mit Umkehrphasen-Dünnschichtchromatographie

ZusammenfassungDas dünnschichtchromatographische Verhalten einiger Digitalis Cardenolide wird an neuen Schichtmaterialien untersucht. Durch die Verwendung von reversed phase Platten können brauchbare Auftrennungen erreicht werden. Diese Methode wird für die Qualitätskontrolle von α-Acetyldigoxin angewendet. Die quantitative Bestimmung erfolgt nach Umsetzung zu fluoreszierenden Produkten durch fluorimetrische Direktauswertung.SummaryThe thin-layer chromatographic behaviour of some Digitalis Cardenolides is investigated on new stationary phases. Reversed-phase, thin-layer plates, especially give good resolutions. This method is used for the quality control of α-acetyldigoxin. The quantitative determination is by direct fluorimetric evaluation after conversion to fluorescent products.

Determination of furosine as a measure for irreversibly bound glucose in human fibrinogen

SummaryAn analytical procedure is presented which enables for the determination of irreversibly, nonenzymatic glycation of fibrinogen isolated from human blood. The method is based on determination of furosine, which is formed during hydrolysis of Amadori-products. For validation of the worked out furosine assay, synthesis of Nα-formyl-Nɛ-(desoxy-1-D-fructosyl-1)-Llysine as a model substance and furosine as a calibration standard were necessary. Several hydrolysis experiments showed the extent of furosine formation from fructosyllysine and from human fibrinogen. The increase of fibrinogen glycation by incubation withD-glucose could also be confirmed according to the literature. Using well-known techniques for sampling, work up and in performing reduction and hydrolysis steps, quantitative determination of furosine by high-performance liquid chromatography is possible. By application of the analytical assay, the extent of glycation of human fibrinogen can be analyzed with good precision. Calibration is performed by means of a prepared furosine standard. The practical handling of the method is shown.ZusammenfassungIn der vorliegenden Arbeit wird ein Analysenverfahren vorgestellt, das eine Bestimmung der irreversiblen, nichtenzymatischen Glucosylierung von Fibrinogen aus menschlichem Blut ermöglicht. Die Methode beruht auf der Bestimmung von Furosin, welches während der Hydrolyse von Amadori-Produkten gebildet wird. Für die Validierung der erarbeiteten Furosin-Methode waren die Synthese von Nα-Formyl-Nɛ-(desoxy-1-D-fructosyl-1)-L-lysin als Modell und von Furosin als Eichstandard erforderlich. In Hydrolyseversuchen wurde das Ausmaß der Furosinbildung aus Fructoselysin und Fibrinogen untersucht. In Übereinstimmung mit der Literatur wurde gezeigt, daß es möglich ist, den Glucosylierungsgrad von Fibrinogen durch In-vitro-Inkubation mitD-Glucose zu erhöhen. Die Fibrinogengewinnung aus Blut erfolgte mit bekannten Techniken der Probenahme und Aufarbeitung. Durch Reduktions- (Reaktionsblindwert) und Hydrolyseschritte ist es möglich, Furosin flüssigkeitschromatographisch (UV-Detektion) quantitativ zu erfassen. Durch Anwendung dieses Analysenverfahrens kann das Ausmaß der Glucosylierung von menschlichem Fibrinogen mit guter Reproduzierbarkeit vergleichend erfaßt werden. Die Kalibrierung erfolgt gegen den synthetisierten Furosinstandard. Die praktische Durchführbarkeit wurde gezeigt.

Dependence Of Calibration Curves Obtained From Gram-Schmidt Chromatograms From Experimental Parameters In CGC/FTIRS

The calibration curve for quantitative evaluation of Gram-Schmidt chromatograms (GSC) show a non-linearity in the low concentration region. Systematic experiments revealed, that variation in the baseline height in the GSC is responsible for a shift in the calibration curve. Summarized results are: (1) small changes of baseline introduce relative large errors; (2) this non-linearity must also be considered, when small peaks are measured which are not completely separated from a major one.

Erfassung von chlorierten Phenolen in Herbicid-Säuren mit der Capillar-GC/FTIR-Spektroskopie

SummaryThe on-line combination of capillary-GC using fused silica WCOT columns with FTIR-spectroscopy is applied to the separation and substance-specific determination of chlorinated phenols in chlorinated aryloxyalkanoic acids. Phenols are extracted with diisopropylic ether from aqueous NaHCO3 solution and concentrated by means of a Kuderna-Danish evaporator. GC separation is done in a fused silica WCOT with chemically bonded SE-54. Recoveries are between 90 and 105% at the 100-μg/g concentration level. In commercial 2,4,5-T-acid two tetrachlorophenols and pentachlorophenol were identified with GC/FTIR besides 2,4,5-trichlorophenol. It is shown, that the FTIR-spectrometer is applicable as a molecule-specific detector in respect to spectral detection sensitivity for obtaining unambiguous qualitative information in this group of compounds.ZusammenfassungZur Trennung und substanzspezifischen Erfassung von chlorierten Phenolen in Herbicidsäuren vom Typ der chlorierten Phenoxyalkansäuren wird die Kombination der Capillar-GC mit Quarz-Dünnfilmcapillaren mit der FTIR-Spektroskopie angewandt. Die Phenole werden mit Diisopropylether aus wäßriger NaHCO3-Lösung extrahiert und im Kuderna-Danish-Evaporator eingeengt. Die gaschromatographische Trennung erfolgt in einer Quarzcapillare mit chemisch gebundenem SE-54. Die Wiederfindungsraten — mit FI-Detektion und 3,5-Xylenol als internem Standard ermittelt — liegen zwischen 90 und 105% bei einem Konzentrationsniveau von 100 μ/g. Mit der GC/FTIR wurden in 2,4,5-T-Säuren handelsüblicher Qualität neben dem 2,4,5-Trichlorphenol noch zwei Tetrachlorphenole sowie Pentachlorphenol identifiziert. Es ist gezeigt, daß für eine eindeutige qualitative Aussage das FTIR-Spektrometer von der Nachweisempfindlichkeit her als molekülspezifischer Detektor zur Capillar-GC für diese Gruppe von Verbindungen anwendbar ist.